Name: Die Messung der 50% Hämolytische Complement (CH 50) Aktivität von Serum (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-03-29T18:05:00.000+00:00
Duration: 8 min 26 s
Description: Lernen Sie die CH 50-Methode zur Quantifizierung der Komplementaktivität in Serumproben durch Hämolysedilutionen. Diese Technik ermöglicht Immunologen die Bewertung klassischer Signalwege.

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Der Autor bedankt sich bei Frau Lora Matthews für die Durchführung der Technik und Herr Paul Shepherd für Kinematographie danken. Dieses Projekt wurde von der University of South Australia, Laboratoriumsmedizin Programm gefördert.

Vorbereitung von 5x Veronal Buffered Saline (VBS) <ol><li> Zur Vorbereitung der Veronal-gepufferte Kochsalzlösung (VBS), müssen drei separate Lösungen vorbereitet werden. </li><li> Bereiten Sie die Lösung 1 durch Auflösen 21.25gm von NaCl und 0.94gm von Sodium barbiturathaltiges Mittel in 350ml destilliertem Wasser. Die Endkonzentrationen von NaCl und Natrium barbiturathaltiges Mittel sind 1,02 M und 13mm bzw.. </li><li> Bereiten Sie die Lösung 2 durch Lösen 1.44gm von barbiturathaltiges Mittel in 125ml destilliertem Wasser heiß. Die Endkonzentration der barbiturathaltiges Mittel ist 62.5mm. </li><li> Bereiten Lösung 3 durch Auflösen 20.33gm von MgCl 2 und 4.41gm von CaCl 2 in 100 ml destilliertem Wasser. Die Endkonzentration von MgCl 2 und CaCl 2 ist 2,18 m und 440 jeweils. </li><li> Mix-Lösungen 1 und 2 und auf Raumtemperatur abkühlen. </li><li> Sobald die kombinierte Lösung abgekühlt ist, fügen Sie 1,25 ml der Lösung 3 und pH-Wert auf 7,3-7,5 mit 1 M HCl. </li><li> Passen Sie das endgültige Volumen auf 500 ml mit destilliertem Wasser auf einem 5-fach Stammlösung. </li><li> So bereiten Sie eine 1x funktionierende Lösung, verdünnte die Aktie im Verhältnis 1:5 mit destilliertem Wasser. </li></ol> Sensibilisierung von Schafs-Erythrozyten mit Hämolysin <ol><li> Bereiten Sie das Hämolysin, indem zunächst Verdünnung 1:50 mit VBS </li><li> Um 4 ml SRBC hinzufügen 6ml des VBS und vorsichtig durch Umdrehen mischen </li><li> Zentrifugation bei 600g x 5 Minuten </li><li> Überstand verwerfen und die Zellen weitere 2 Mal </li><li> Nach dem letzten Waschen Zentrifuge die Zellen bei 900g x 5 Minuten, um die Zellen-Pack </li><li> Überstand verwerfen und Zellen in ausreichender VBS zu einer 10% igen Lösung, dh 0,5 ml gepackte Zellen herzustellen, sind in 5 ml Puffer </li><li> Tropfenweise das gleiche Volumen von Hämolysin (Kaninchen Anti-Schaf-Erythrozyten-Antikörper), um die Zellen während wirbelnde kontinuierlich </li><li> Inkubation bei 30 ° C für 30 Minuten in einem Wasserbad </li><li> Vorsichtig mischen die Zellen alle 15 Minuten </li><li> Sensibilisiert SRBC kann über Nacht bei 4 ° C gelagert werden </li></ol> CH 50-Test <ol><li> Label eine Reihe von Röhren in zweifacher Ausfertigung mit 1:8, 1:16, 1:32, 1:64 und 1:128. </li><li> Bereiten Sie eine Reihe von zwei fache serielle Verdünnungen von Kontroll-und Test-Serum in VBS jeweils im Doppel </li><li> Start bei 1:4 (100ml Serum + 300ml VBS) und Transfer 200ml Probe in den nächsten markierten Röhre. </li><li> Nach gründlichem Mischen zwischen Verdünnungen und Transfer 200ml zum nächsten Verdünnung mit einer frischen Pipettenspitze. </li><li> Wiederholen, bis alle fünf Verdünnungen hergestellt werden. </li><li> Discard 200ml von der endgültigen 1:128 Verdünnung. </li><li> Add 200 ml suspendiert sensibilisiert SRBC allen Rohren. </li><li> Label zwei getrennten Röhren als BLANK und fügen 200ml sensibilisierter SRBC + 200ml VBS. Diese Rohre messen spontane Lyse der SRBC im VBS. </li><li> Label anderen zwei getrennten Röhren als TOTAL Lyse und fügen Sie 200 ml sensibilisiert SRBC + 200ml destilliertem Wasser. </li><li> Vorsichtig mischen allen Rohren. </li><li> Bei 37 ° C für 30 Minuten in einem Wasserbad Mischen nach 15 Minuten. </li><li> Zentrifugieren Sie die Proben bei 1.500 g für 5 Minuten in das Sediment des RBC. </li><li> Transfer 100ml Überstand aus jeder Röhre ein gut in einer 96-well ebenen Bodenplatte. </li><li> Add 100 ml destilliertem