Name: Chronisch Salmonellen Infected Maus-Modell (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-05-31T17:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 1 s
Description: Erfahren Sie die Etablierung eines chronischen Salmonella-Infektionsmodells bei Mäusen zur Untersuchung persistierender Darmkolonisation über 27 Wochen. Diese Methode ermöglicht die Analyse von Wirt-Pathogen-Interaktionen.

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Diese Arbeit wurde von der NIDDK KO1 DK075386 gewähren und die American Cancer Society RSG-09-075 bis 01-MBC bis Jun Sun unterstützt.

Dieses Protokoll umfasst drei Teile: Bakterienkultur, Maus Magensonde und Nachweis von Salmonellen. 1. Salmonella Wachstum Zustand. <ol><li> Bereiten Sie die Salmonella Luria-Bertani Broth (LB)-Platte, bei 37 ° C über Nacht inkubieren. </li><li> Wählen Sie einen Klon aus der LB-Platte und in 7 ml LB in einer 12 ml-Tube, und schütteln bei 37 ° C für ca. 5 Stunden. </li><li> Inoculate 50 ml LB mit 0,05 ml einer stationären Phase der Kultur und bei 37 ° C ohne Schütteln für etwa 18 Stunden. </li><li> Spin Nacht Bakterienkultur bei Raumtemperatur mit 6000 rpm für 10 Minuten auszusetzen, die Bakterien in HBSS mit Verhältnis 100:3 (LB: HBSS). Zum Beispiel: Jede 50 ml LB-Kultur wird in 1,5 ml HBSS suspendiert werden. </li><li> Für das Tier Magensonde weiter verdünnen, der Bakterienkultur bei 1:10-Verhältnis. Zum Beispiel: Jede 1,5 ml LB-Kultur wird in 15 ml HBSS suspendiert werden. </li></ol> 2. Salmonellen-Infektion Modell *. <ol><li> Bereiten Sie den Streptomycin-Lösung. Jede Maus wird 7,5 mg Streptomycin in 100 ul HBSS gegeben werden. Zum Beispiel, bereiten insgesamt 90 mg Streptomycin in 1,2 ml HBSS für 10 Mäuse. Immer etwas mehr Volumen bei der Vorbereitung des Streptomycin-Lösung. </li><li> Ziehen Sie Wasser und Essen 4 Stunden vor orale Gabe Behandlung. </li><li> Gavage Mäuse mit Streptomycin mit 7,5 mg Streptomycin (100 ul HBSS für Kontroll-Mäuse). Besorgen Sie sich die Haut über der Maus Schulter fest mit dem Daumen und Mittelfinger, strecken den Kopf und Hals mit dem Zeigefinger an der Speiseröhre gerade machen. Richten Sie die Kugel-Spitze der Fütterung Nadel auf dem Dach des Mundes und auf der rechten Seite der Rückseite des Rachens, dann vorsichtig Pass hinunter in die Speiseröhre und injizieren Sie die 100 ul Lösung. Kein Widerstand sollte zu spüren sein. </li><li> Bei 20 Stunden nach der Streptomycin-Behandlung, zurückgezogen Wasser und Nahrung wieder, bevor die Mäuse mit Bakterien infiziert sind. </li><li> Gavage jeder Maus mit 100 ul Suspension in HBSS behandelt oder mit sterilem HBSS (Kontrolle) durch orale Gabe. Die Magensonde Verfahren ist das gleiche wie 2,3) Magensonde Mäuse mit Streptomycin. </li></ol> * Tierversuche wurden unter Verwendung spezifischer-Pathogen-freien weibliche C57BL / 6 Mäuse (Taconic, Hudson, NY), die 6-7 Wochen alt waren wie zuvor 1 beschrieben durchgeführt. Das Protokoll wurde von der University of Rochester University Committee on Animal Resources (UCAR) zugelassen. 