Name: Primären humanen bronchialen Epithelzellen aus Explantaten Grown (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-03-26T17:10:00.000+00:00
Duration: 14 min 32 s
Description: Erfahren Sie eine Methode zur Kultivierung primärer humaner bronchialer Epithelzellen aus frisch isolierten Bronchialsegmenten mit Luft-Flüssig-Grenzfläche. Dieses Protokoll ermöglicht reproduzierbare Ergebnisse für die Lungenforschung.

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Die Autoren sind sehr dankbar, dass Dr. Richard Inculet für die Bereitstellung der bronchialen Gewebe. Research Ethics Board Genehmigungen wurden vom St. Josefs Healthcare Hamilton und der University of Western Ontario / London Health Sciences Centre (Dr. David McCormack), Tissue and Archives Committee, Department of Pathology erhalten. Wir danken auch Ernie Spitzer (Electron Microscopy, McMaster University) für die Bereitstellung von TEM unserer ALI Kulturen und Daniela Farkas für die Bereitstellung einiger der Materialien für die Immunfärbung benötigt. Diese Arbeit wurde von einem Block Begriff Zuschuss von der Ontario Thoracic Society finanziert werden; Dr. Asma Yaghi wurde durch ein Stipendium FSORC, St. Joseph Healthcare, Hamilton, Ontario, Kanada unterstützt.

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<li>Mattinger, C., Nyugen, T., Schafer, D., Hormann, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+serum-free+culture+conditions+for+primary+human+nasal+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Hyg.+Environ.+Health%22%5BJournal%5D)">Evaluation of serum-free culture conditions for primary human nasal epithelial cells.</a> Int. J. Hyg. Environ. Health. 205, 235-238 (2002).</li>
<li>Freshney, R. I. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFreshney%2C+RI+%22Culture+of+epithelial+cells%22">Culture of epithelial cells</a>. Freshney, R. I. , Wiley-Liss, Inc. New York. 1-23 (1992).</li>
<li>Freshney, R. I. Normal human bronchial epithelial cell cultures in Culture of specialized cells series. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFreshney%2C+RI+%22Culture+of+epithelial+cells%22">Culture of epithelial cells</a>. Freshney, R. I. , Wiley-Liss, Inc. New York. 181-196 (1992).</li>
</ol>

In dieser Studie stellten wir detaillierte Methoden für die Kultur-und Ausbau von primären humanen bronchialen Epithelzellen. Wir haben gezeigt, wie Explantate und Transplantationen von bronchialen Gewebe, in Medien, die Epithelzellen Wachstum zu fördern kultiviert, kann eine kontinuierliche Quelle der menschlichen Epithelzellen der Atemwege für Studien nichtgetrennte (unter Wasser) und differenziert (angebaut an den Luft-Flüssigkeit-Grenzfläche) Zelle Modelle bieten . Diese Zellen können in Drogentests Systeme genutzt ...

Weitere Anforderungen: Inkubator, biologische Sicherheitswerkbank (BSC), Zentrifuge, 100mm Kulturplatten, sterilen Röhrchen (15 ml, 50 ml und 2 ml), sterile Pipettenspitzen, Skalpell Griff und Klingen, kleine scharfe Schere, Kittel und Handschuhe. Diese können Sie bei Ihrem bevorzugten Lieferanten bezogen werden.