Wasser in jede Vertiefung. </li><li> Lesen Sie die Absorption der Proben bei 540 nm mit einer Platte Spektralphotometer. </li></ol> Berechnungen <ol><li> Berechnen Sie die mittlere Absorption für jede Probe </li><li> Subtrahieren Sie die BLANK Absorption (spontane Lyse) von allen Proben </li><li> Berechnen Sie den% Lyse für jede Verdünnung mit folgender Formel: <img src="/files/ftp_upload/1923/1923eq1.jpg" alt="Gleichung" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Gleichung"></li><li> Zeichnen Sie die prozentuale Lyse (vertikale Achse) gegen die Serumverdünnung auf der horizontalen Achse. </li><li> Berechnen Sie die Verwässerung für die 50% ige Hämolyse für die Steuerung und Testserum (Abb. 2) benötigt. </li></ol> Repräsentative Ergebnisse: Das Video enthält ein Beispiel für repräsentative Ergebnisse. In der Praxis wird ein Kontrollserum auch zur gleichen Zeit wie die Testserum geführt und ist in der gleichen Weise behandelt. Below (Tabelle 1) Sample-Daten aus einer getesteten Serumprobe. Die Daten werden nach der Gleichung in 5.3 vorgestellt manipuliert. <table border="1"><tbody><tr><td> Probe </td><td> OD 540 </td><td> Bedeuten </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Leer </td><td> 0,042, 0,044 </td><td> 0,043 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Insgesamt Lyse </td><td> 0,183, 0,183 </td><td> 0,183 </td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="5"></td></tr><tr><td> Verdünnung </td><td> OD 540 </td><td> Bedeuten </td><td> Mean-Blank </td><td> % Lysis </td></tr><tr><td> 01.08 </td><td> 0,200, 0,219 </td><td> 0,210 </td><td> 0,168 </td><td> 116 </td></tr><tr><td> 01.16 </td><td> 0,179, 0,173 </td><td> 0,176 </td><td> 0,134 </td><td> 93 </td></tr><tr><td> 01.32 </td><td> 0,134, 0,110 </td><td> 0,122 </td><td> 0,08 </td><td> 55 </td></tr><tr><td> 1:64 </td><td> 0,053, 0,066 </td><td> 0,059 </td><td> 0,017 </td><td> 12 </td></tr><tr><td> 1:128 </td><td> 0,044, 0,045 </td><td> 0,045 </td><td> 0,003 </td><td> 2 </td></tr></tbody></table><img src="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1923/1923fig1.jpg" alt="Abbildung 1"> Abbildung 1. Die Aktivierung des klassischen Komplementweges. Der klassische Weg wird durch die Bindung Immunglobulin-M (IgM) oder Immunglobulin-G (IgG) auf der Oberfläche einer Zielzelle aktiviert. Der Fc-Teil des Ab bindet C1q, ist C1r aktiviert und dies wiederum aktiviert ein anderes Molekül C1r die zusammen aktivieren zwei Moleküle C1s. C1s spaltet C4 nun die Bindungsstelle für C2, die ebenfalls gespalten wird entlarvt. Die Bindung von C4b und C2a führt zur Bildung eines Komplexes bezeichnet als C3-Konvertase. Dieser Komplex jetzt spaltet C3 bildet C3a und C3b, von denen einige mit dem C3-Konvertase Bildung einer C5 Konvertase kombinieren. Dieser Komplex wirkt nun auf C5, mit den daraus resultierenden C5b Bindung an C6 initiieren die Bildung der Membran-Angriffs-Komplex (MAC). C5b6 wirkt auf C7, was wiederum wirken auf C8 und letztlich auf C9, was zur Bildung des endgültigen MAC. (Goldsby et al, 2003). <img src="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1923/1923fig2.jpg" alt="Abbildung 2"> Abbildung 2. Plotten von Sample-Daten und die Berechnung der CH50 für eine Steuer-und Testserumprobe. (A), sind die berechneten Prozentsatz (%) Lyse sowohl der Kontrollgruppe (•) und test () Serumproben gegen Verdünnungsfaktor aufgetragen. (B) Für die Berechnung der 50%-Lyse ist eine Linie von der 50% Prozent-Wert gezogen, bis sie mit dem Graphen Geraden schneidet und dann eine senkrechte Linie nach unten, um die Verdünnung gezogen. In diesem Beispiel werden ein 35-facher Verdünnung der Kontroll-und 21,6-fachen Verdünnung des Testserum verpflichtet, 50% Lyse zu erreichen. Diese Daten deuten darauf hin, dass es weniger Ergänzung im Testserum verglichen mit der Kontrollgruppe, da sie weniger Verdünnung erforderlich, bevor 50% Lyse wurde erreicht. Die Kontrollprobe zeigt auch&gt; 100% Lyse bei der 1:8 Verdünnung. Dies ist wahrscheinlich aufgrund von unvollständigen Lyse der SRBC durch das destillierte Wasser und effizientere Lyse durch den Komplement-Komponenten.