3. Nachweis von Salmonellen in Darm. <ol><li> Sammeln Sie mit der Maus Kot (ca. 100 mg). </li><li> Transfer Stuhlprobe in ein 1,5 Mikro-Zentrifugenröhrchen mit 1 ml PBS und kräftig vortexen. </li><li> Zentrifuge für 10 min bei 800 Umdrehungen pro Minute. Übertragen Sie den Überstand in ein sauberes Mikrozentrifugenröhrchen. </li><li> Zentrifugation bei 6000 rpm für 5min. Überstand wird verworfen und 200 ul PBS ist es, die Pellets zugegeben und gevortext. </li><li> Streak die 200 ul PBS mit einem Einweg-Zell-Streuer auf einer BBL CHROMagar Platte Salmonellen zu erkennen. Salmonellen erscheinen mauve (rosa bis violett, siehe Abb.1). Wenn 200 ul liefert zu viele Kolonien auf der Platte, verwenden Sie 100 ul oder 50 ul für den Streifen. </li></ol> 4. Repräsentative Ergebnisse. Wenn das Protokoll korrekt geschehen ist, kann Salmonella typhimurium Kolonisierung in der Maus Darm mehr als 6 Monaten nachgewiesen werden. Salmonellen könnten durch fäkale Kultur über 6 Monate (Abb. 1) festgestellt werden. Als typisches aus diesem Modell kommen, wiegen Körper Verlust und Tod auftreten innerhalb von 4 Wochen nach der Infektion. Abhängig von der Salmonella-Stämme zur Infektion verwendet, können einige Mäuse nicht mehr als 6 Monate überleben. <img src="/files/ftp_upload/1947/1947fig1.jpg" alt="Abbildung 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 1"> Abbildung 1. Intestinal Salmonellen in der Salmonella-Spezies erscheinen mauve (rosa bis violett) in Farbe, durch metabolische Unterschiede in der Gegenwart von ausgewählten Chromogene. Andere Bakterien sind entweder gehemmt oder produzieren blau-grüne oder farblose Kolonien. <img src="/files/ftp_upload/1947/1947fig2.jpg" alt="Abbildung 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 2"> Abbildung 2. Survival-Anteile von Mäusen mit Salmonella Mutante PhoP c, c PhoP infiziert Avra-und PhoP c AvrA-/AvrA +, PhoP c Avra für 4 Wochen (28 Tage). Tabelle 1. Körpergewicht von Mäusen mit Salmonella für 4 Wochen infiziert. <table border="1"><tbody><tr><td></td><td> 0 </td><td> 1 Woche </td><td> 2 Wochen </td><td> 3 Wochen </td><td> 4 Wochen </td></tr><tr><td> Kontrolle </td><td> 16,78 ± 1,05 </td><td> 16,91 ± 1,28 </td><td> 18,26 ± 1,23 </td><td> 19,31 ± 1,26 </td><td> 20,26 ± 1,15 </td></tr><tr><td> PhoP c </td> 16,89 ± 1,03 <td> 17,14 ± 1,19 </td><td> 17,43 ± 1,63 * </td><td> 18,68 ± 1,78 </td><td> 20,05 ± 1,11 </td></tr><tr><td> PhoP c Avra- </td><td> 16,91 ± 1,12 </td><td> 16,96 ± 1,39 </td><td> 17,06 ± 2,14 ** </td><td> 18,71 ± 2,18 </td><td> 20,15 ± 1,56 </td></tr><tr><td> PhoP c AvrA-/AvrA + </td><td> 16,94 ± 0,96 </td><td> 17,17 ± 1,02 </td><td> 17,63 ± 1,42 * </td><td> 18,44 ± 2,03 </td><td> 20,09 ± 1,17 </td></tr></tbody></table> * Im Vergleich zu der Kontrollgruppe p &lt;0,05 ** Im Vergleich zu Gruppe p &lt;0,01 Kontrolle Tabelle 2. Salmonella-Stämme in dieser Studie verwendet. <table border="1"><tbody><tr><td> Name </td><td> Beschreibung </td><td> Referenz oder Quelle </td></tr><tr><td> Salmonella 14028s </td><td> Wild-Typ S. typhimurium </td><td> ATCC </td></tr><tr><td> PhoP c </td><td> Non-pathogenen Komplexes Regulator-Mutanten </td><td> Miller et al., 1990 </td></tr><tr><td> PhoP c Avra- </td><td> Avra-Mutation </td><td> Collier-Hyams et al., 2002 </td></tr><tr><td> PhoP c AvrA-/AvrA + </td><td> PhoP c Avra-mit ergänzt Plasmid kodiert Avra </td><td> Collier-Hyams et al., 2002 </td></tr></tbody></table>

