Name: Flash-Freezing und Kryoschneiden E12.5 Gehirn der Maus (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-05-28T00:00:00.000+00:00
Duration: 28 min 32 s
Description: Lernen Sie Kryoschnitt-Techniken für embryonales Mausehirngewebe mit OCT-Einbettung und Flüssigstickstoff-Gefrieren. Diese Methode liefert praktische Tipps zur Fehlerbehebung für hochwertige Schnitte in der Neurowissenschaft.

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<ol><li> Fix Gewebe in 4% Paraformaldehyd in PBS für die gewünschte Zeit. </li><li> Sucrose ziehen Gewebe (Gefrierschutz) <ol><li> Machen Sie 30% Saccharose-Lösung in PBS w / v in 2059 Rohr. </li><li> Das Gewebe spülen 3x in PBS (~ 5 min mit Schaukeln). </li><li> Legen Gewebe in 30% Saccharose-Lösung. Tissue wird nicht sinken. </li><li> Legen Sie das Gewebe in 4 ° C über Nacht oder bis es gesunken ist. </li></ol></li><li> Label entsprechender Größe cryomold mit Information und Orientierung. </li><li> Füllen cryomold mit OCT (Luftblasen vermeiden). </li><li> Transfer-Gewebe der OCT-Bad ein und überziehen es mit OCT </li><li> Transfer-Gewebe OCT in cryomold. </li><li> Orient das Gewebe unter dem Mikroskop. </li><li> Gießen flüssiger Stickstoff in Kunststoff-Petrischale. </li><li> Schnell und vorsichtig das Gewebe in cryomold in den Stickstoff. (Nicht tauchen oben auf der cryomold.) </li><li> Wenn der OCT solide ist weiß, legen Sie die gefrorenen Gewebe in -80 ° C Tiefkühltruhe für die Lagerung. </li><li> Äquilibrieren Gewebe zu ~ 20 ° C für mindestens 30 min. vor dem Schneiden. </li></ol>

<table><tbody><tr><td>Tissue-Tek Cryomold</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td>27181</td><td></td></tr><tr><td>O.C.T.</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td>27050</td><td></td></tr><tr><td>Saccharoselösung</td><td></td><td></td><td>30%ige Saccharoselösung in PBS, Gewicht/Volumen</td></tr><tr><td>Parafformaldehyd</td><td></td><td></td><td>4%iger Parafformaldehyd in PBS</td></tr></tbody></table>

flash-freezing und kryoschneiden e12.5 gehirn der maus

Flash Freezing and Cryosectioning E12.5 Mouse Brain

<p class="jove_content">Nachgewiesene in diesem Video sind die Techniken für Flash Einfrieren und Schneiden embryonalen Hirngewebe von Mäusen. Nützliche Tipps für die Verwendung des Kryostaten gegeben sind, einschließlich Methoden zur Problembehandlung, mit denen während des Schneidens, um sicherzustellen, dass das resultierende Gewebe Abschnitte frei von Rissen und anderen Verzerrungen können.</p>

Flash-Freezing und Kryoschneiden E12.5 Gehirn der Maus

<p>Hallo, ich bin Spencer Curley vom Ed Maki's Labor an der University of California Irvine, und ich werde Ihnen zeigen, wie man Kryoschnitte anfertigt. Dazu verwende ich zunächst diese üblicherweise verwendeten Reagenzien. Die Einbettungsverbindung bzw. das Einbettmedium, das ich verwende, heißt OCT (für optimale Schneidetemperatur).</p><p>Es handelt sich um eine klare Lösung, die sehr dick und viskos ist und das Gewebe gut hält, während man es ausrichten kann; anschließend gefriert es. Letztendlich ist sie wasserlöslich, sodass man sie während jeglicher Färbeprozedur entfernen kann. Ich bette daher das Gewebe in eine Form ein. Diese Kryo-Form-Biopsiebehälter sind in verschiedenen Größen erhältlich.</p><p>Ich werde hier diese kleinere Form verwenden, da ich embryonales Gewebe von der Maus bearbeite. Unser Gewebe gefrieren wir schockartig in flüssigem Stickstoff. Zuerst fülle ich daher diesen schützenden Vakuumbehälter mit flüssigem Stickstoff aus unserem Tank hier.</p><p>Bevor Sie das Gewebe schockgefrieren, müssen Sie es sogenannt kryoprotegieren, da das Gefrieren andernfalls das Gewebe zerstören würde. Dazu geben Sie das Gewebe über Nacht in eine 30%ige Saccharoslösung. Und wenn es länger dauert, ist d</p>

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Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Dieses Video zeigt die Kryokonservierung des Gehirns einer Maus, um diskrete anatomische Bereiche oder spezifische Zellpopulationen aus dem Tumorgewebe zu isolieren. Diese Technik ist entscheidend, um eine optimale optische Auflösung der Morphologie des Hirngewebes für die anschließende Analyse zu erhalten.

Kryokonservierung des Gehirns von Mäusen durch Einfrieren: Eine Technik zum schnellen Einfrieren ganzer Mäusehirnproben für die histologische Analyse

In diesem Video demonstrieren wir das Schneiden eines gefrorenen Hirntumorgewebes einer Maus mit einem Kryostaten. Die so gewonnenen gefrorenen Hirngewebeschnitte werden bis zur weiteren Analyse bei niedrigen Temperaturen gelagert.

