Orthotope Injektion in das Brustfettpolster: Etablierung von Brustkrebs bei Mäusen

Etablieren Sie zunächst die gewünschte Brustkrebszelllinie in Kultur. Rasieren Sie am Tag vor der Operation den Bauch der Maus und verwenden Sie Enthaarungscreme, um das Fell zu entfernen und die Leistenbrustwarzen freizulegen. Sammeln Sie am Tag der Operation die Zellen, betäuben Sie die Maus und bestätigen Sie eine fehlende Reaktion auf das Einklemmen der Zehen. Kneifen Sie mit einer Pinzette die Haut um die Brustwarze zusammen, um einen angehobenen Tunnel zu erzeugen.

Dann stechen Sie mit der Spritze der gesammelten Zellen in die Haut. Die Nadel sollte dem Tunnel folgen, bis die Spitze in die Nähe des Nippels kommt. Bewegen Sie die Nadelspitze vorsichtig nach oben in das Brustfettpolster, direkt unter der Brustwarze. Entfernen Sie die Pinzette, um mit der Nadel ein Hautzelt zu bilden, und injizieren Sie dann langsam die Zellen.

Ziehen Sie zum Schluss die Spritze zurück und achten Sie darauf, die runde Beule, die den Sauger umgibt, nicht zu stören. Injizierte Zellen und nachfolgende Tumoren exprimieren Luziferase und können mit Hilfe von Biolumineszenz-Bildgebung verfolgt werden. Im Beispielprotokoll zeigen wir die Etablierung des murinen orthotopen Brustkrebses. Am Tag vor der Operation die Empfängermaus manuell festhalten und die Bauchseite des Tieres um die vierte Brustwarze herum zum zu rasierenden Fell drehen.

Wischen Sie das Fell mit einer dünnen Schicht Enthaarungscreme ab. Verwenden Sie destilliertes Wasser, um die Creme nach 30 bis 60 Sekunden zu entfernen. Und trocknen Sie die Maus mit weichen Papiertüchern ab. Am Tag der Operation wird die murine Brustkrebszellsuspension in einem sterilen Mikrozentrifugenröhrchen auf Eis auf eine Konzentration von 2 x 10 bis 5 Zellen pro Milliliter PBS verdünnt.

Vor jeder Injektion wird eine Spritze von einem Milliliter mit einer Nadel von 0,45 x 16 mit 50 Mikrolitern Zellen pro Maus geladen. Und bestätigen Sie einen Mangel an Reaktion auf das Einklemmen der Zehen bei jedem sedierten Tier. Tragen Sie Salbe auf die Augen des Tieres auf und verwenden Sie eine Pinzette, um die Haut um die vierte Brustwarze der ersten Maus zu legen, um einen Tunnel zu schaffen, dem die Spritze folgen kann.

Halten Sie die Spritze mit der Abschrägung nach oben und dringen Sie fünf bis 10 Milliliter von der Brustwarze entfernt subkutan in die Haut ein, wobei Sie dem Tunnel folgen, bis die Nadelspitze fast die Brustwarze erreicht. - Verwenden Sie eine Pinzette, um die Haut um die erste Brustwarze zu spannen, so dass ein Tunnel entsteht, dem die Spritze folgen kann. Die Nadel sollte zwischen den Pinzettenspitzen eingeführt werden und nach oben gleiten, anstatt in das Gewebe einzudrücken. Schiebe die Nadelspitze vorsichtig nach oben in das Brustfettpolster, bis sich die Fase unter dem Sauger befindet.

Und lösen Sie das Hautzelt, um eine langsame Injektion der Krebszellen zu ermöglichen. - Bewegen Sie die Nadelspitze nach dem Einführen vorsichtig nach oben in das Brustfettpolster, bis sich die Fase unter der Brustwarze befindet und Sie einen Widerstand spüren, um sicherzustellen, dass die Zellen an die richtige Stelle gelangen. Wenn alle Zellen injiziert wurden, drehen Sie die Nadel leicht zur Seite und ziehen Sie die Spritze langsam zurück. Üben Sie mit einem Wattestäbchen 10 bis 20 Sekunden lang Druck auf die Nadelwunde aus, um sicherzustellen, dass keine Flüssigkeit austritt.

Die injizierte Brustwarze sollte als transparente weiße flache Kugel erscheinen, wobei sich die Brustwarze in der Mitte befindet