<ol><li>Goldsby, R. A., Kindt, T. J., Osborne, B. A., Kuby, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGoldsby%2C+RA+%22Immunology%22">Immunology</a>. , W.H. Freeman. (2003).</li>
</ol>

Die CH 50-Test unterliegt vielen Störungen. Einige SRBC sind empfindlicher als andere, was zu spontanen Hämolyse, die nicht mit Aktivitäten zu ergänzen ist. Die Affinität der Kaninchen-Antikörper variiert von Charge zu Charge und von einem Hersteller zum anderen, dies beeinflusst die Höhe des Antikörper, der an der SRBC bindet. Auch der Prozess der Sensibilisierung SRBC mit Antikörper Ergebnisse in Zellen mit unterschiedlichen Mengen der Antikörper-Beschichtung der SRBC. Gewinnung und Lagerung sind ein wichti...

<table><tbody><tr><td>Schafe rote Blutkörperchen</td><td>CSL</td><td>2490201</td><td>1 % endgültige Konzentration verwenden</td></tr><tr><td>Serum</td><td></td><td></td><td>Menschliches Serum</td></tr><tr><td>Kaninchen-Anti-Schaf-hämolytisches Serum (RBCs), unkonjugiert</td><td>AbD Serotec</td><td>C12HSB</td><td></td></tr><tr><td>96-Loch-Platte mit flachem Boden</td><td>Sarstedt Ltd</td><td>83.1839</td><td></td></tr><tr><td>Veronalpufferlösung</td><td></td><td></td><td>1x endgültige Konzentration verwenden</td></tr><tr><td>Wasserbad</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Plattenreader</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>37&amp;#x00B0;C Raum/Inkubator</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

die messung der 50% hämolytische complement (ch 50) aktivität von serum

Measuring the 50% Haemolytic Complement (CH50) Activity of Serum

Das Komplementsystem ist eine Gruppe von Proteinen, die bei Aktivierung führen zu Zelllyse Ziel und erleichtert die Phagozytose durch Opsonisierung. Individuelle Komplement-Komponenten quantifiziert Dies bedeutet jedoch keine Auskunft über die Aktivität der Weg sein. Die CH<sub&gt; 50</sub&gt; Ist ein Screening-Test für die Aktivierung des klassischen Komplementweges (Abb. 1) und es ist empfindlich auf die Reduktion, Abwesenheit und / oder Untätigkeit eines jeden Teils des Weges. Die CH<sub&gt; 50</sub&gt; Tests die Funktionsfähigkeit des Serum-Komplement-Komponenten von den klassischen Weg, um rote Blutzellen von Schafen (SRBC) vorbeschichtet mit Kaninchen-Anti-Schaf-Erythrozyten-Antikörper (Hämolysin) zu lysieren. Als Antikörper-beschichteten SRBC mit Testserum, den klassischen Weg der Komplementaktivierung wird aktiviert und Hämolyse Ergebnisse inkubiert. Wenn ein Komplement-Komponente fehlt, wird der CH<sub&gt; 50</sub&gt; Ebene Null sein wird, wenn eine oder mehrere Komponenten des klassischen Weges sind zurückgegangen, die CH<sub&gt; 50</sub&gt; Verringert. Ein festes Volumen von optimal sensibilisiert SRBC wird jeder Serumverdünnung aufgenommen. Nach der Inkubation wird das Gemisch zentrifugiert und der Grad der Hämolyse wird durch Messung der Absorption des Hämoglobins in den Überstand bei 540 nm freigesetzt quantifiziert. Die Höhe der Komplement-Aktivität wird durch die Untersuchung die Fähigkeit der verschiedenen Verdünnungen der Test Serum-Antikörper beschichtet SRBC lysieren bestimmt. Dieses Video beschreibt die experimentellen Schritte bei der Analyse der Ebene der Komplement-Aktivität des klassischen Komplementweges beteiligt.

Der klassische Weg wird durch Antikörper aktiviert und gipfelt in Ziel-Zell-Lyse. Die CH<sub&gt; 50</sub&gt; Test liefert ein Maß für die Komplement-Aktivität einer Serumprobe. Dieses Video zeigt die Schritte bei der Bestimmung der CH beteiligt<sub&gt; 50</sub&gt; Einer Serumprobe, die Berechnungen und Interpretation der Ergebnisse.

Die Messung der 50% Hämolytische Complement (CH 50) Aktivität von Serum

Das Komplementsystem ist eine Gruppe von Proteinen, die bei Aktivierung zur Lyse von Zielzellen führen und die Phagozytose durch Opsonierung erleichtern. Einzelne ...