primären humanen bronchialen epithelzellen aus explantaten grown

Primary Human Bronchial Epithelial Cells Grown from Explants

Menschliche bronchialen Epithelzellen sind für die Zell-Modelle von Krankheiten benötigt werden, und die Wirkung von Hilfsstoffen und pharmakologische Mittel zur Funktion und Struktur des menschlichen Epithelzellen zu untersuchen. Hier haben wir im Detail beschreiben die Methode der wachsenden bronchialen Epithelzellen der Bronchien Atemwege Gewebe, das durch den Chirurgen zu den Zeiten der Lungenchirurgie (zB Lungenkrebs oder Lungenvolumenreduktion Chirurgie) geerntet wird. Mit Ethik Genehmigung und Einwilligung, nimmt der Chirurg, was für Pathologie benötigt und bietet uns eine bronchiale Teil, der fern von der erkrankten Bereiche ist. Das Gewebe wird dann als eine Quelle der Explantate, die für den Anbau von primären bronchialen Epithelzellen in Kultur verwendet werden können verwendet. Bronchial-Segmente über 0,5-1cm lang und ≤ 1 cm im Durchmesser sind mit kaltem EBSS und überschüssiges Drüsengewebe entfernt wird gespült. Segmente sind aufgeschnitten und Hackfleisch in 2-3mm<sup&gt; 3</sup&gt; Gewebestücke. Die Stücke sind als Quelle von primären Zellen verwendet. Nach der Beschichtung 100mm Kultur-Platten für 1-2 Stunden mit einer Kombination aus Kollagen (30 pg / ml), Fibronektin (10 ug / ml) und BSA (10 ug / ml) werden die Platten in 4-5 Bereichen und Gewebe zerkratzt Stücke in die verkratzten Stellen platziert sind, dann Kulturmedium (DMEM / Ham F-12 mit Zusätzen) für epithelialen Zellwachstums wird hinzugefügt und die Platten werden in einem Brutschrank bei 37 ° C in 5% CO<sub&gt; 2</sub&gt; Befeuchtete Luft. Das Kulturmedium wird alle 3-4 Tage. Die Epithelzellen wachsen die Stücke bilden ca. 1,5 cm Durchmesser Ringe in 3-4 Wochen. Explantate kann bis zu 6-mal, indem sie in neue Pre-beschichteten Platten wieder verwendet werden. Die Zellen sind aufgehoben mit Trypsin / EDTA, gebündelt, gezählt und in T75 Zelle binden Flaschen wieder beschichtet, um ihre Zahl zu erhöhen. T75 Flaschen ausgesät mit 2-3 Millionen Zellen zu 80% Konfluenz in 4 Wochen wachsen. Expanded primären humanen epithelialen Zellen können kultiviert und dürfen auf Luft-Flüssigkeit-Grenzfläche zu unterscheiden. Hier beschriebenen Methoden bieten eine reiche Quelle der menschlichen bronchialen Epithelzellen von frisch isolierten Geweben und damit für das Studium dieser Zellen als Modelle von Krankheiten und für Pharmakologie und Toxikologie-Screening.

Hier beschreiben wir eine detaillierte Verfahren zur Züchtung von primären humanen bronchialen Epithelzellen aus Explantaten des menschlichen bronchialen Atemwege Gewebe einschließlich differenzierter Wachstum auf einer Luft-Flüssigkeit-Grenzfläche. Diese Methode bietet eine reichhaltige Quelle von primären Zellen zur Untersuchung der Rolle der Atemwegsepithel in der menschlichen Lunge Gesundheit und Krankheit.

Primären humanen bronchialen Epithelzellen aus Explantaten Grown

Humane bronchiale Epithelzellen werden für Zellmodelle von Erkrankungen sowie zur Untersuchung der Wirkung von Hilfsstoffen und pharmakologischen Wirkstoffen auf die ...

In diesem Artikel beschreiben wir ein Protokoll zum Wachstum und zur Vermehrung menschlicher bronchialer Epithelzellen aus frisch isolierten menschlichen Bronchialsegmenten. Dieses Protokoll besteht aus fünf Abschnitten: Kodieren und Kratzen, hundert Millimeter Kulturplatten, Reparatur des Bronchialgewebes, Explantation von Bronchialgewebetransplantaten, Passage von wachsenden cilierten menschlichen bronchialen Epithelzellen, menschliche bronchiale Epithelzellen auf Transwell-Kammern. Vor Beginn ist zu beachten, dass alle Schritte im biologischen Sicherheitswerk durchgeführt werden.Sofern nicht anders angegeben, lesen Sie bitte den Abschnitt zu Materialien, Reagenzien und Vorbereitung und vergewissern Sie sich, dass Sie grundlegend vorbereitet sind. Die folgenden Schritte – Kodierung, Kultur von Stammlösungen, Medium, Dissoziationlösungen, Beschichtung und Kratzen – sollten in der bst durchgeführt werden. Kulturschalen mit hundert Millimetern Durchmesser sollten in der bst vorbereitet werden.Halten Sie alles steril. Stellen Sie sterile 100-mm-Kulturplatten und Beschichtungslösung bereit. In der BST-Pipette werden zwei Milliliter Beschichtungslösung in einer 100-mm-Platte geschwenkt

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Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Nasen Epithelzellen, durch oberflächliche Schürf Biopsie der menschlichen Freiwilligen erhalten, werden erweitert und auf Gewebekultureinsätze übertragen. Nach Erreichen der Konfluenz werden die Zellen an der Luft Flüssigkeit-Grenzfläche angebaut, was Kulturen der Wimper und nicht-Geißelzellen. Differenzierte Nasen epithelialen Zellkulturen bieten tragfähige experimentelle Modelle für die Untersuchung der Schleimhaut der Atemwege.

Die Kultivierung der menschlichen Nasen Epithelzellen an der Air flüssig-Grenzfläche

Diese Veröffentlichung demonstriert Methoden zur erfolgreichen Probenahme und Kultivierung der Nasenepithelschleimhaut von Kindern und zur Reprogrammierung dieser Zellen zu induzierten pluripotenten Stammzellen (iPSCs).

