Störung der Nagelhaut: Eine Methode zum Sammeln von Hämolymphe aus Drosophila-Larven

- Pipettieren Sie zunächst einen Tropfen Puffer auf ein sauberes Präparierpad. Legen Sie dann eine getrocknete lebende Larve auf das Tröpfchen. Drosophila hat, wie andere Gliederfüßer, ein offenes Kreislaufsystem, in dem das Herz Hämolymphe durch den Körper pumpt und die inneren Organe badet. Um die Hämolymphe, die das Blut und die interstitielle Flüssigkeit der Gliederfüßer ist, zu lösen, verwenden Sie eine Pinzette und öffnen Sie die Kutikula, die halbstarre äußere Hülle der Larven.

Entsorgen Sie dann den Schlachtkörper und überführen Sie die Hämolymphlösung von der Präparierplatte in eine gekühlte Pufferlösung in einem Mikrozentrifugenröhrchen. Verwenden Sie schließlich ein Hämozytometer, um die Anzahl der Hämozyten, der Zellen in der Hämolymphe, zu zählen, die gesammelt wurden. In diesem Protokoll werden wir Hämolymphe von Larven von Drosophila melanogaster sammeln.

- Beginnen Sie mit der Hämolymph-Sammlung, indem Sie 10 Mikroliter 1x PBS in ein Mikrozentrifugenröhrchen geben und das Röhrchen auf Eis legen. Geben Sie als Nächstes einen 10-Mikroliter-Tropfen 1x PBS auf ein sauberes Präparierpad. Wählen Sie eine einzelne Larve aus und trocknen Sie sie, indem Sie sie auf ein Tuch legen. Übertragen Sie es dann auf das PBS-Tröpfchen auf dem Sezierpad.

Reißen Sie die Nagelhaut vorsichtig mit einer Pinzette auf und drehen Sie sie um, um die Hämolymphe freizusetzen, und entsorgen Sie dann den Kadaver. Entnehmen Sie mit einer Pipette die Hämolymphe vom Präparierkissen. Geben Sie die Hämolymphe in das eisgekühlte PBS-Mikrozentrifugenröhrchen und mischen Sie, indem Sie auf und ab pipettieren. Laden Sie 10 Mikroliter der Probe in eine Hämozytometerkammer und nehmen Sie eine Konzentrationsmessung vor.