Bestimmung der 50 % hämolytischen Komplement-CH50-Aktivität von Serum. Sie benötigen eine Pipette, die 200 Mikroliter abgeben kann, und eine, die 1000 Mikroliter abgeben kann, Testserum, das auf Eis aufbewahrt wurde, sensibilisierte Schafs-rote Blutkörperchen, varone gepufferte Salzlösung und destilliertes Wasser, Röhrchen für den Test, Serum- und Röhrchen für die Basislinie sowie für totale Lyse, einen Vortex-Mischer und eine 96-well-Flachbodenplatte. Beschriften Sie die Röhrchen einzeln mit Kontrolle und der endgültigen Verdünnung. In diesem Fall beginnen wir mit einer Verdünnung von 1:8.Fahren Sie mit Verdünnungsschritten im Verhältnis 1:2 fort, die eine Verdünnung von 1:16, 1:32, 1:64 und 1:128 ergeben, und beschriften Sie die verbleibenden Röhrchen mit „blank“ und „Gesamtlyse“. Sobald alle Röhrchen beschriftet sind, können Sie nun mit der Verdünnung Ihres Testserums beginnen. Geben Sie zunächst 300 Mikroliter R-Puffer-Salzlösung in ein frisches Röhrchen. Überführen Sie nun 100 Mikroliter Serum in 300 Mikroliter R-Pufferlösung. Dadurch erhalten Sie eine 1:4-Anfangsverdünnung. Stellen Sie sicher, dass die Serumprobe gründlich gemischt wird.Überführen Sie nun 200 Mikroliter PBS-Puffer in die zuvor beschrifteten Röhrchen. Geben Sie außerdem 200 Mikroliter PBS-Puffer zu den beiden Leerproben hinzu, die insgesamt zu den Lysepufferröhrchen gehören. Fügen Sie 200 Mikroliter destilliertes Wasser hinzu, nicht Verona-Puffer-Salzlösung.Überführen Sie nun 200 Mikroliter des 1:4 verdünnten Serums in das mit 1:8 beschriftete Gefäß. Zuvor haben wir 200 Mikroliter PBS-Puffer in die Serie von Gefäßen mit der Beschriftung 1:8 bis 1:1028 übertragen. Dies führt nun zu einer 1:8-Verdünnung.Mischen Sie die Probe gründlich und überführen Sie anschließend 200 Mikroliter in das Gefäß, das mit „eins zu 16“ beschriftet ist. Fahren Sie fort, bis die gesamte Reihe von Gefäßen verdünnt wurde. Entsorgen Sie 200 Mikroliter aus der Verdünnung „eins zu 128“, sodass das Endvolumen 200 Mikroliter beträgt.Die sensibilisierten Schafs-rote Blutkörperchen können sich im Laufe der Zeit abgesetzt haben. Diese müssen durch vorsichtiges mehrmaliges Umstülpen des Röhrchens wieder resuspendiert werden. Nach gründlicher Resuspension werden 200 Mikroliter der sensibilisierten Schafs-Blutkörperchen in jedes der vorbereiteten Röhrchen überführt.Stellen Sie sicher, dass das Serum gründlich mit den roten Blutkörperchen vermischt wird. Sensibilisierte Schaf-Rote-Blutkörperchen, die dem Blindrohr hinzugefügt werden, ermöglichen die Bestimmung der spontanen Lyse, während Blut, das dem Gesamtlyserohr hinzugefügt wird, die Ermittlung des 