<ol><li>Duan, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((beta-Catenin+activity+negatively+regulates+bacteria-induced+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Invest%22%5BJournal%5D)">beta-Catenin activity negatively regulates bacteria-induced inflammation.</a> Lab Invest. 87 (6), 613-624 (2007).</li>
<li>Barthel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pretreatment+of+mice+with+streptomycin+provides+a+Salmonella+enterica+serovar+Typhimurium+colitis+model+that+allows+analysis+of+both+pathogen+and+host%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+immunity%22%5BJournal%5D)">Pretreatment of mice with streptomycin provides a Salmonella enterica serovar Typhimurium colitis model that allows analysis of both pathogen and host.</a> Infection and immunity. 71 (5), 2839-2858 (2003).</li>
<li>Miller, S. I., Mekalanos, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Constitutive+expression+of+the+phoP+regulon+attenuates+Salmonella+virulence+and+survival+within+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+bacteriology%22%5BJournal%5D)">Constitutive expression of the phoP regulon attenuates Salmonella virulence and survival within macrophages.</a> Journal of bacteriology. 172 (5), 2485-2490 (1990).</li>
<li>Valdez, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nramp1+expression+by+dendritic+cells+modulates+inflammatory+responses+during+Salmonella+Typhimurium+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Nramp1 expression by dendritic cells modulates inflammatory responses during Salmonella Typhimurium infection.</a> Cell Microbiol. 10 (8), 1646-1661 (2008).</li>
<li>Woo, H., Okamoto, S., Guiney, D., Gunn, J. S., Fierer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+of+Salmonella+colitis+with+features+of+diarrhea+in+SLC11A1+wild-type+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">A model of Salmonella colitis with features of diarrhea in SLC11A1 wild-type mice.</a> PLoS ONE. 3 (2), e1603-e1603 (2008).</li>
<li>Dangl, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+call-and-response%3A+how+Salmonella+learns+the+gospel+from+its+host%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Molecular call-and-response: how Salmonella learns the gospel from its host.</a> Trends Microbiol. 11 (6), 245-246 (2003).</li>
<li>Zaharik, M. L., Vallance, B. A., Puente, J. L., Gros, P., Finlay, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Host-pathogen+interactions%3A+Host+resistance+factor+Nramp1+up-regulates+the+expression+of+Salmonella+pathogenicity+island-2+virulence+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Host-pathogen interactions: Host resistance factor Nramp1 up-regulates the expression of Salmonella pathogenicity island-2 virulence genes.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 99, 15705-15710 (2002).</li>
<li>Townsend, P., Morton, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laboratory+Animal+Care+Policies+and+Regulations%3A+United+Kingdom%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+J%22%5BJournal%5D)">Laboratory Animal Care Policies and Regulations: United Kingdom.</a> ILAR J. 37 (2), 68-74 (1995).</li>
<li>Olfert, E. D., Godson, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humane+endpoints+for+infectious+disease+animal+models%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+J%22%5BJournal%5D)">Humane endpoints for infectious disease animal models.</a> ILAR J. 41 (2), 99-104 (2000).</li>
<li>Ye, Z., Petrof, E. O., Boone, D., Claud, E. C., Sun, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Salmonella+effector+AvrA+regulation+of+colonic+epithelial+cell+inflammation+by+deubiquitination%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Salmonella effector AvrA regulation of colonic epithelial cell inflammation by deubiquitination.</a> Am J Pathol. 171 (3), 882-892 (2007).</li>
<li>Grassl, G. A., Valdez, Y., Bergstrom, K. S., Vallance, B. A., Finlay, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+enteric+salmonella+infection+in+mice+leads+to+severe+and+persiste+nt+intestinal+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Chronic enteric salmonella infection in mice leads to severe and persiste nt intestinal fibrosis.</a> Gastroenterology. 134 (3), 768-780 (2008).</li>
<li>Sukupolvi, S., Edelstein, A., Rhen, M., Normark, S. J., Pfeifer, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+murine+model+of+chronic+Salmonella+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+immunity%22%5BJournal%5D)">Development of a murine model of chronic Salmonella infection.</a> Infection and immunity. 65 (2), 838-842 (1997).</li>
<li>Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories (BMBL). , Fifth Edition, US Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention and National Institutes of Health. (2007).</li>
<li>Wu, S., Lu, R., Zhang, Y., Sun, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+effects+of+a+Salmonella+type+III+secretion+effector+protein+AvrA+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Chronic effects of a Salmonella type III secretion effector protein AvrA in vivo.</a> PLoS ONE. , Forthcoming (2010).</li>
</ol>

Zur Nutzung dieses Systems ist es notwendig, für den Forscher lernen, wie man die Tiere eine Magensonde. Wir Detail eine Methodik für die Vorbereitung Bakterienkultur und Magensonde die Mäuse. Wir zeigen auch, wie die Salmonellen Persistenz im Magen-Darm (GI-Trakt) zu überwachen. Die kritischen Schritte in diesem Protokoll einschließlich: <ol><li> Streptomycin-Vorbehandlung: Streptomycin-Vorbehandlung loswerden könnte einige kommensalen Darmflora und machen die Mäuse anfällig für die Infektion mit Salmo...