Pflegen Primäre Nasenepithelzellen von Kindern und umprogrammieren in induzierte pluripotente Stammzellen

Primäre menschliche Bronchialepithelzellen sind schwer zu transduzieren. Dieses Protokoll beschreibt die Produktion von Lentiviren und deren Konzentration sowie die optimalen Kulturbedingungen, die notwendig sind, um in diesen Zellen während der Differenzierung zu einem pseudostratifizierten Epithel hocheffiziente Transduktionen zu erzielen.

Optimale Lentivirus Produktion und Zellkulturbedingungen notwendig für eine erfolgreiche transduzieren primären humanen bronchialen Epithelzellen

Dieser Artikel bietet eine detaillierte Methodik für Gewebedissoziation und zelluläre Fraktionierungsansätze, die die Anreicherung lebensfähiger Epithelzellen aus proximalen und distalen Regionen der menschlichen Lunge ermöglichen. Hierin werden diese Ansätze für die funktionelle Analyse von Lungenepithel-Vorläuferzellen durch den Einsatz von 3D-Organoid-Kulturmodellen angewendet.

Isolierung und Anreicherung menschlicher Lungenepithel-Vorläuferzellen für Organoidkulturen

Hier beschreiben wir die Isolierung, Amplifikation und Differenzierung von primären humanen Nasenepithelzellen (HNE) an der Luft-Flüssigkeits-Schnittstelle und ein Biobanking-Protokoll, das es ermöglicht, erfolgreich einzufrieren und dann verstärktes HNE aufzutauen. Das Protokoll analysiert die elektrophysiologischen Eigenschaften differenzierter HNE-Zellen und die CFTR-bezogene Chloridsekretionskorrektur bei verschiedenen Modulatorbehandlungen.

Primäre humane Nasennebenhöhlen: Biobanking im Kontext der Präzisionsmedizin

Das Protokoll stellt eine Methode vor, um menschliche Lungenorganoide aus primärem Lungengewebe abzuleiten, die Lungenorganoide zu erweitern und eine proximale Differenzierung zu induzieren, um 3D- und 2D-Atemwegsorganoide zu erzeugen, die das menschliche Atemwegsepithel originalgetreu phänokopieren.

Etablierung menschlicher Lungenorganoide und proximale Differenzierung zur Erzeugung reifer Atemwegsorganoide

Das vorliegende Protokoll beschreibt humane induzierte pluripotente Stammzell-abgeleitete alveoläre Epithel-ähnliche Zellen (iAT2s) vom Typ 2. Diese Zellen können als selbsterneuernde Kugeln in 3D-Kultur kultiviert oder an die Luft-Flüssigkeits-Interface-Kultur (ALI) angepasst werden.

Erzeugung von 3D-Kugeln und 2D-Luft-Flüssig-Grenzflächenkulturen von humanen induzierten pluripotenten Stammzell-abgeleiteten alveolären Epithelzellen vom Typ 2

Jüngste Fortschritte bei humaninduzierten pluripotenten Stammzelldifferenzierungsprotokollen ermöglichen die schrittweise Ableitung organspezifischer Zelltypen. Hier stellen wir detaillierte Schritte zur Erhaltung und Expansion von iPSC-abgeleiteten Atemwegsbasalzellen und deren Differenzierung zu einem mukoziliären Epithel in Luft-Flüssigkeits-Grenzflächenkulturen zur Verfügung.

Erzeugung von Atemwegs-Epithelzell-Luft-Flüssig-Grenzflächenkulturen aus humanen pluripotenten Stammzellen

In dieser Arbeit wird eine reproduzierbare, kostengünstige und robuste Methode zur Isolierung und Expansion von primären Bronchialepithelzellen für das langfristige Biobanking und die Erzeugung differenzierter Epithelzellen durch Kultur an der Luft-Flüssigkeits-Grenzfläche vorgestellt.

Isolierung von Bronchialepithelzellen aus reseziertem Lungengewebe für Biobanken und Etablierung gut differenzierter Luft-Flüssigkeits-Grenzflächenkulturen

Die Grenzflächenkultur zwischen Luft und Flüssigkeit wird häufig verwendet, um pseudostratifiziertes Atemwegsepithel zu entwickeln, indem primäre normale menschliche Bronchialepithelzellen differenziert werden, die die apikale Seite der Lungenatemwege nachahmen. Hier beschreiben wir ein einfaches Protokoll zur Bestimmung seiner Qualität durch Überwachung seiner biophysikalischen Eigenschaften, wie z. B. der Ziliarfunktion und der Membranintegrität.

Bestimmung der Ziliarfunktion und Membranundurchlässigkeit des pseudostratifizierten Lungenepithels der Atemwege

Erfahren Sie eine Methode zur Kultivierung primärer humaner bronchialer Epithelzellen aus frisch isolierten Bronchialsegmenten mit Luft-Flüssig-Grenzfläche. Dieses Protokoll ermöglicht reproduzierbare Ergebnisse für die Lungenforschung.

Primären humanen bronchialen Epithelzellen aus Explantaten Grown

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