100 %-Werts ermöglicht. Verrühren Sie vorsichtig jedes der Röhrchen mit einem Vortex-Mischer, der auf niedriger Stufe eingestellt ist. Stellen Sie die Röhrchen nun in ein Wasserbad bei 37 Grad Celsius und inkubieren Sie sie 30 Minuten lang. Nach 15 Minuten Inkubation die Röhrchen vorsichtig erneut vortexen und weitere 15 Minuten inkubieren. Nach der Inkubation die Röhrchen in einen bei vier Grad Celsius eingestellten Zentrifugenapparat überführen und bei 1500 ×g fünf Minuten lang zentrifugieren. Nach der Zentrifugation die Röhrchen vorsichtig entnehmen und in einen geeigneten Halter stellen. Hier sehen Sie das Pellet aus roten Blutkörperchen, während die SNA rot erscheint.Aufgrund der Freisetzung von Hämoglobin werden 100 µL destilliertes Wasser in die erforderliche Anzahl von Vertiefungen einer 96-Loch-Platte mit flachem Boden gegeben. Unter Vorsicht, das Pellet nicht mitzuübertragen, werden 100 µL der Überstand-Supernatant in eine geeignete Vertiefung der 96-Loch-Platte überführt. Nachdem alle Proben auf die Platte aufgetragen wurden, wird die Absorption mit einem Platten-Spektrophotometer bei 540 nm gemessen.Hier liegen die Rohabsorptionsdaten für die beiden Replikate A1 und B1 vor. Bezug genommen wird auf die 1:8-Verdünnung.Dann haben wir die Daten für 1 zu 16, 1 zu 32, 1 zu 64 und 1 zu 128. A6 und B6 sind die Blindprobe, während A7 und B7 die totale Lyse darstellen.Nachdem die Daten gesammelt wurden, müssen Sie die mittlere Absorption für jede Probe im Duplikat berechnen. Anschließend subtrahieren Sie die Blindabsorption, also die spontane Lyse, von allen Proben. Sobald alle Daten erhoben wurden, können Sie nun den Prozentsatz der Lyse für jede Verdünnung anhand der folgenden Formel berechnen.Nachdem alle Daten berechnet wurden, tragen Sie die prozentuale Lyse auf der vertikalen Achse gegen die Serumverdünnung auf der horizontalen Achse auf. Der resultierende Graph kann anschließend verwendet werden, um die Serumverdünnung zu berechnen, die erforderlich ist, um 50 % der sensibilisierten Schafblutkörperchen zu lysieren. Dieser Graph zeigt die prozentuale Lyse in Abhängigkeit von der Verdünnungsstufe des Serums.Eine Linie kann dann von der 50 %-Lyse gezogen werden, bis sie die Kurve schneidet. An der Stelle, an der die Kurve geschnitten wird, wird eine vertikale Linie nach unten zur horizontalen Achse gezogen. Dieser Wert stellt die Faltverdünnung dar, auf die das Serum verdünnt werden muss, um 50 % Lyse zu gewährleisten. Beim Vergleich zweier Serumproben, um festzustellen, ob ein Unterschied im CH 50 besteht, kann die Verdünnung, die 50 % Lyse liefert, als Maß verwendet werden.