<table><tbody><tr><td>HBSS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>ABCD1234</td><td></td></tr><tr><td>Luria-Bertani-Brühe</td><td>BD Biosciences</td><td>244610</td><td></td></tr><tr><td>Fütterungsnadel</td><td>Popper &amp;amp; Sons, Inc.</td><td>7920</td><td></td></tr><tr><td>Streptomycin</td><td>MP Biomedicals</td><td>100556</td><td></td></tr><tr><td>BBL CHROMagar &lt;em&gt;Salmonella&lt;/em&gt;</td><td>BD Biosciences</td><td>214983</td><td></td></tr><tr><td>Einweg-Zellverteiler</td><td>Biologix Research Company</td><td>65-1010</td><td></td></tr></tbody></table>

chronisch salmonellen infected maus-modell

Chronic Salmonella Infected Mouse Model

Die bakterielle Infektion Mausmodell ist ein leistungsfähiges Modell für die Erforschung von Bereichen wie Infektion, Entzündung, Immunologie, Signaltransduktion und Tumorgenese. Viele Forscher haben den Vorteil der Colitis induziert durch genommen<em&gt; Salmonellen</em&gt; Typhimurium für die Studien über die frühe Phase der Entzündung und Infektion. Allerdings sind nur wenige Berichte über die chronische Infektion<em&gt; In vivo</em&gt;. Mäuse, die mit<em&gt; Salmonellen</em&gt; Persistent Existenz im Magen-Darm-Trakt erlauben uns, die langfristige Wirt-Bakterien-Interaktion, der Signaltransduktion und Tumorgenese zu erkunden. Wir haben eine chronische bakterielle Infektion Mausmodell mit etablierten<em&gt; Salmonellen</em&gt; Typhimurium Kolonisierung in der Maus Darm über 6 Monate. Zur Nutzung dieses Systems ist es notwendig, für den Forscher lernen, wie man die Bakterienkultur vorzubereiten und eine Magensonde den Tieren. Wir Detail eine Methodik für die Vorbereitung Bakterienkultur und eine Magensonde Mäusen. Wir zeigen auch, wie die Erkennung<em&gt; Salmonellen</em&gt; Persistenz im Magen-Darm-Trakt. Insgesamt wird dieses Protokoll Hilfe Forscher mit der bakteriellen Infektion Mausmodell grundlegend wichtig, biologischen und mikrobiologischen Fragen zu beantworten.

Stellen Sie eine chronische bakterielle Infektion Mausmodell mit persistierenden<em&gt; Salmonellen</em&gt; Typhimurium Kolonisation im Darm für 27 Wochen.

Chronisch Salmonellen Infected Maus-Modell

Das bakteriell infizierte Mausmodell ist ein leistungsfähiges Modellsystem zur Untersuchung von Bereichen wie Infektion, Entzündung, Immunologie, Signaltransduktion und ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, ein Mausmodell mit chronischer Salmonelleninfektion zu etablieren. Dies wird erreicht, indem zunächst eine Salmonellenlösung hergestellt wird. Der zweite Schritt des Verfahrens besteht darin, Mäuse entweder mit Streptomycin und anschließend mit Salmonellen oder nur mit Streptomycin zu gavagieren.Der dritte Schritt des Verfahrens besteht darin, Salmonellen aus dem Fäkalienmaterial von Mäusen zu isolieren und eine Salmonelleninfektion im Darm von Mäusen mithilfe von BL-Chromaplatte zu detektieren. Der letzte Schritt des Verfahrens ist die Beobachtung und Dokumentation der Körpermasse der Maus sowie die Erfassung von Veränderungen der Vitalität nach einer Salmonelleninfektion. Letztendlich können Ergebnisse erzielt werden, die zeigen, dass eine Infektion mit Salmonellen im Darm von Mäusen, die mittels Gavage mit Salmonellen infiziert wurden, etabliert werden kann.Hallo, ich bin Michelle P aus dem Labor von Dr. Johnson der Abteilung für Innere Medizin an der University of Rochester. Ich komme ebenfalls aus dem Sun-Labor und ich bin Y aus dem Sun-Labor. Heute werden wir Ihnen ein Verfahren zur Erstellung eines mit Alytic Lennar inf

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Forschung

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