Die Bestimmung der Reaktivität und Titre von Serum mit einem Hämagglutinations Assay

Bestimmung der Reaktivität und des Titers für Serum mit einem Hämagglutinin-Assay. Eine Glutennation ist eine Reaktion, die zwischen löslichen Antikörpern und partikulären Antigenen stattfindet. Dazu können Zellen gehören oder Moleküle tragen.

Epitope auf der Oberfläche des Trägers ermöglichen es einem Antikörper, den Träger miteinander zu binden und zu vernetzen, was zur Bildung eines komplexen Gitters führt, das als Antigen-Antikörperkomplex bezeichnet wird. Die Hem-Agglutination ist eine spezielle Form der Agglutination, bei der Antikörper an rote Blutkörperchen binden, die als partikuläres Antigen fungieren. Rote Blutkörperchen sind nützliche Ziele, da sie beide leicht verfügbar sind und die Ergebnisse mit bloßem Auge leicht zu erkennen sind.

Die Serumproben werden seriell verdünnt und dann in eine 96-Well-Ubo-Platte gegeben. Anschließend wird eine Suspension der roten Blutkörperchen, Riva-Zellen, zugegeben. Wenn Antikörper in einer hohen Konzentration vorliegen, findet die Bindung an die roten Blutkörperchen statt und bildet ein großes Gitter.

Da sich dieses Gitter durch die Schwerkraft setzt, passt es sich der Form der Ubo-Platte an. Von oben betrachtet ist ein breites Blatt aus roten Blutkörperchen zu sehen. Dies ist eine positive Hämagglutinin-Reaktion.

Wenn die Antikörperspiegel niedrig sind, kann sich kein Gitter bilden, und die roten Blutkörperchen passen sich der Form der UBO-Platte an und konzentrieren sich an der Basis zu einem kleinen Kügelchen. Hierbei handelt es sich um eine negative Saumagglutinationsreaktion. Dieses Diagramm zeigt eine positive Reaktion.

Die Zellen bilden beim Absetzen ein Gitter, sie passen sich der Form der U-Bodenplatte an. Links und rechts sehen wir die Draufsicht, in der ein breites Blatt roter Blutkörperchen zu sehen ist. Wenn eine mittlere Menge an Antikörpern vorhanden ist, wird eine gewisse Buchstabenbildung beobachtet.

Die Hem-Agglutination ermöglicht es auch, die Reaktivität verschiedener Serumproben gegen das bekannte Antigen zu testen. Auch der Titer der Serumprobe kann bestimmt werden. Der Titer ist die letzte Verdünnung, bei der eine positive Reaktion zu sehen war.

Normalerweise ist der Titer umso höher, je höher die Antikörperkonzentration in der Serumprobe ist. Dieses Diagramm zeigt eine negative Saumagglutinationsreaktion. Es sind nicht genügend Antikörper vorhanden, um die roten Blutkörperchen zu vernetzen.

Wenn sich die Zellen durch die Schwerkraft absetzen, gleiten sie an der Seite der Vertiefung hinunter und bilden am Boden ein dichtes Pellet. Das Diagramm rechts zeigt die roten Blutkörperchen in der Ansicht von oben. Für dieses Experiment benötigen Sie eine 1 96-Well-U-Bodenplatte.

Es ist wichtig, dass eine U-Bodenplatte verwendet wird, da flache Bodenplatten es den Zellen nicht ermöglichen, sich zu einem Pellet zu sedimentieren, was eine Interpretation unmöglich macht. Ein Haustier, das in der Lage ist, 50 Mikroliter zu liefern, testet Serum, eine 1%ige Suspension von Riva-Zellen und eine einmalige Lösung von Verone-Puffer-Kochsalzlösung in jede Vertiefung der Reihe. Eine Eins bis eine 12 liefern 50 Mikroliter Roal-Puffer-Kochsalzlösung.

Dieser wird als Verdünnungsmittel verwendet. Geben Sie nun 50 Mikroliter Serum in die Vertiefung A eins. Dies ist Ihre erste Verdünnung in zwei Hälften.

Stellen Sie mit dem Perpet sicher, dass die Serumprobe gründlich gemischt ist. Nach dem Mischen 50 Mikroliter aus Vertiefung A eins entnehmen und in Vertiefung A zwei überführen. Dies ist Ihre zweite Eins-zu-Zwei-Verdünnung, was Ihnen eine Verdünnung von vierfach ergibt.

Setzen Sie diese Verdünnungsreihe mit den Vertiefungen drei bis 11 fort. Geben Sie kein Serum in, nun ja, 12, da dies Ihre Roal-Puffer-Kochsalzlösung Negativkontrolle ist. Nehmen Sie nun Ihre 1%Suspension aus Riva-Zellen, die gründlich durchmischt wurde, und überführen Sie 50 Mikroliter in, nun ja, eine Eins bis Vertiefung A 12.

Sobald die Zellen hinzugefügt wurden, decken Sie die Platte ab und klopfen Sie vorsichtig auf die Platte, um sicherzustellen, dass die Proben und die Zellen vermischt sind. Inkubieren Sie nun bei 37 Grad für 60 Minuten. Ein befeuchteter Inkubator ist geeignet.

Während der 60-minütigen Inkubationszeit finden Antigen-Antikörper-Wechselwirkungen statt und die Zellen beginnen, sich anzusiedeln. Das Videomaterial, das Sie sich ansehen, ist eine Zeitrafferfotografie des gesamten 60-minütigen Zeitraums. Dies ist eine Nahaufnahme der Bohrlöcher fünf bis 10.

Wir haben bereits, nun ja, 12 untersucht, was Ihre VBS-Steuerung in diesem Fall war. Nun, die Zellen hatten ein enges Pellet gebildet, was darauf hindeutet, dass der Assay ordnungsgemäß funktioniert hatte. Die Vertiefungen fünf und sechs sind Beispiele für eine positive Saumagglutination.

Nun, sieben ist ein Beispiel für ein intermediäres Agglutinationsergebnis, während die Wells acht, neun und 10 negativ für die Saumagglutination sind. Basierend auf diesem Ergebnis würde der Titer auf der Grundlage der Verdünnung für die Vertiefung sieben bestimmt werden, da dies die letzte Vertiefung war, in der eine positive Reaktion beobachtet wurde.