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Research

Forschung

JoVE Journal

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Immunologie und Infektion

Um effektiv zu studieren die Funktion des Immunsystems Zellpopulationen ihre Reinigung oft erforderlich ist. Ergänzung Erschöpfung ist eine schnelle und kostengünstige Technik zur Isolierung von Immunzellen Populationen mit hoher Reinheit.

Depletion spezifischer Zellpopulationen durch Ergänzung Depletion

Hämagglutinations ist eine Form der Agglutination, wo Antikörper binden an roten Blutkörperchen. Rote Blutkörperchen sind beide verfügbar und die Ergebnisse sind leicht beobachtbaren mit dem bloßen Auge. Dieses Video zeigt die Schritte in einer Hämagglutination Test beteiligt sind, die Interpretation der Ergebnisse und die Bestimmung der Titer.

Die Bestimmung der Reaktivität und Titre von Serum mit einem Hämagglutinations Assay

Diese Studie beschreibt eine neue Mikrotiterplatte Assay, FV Gerinnungsaktivität misst während Fibrin Gerinnselbildung in Humanplasma, die zuvor noch nicht gemeldet. Das Verfahren verwendet eine kinetische Mikroplattenleser das kontinuierliche Messen der Änderung der Absorption bei 405 nm während Fibrin Gerinnselbildung in humanem Plasma.

Messung der Faktor V-Aktivität in humanem Plasma unter Verwendung eines Mikroplatten Koagulationsanalyse

Dieses Video zeigt eine Technik zur Bewertung der komplementvermittelten bakteriziden Aktivität von Antikörpern, die im Serum vorhanden sind. Dieser Ansatz kombiniert isoliertes Serum mit pathogenen Bakterien und exogenen Komplementproteinen. Nach der Inkubation werden die Bakterien auf einer Agarplatte gezüchtet und die produzierten Kolonien quantifiziert, um den bakteriziden Serumtiter zu messen.