Schnitt von gefrorenem Maushirngewebe: Ein Verfahren zur Gewinnung dünner gefrorener Gewebeschnitte aus gefrorenem Maushirngewebe

Dieses Video zeigt ein detailliertes Schritt-für-Schritt-Protokoll zur Vorbereitung von gefrorenen Hirngewebeschnitten von Mäusen für nachgelagerte Analysen.

Aufbereitung eines Mausgehirns für die nachgelagerte Analyse

Hier präsentieren wir ein Protokoll, um einzufrieren und Abschnitt Gehirngewebe von mehreren Tieren als eine zeitsparende Alternative zur Bearbeitung einzelner Gehirne. Dies senkt die Färbung Variabilität bei Immunohistochemistry und reduziert Zeit Kryoschneiden und Imaging.

Gleichzeitige Kryoschneiden mehrere Nagetier Gehirne

Dieses Verfahren beschreibt die Sammlung diskreter gefrorener Hirnregionen, um hochwertiges Protein und RNA mit kostengünstigen und allgemein verfügbaren Werkzeugen zu erhalten.

Sammlung von gefrorenen Nagetier-Hirnregionen für Downstream-Analysen

Dieses Protokoll beschreibt eine Methode zur Kombination von Fluoreszenz-in-situ-Hybridisierung (FISH) und Fluoreszenz-Immunhistochemie (IHC) sowohl in frisch gefrorenen als auch in fixierten Maus-Hirnschnitten, mit dem Ziel, Multilabel-FISH und Fluoreszenz-IHC-Signal zu erreichen. IHC zielte auf zytoplasmatische und membrangebundene Proteine ab.

Kombination von <em>Multiplex-Fluoreszenz-In-situ-Hybridisierung</em> mit fluoreszierender Immunhistochemie an frischen, gefrorenen oder fixierten Mäusehirnschnitten

Eine bequeme Schwerkraft-gefütterte Perfusionsmethode zur histologischen Analyse des zentralen Nervensystems der Maus wird vorgestellt. Der immunfluoreszierende Nachweis von phosphoryliertem α-Synuclein wird in einem Mausmodell der Parkinson-Krankheit demonstriert. Diese Arbeit beschreibt auch umfassend die transkardialen Perfusions-, Dissektions-, Gewebegefrier- / Einbettungs- und gefrorenen Schnittschritte.

Eine schwerkraftgespeiste transkardiale Perfusionsmethode zur histologischen Analyse des zentralen Nervensystems der Maus

Das vorliegende Protokoll beschreibt eine praktische Strategie, um den Verifizierungsschritt stereotaktischer Injektionskoordinaten zu beschleunigen, bevor die Virusverfolgung mit Farbstoffen und Gefrierschnitten durchgeführt wird.

Vorläufige Validierung von stereotaktischen Injektionskoordinaten mittels Kryosektion

Diese Studie stellt ein vereinfachtes Protokoll für die Gewebeaufbereitung vor, das Enthauptung, Fixierung, Kryosektion, Fluoreszenzfärbung, Immunfärbung und Bildgebung umfasst und auf konfokale und Multiphotonen-Bildgebung erweitert werden kann. Die Methode behält eine Wirksamkeit bei, die mit komplexen Dissektionen vergleichbar ist, ohne dass fortgeschrittene motorische Fähigkeiten erforderlich sind. Die quantitative Bildanalyse bietet ein umfangreiches Untersuchungspotenzial.

Direkte Kryosektion von <em>Drosophila-Köpfen</em> zur verbesserten Fluoreszenzfärbung und Immunfärbung des Gehirns

Die Netzhaut weist eine komplexe räumliche Organisation über ihre laminare Struktur auf. Moderne räumliche Transkriptomik- und Sequenzierungstechniken erfordern Gewebeschnitte mit einer Dicke von &lt; 20 μm, was ihre Anwendbarkeit in der Netzhautforschung einschränkt. Diese frisch gefrorene Kryosektionsmethode erzeugt dünne Gesichtsabschnitte der Netzhaut von Mäusen unter Beibehaltung planarer räumlicher Beziehungen und ermöglicht so eine umfassende molekulare Kartierung über Laminae hinweg.

<em>En face</em> Kryosektion der Netzhaut der Maus für die hochdimensionale räumliche molekulare Analyse

Dieses Protokoll standardisiert die Kryo-Elektronen-Tomographie (Kryo-ET) für dickes Gewebe, indem es Hochdruck-Gefrieren (HPF) mit der Waffelmethode, kryogenen Fokusionenstrahl (Cryo-FIB) Lift-out und dosissymmetrische, parallele Aufnahme integriert, wodurch gleichmäßig dünne Lamellen und vitrifizierte Proben für eine reproduzierbare In-situ-Analyse im Maus-Hippocampus entstehen.

Kryo-Elektronen-Tomographie-Workflow für dickes Gewebe demonstriert im Maus-Hippocampus

Lernen Sie Kryoschnitt-Techniken für embryonales Mausehirngewebe mit OCT-Einbettung und Flüssigstickstoff-Gefrieren. Diese Methode liefert praktische Tipps zur Fehlerbehebung für hochwertige Schnitte in der Neurowissenschaft.

Flash-Freezing und Kryoschneiden E12.5 Gehirn der Maus

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