Ein bakterizider Serumassay für die komplementvermittelte bakterizide Aktivität von Antikörpern

Das Video zeigt einen Hämagglutinations-Inhibitions-Assay zum Nachweis von Serum-Antikörpern gegen spezifische Antigene. Die Bestätigung der Hämagglutinationshemmung in der Testvertiefung und der Hämagglutination in der Kontrollvertiefung wird durch unterschiedliche visuelle Muster erreicht. Dieser Assay spielt eine entscheidende Rolle bei der Bewertung der Immunantwort, der Wirksamkeit von Impfstoffen und der Untersuchung von Virusinfektionen in der Virologie und Immunologie.

Der Hämagglutinationshemmungsassay zum Nachweis von Serumantikörpern gegen ein Zielantigen

Dieses Video zeigt Mikroneutralisationsassays zur Messung neutralisierender Antikörper mit Hilfe von Madin-Darby Canine Kidney Zellen, die α2,6-verknüpfte Sialinsäure in menschlichen Seren überexprimieren. Dieser Assay wird häufig in der Influenza-Humanserologie...

Ein Mikroneutralisationsassay zur Messung neutralisierender Antikörpertiter im Humanserum

Hier beschreiben wir zwei Assays zur Messung von Komplement-Aktivierung durch Antikörper gegen rote Blutzellen induziert. Der große Vorteil gegenüber den aktuellen Untersuchungen ist die quantitative und einfach zu interpretieren Natur.

Methoden für die quantitative Bestimmung von Antikörper-induzierte Komplementaktivierung auf Red Blood Cells

Die Exposition von Blut gegenüber polymeren Blutkanälen löst die Fremdkörperreaktion aus, die mit klinischen Komplikationen in Verbindung gebracht wird. Hier wird die Chandler Loop Apparatus beschrieben, ein experimentelles Werkzeug, das die Blutperfusion durch diese Kanäle nachahmt. Die Anhängung von rekombinantem CD47 führt zu einer verminderten Evidenz der Fremdkörperreaktion an diesen Kanälen.

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Hier wird eine einfache Methode zur Messung der Chitinase-Aktivität in biologischen Flüssigkeiten wie Bronchoalveolar-Lavage oder Serum vorgestellt.

Messung der Chitinase-Aktivität in biologischen Proben

Dieses Protokoll beschreibt eine umfassende Hämokompatibilitätsbewertung von blutverfälssenden Geräten mit lasergeschnittenen neurovaskulären Implantaten. Ein Flow-Loop-Modell mit frischem, heparinisiertem menschlichem Blut wird angewendet, um den Blutfluss zu imitieren. Nach der Perfusion werden verschiedene hämatologische Marker analysiert und mit den direkt nach der Blutentnahme gewonnenen Werten zur Hämokompatibilitätsbewertung der getesteten Geräte verglichen.

HämokompatibilitätSprüfung von blutverfälschten Implantaten in einem Flow Loop-Modell, das den menschlichen Blutfluss imitiert

Das Ziel dieser Methode ist es, die CR1-Dichte in den Erythrozyten eines jeden Probanden zu bestimmen, indem man mit drei Probanden vergleicht, deren Erythrozyten-CR1-Dichte bekannt ist. Die Methode verwendet Durchflusszytometrie nach Immunfärbung der Erythrozyten der Probanden durch einen monoklonalen Anti-CR1-Antikörper, der mit einem verstärkten System mit Phycoerythrin (PE) gekoppelt ist.

Messung des Erythrozytenkomplementrezeptors 1 mit Durchflusszytometrie

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Die Messung der 50% Hämolytische Complement (CH₅₀) Aktivität von Serum

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