Dissektion des Auge-Hirn-Komplexes aus Fliegenpuppen: Eine Methode zur Isolierung von Netzhautgewebe

- Befestigen Sie zunächst eine Fruchtfliegenpuppe mit der Rückenseite nach oben. Entfernen Sie das Operculum oder das vordere Ende der Puppe, um den Kopf des Tieres freizulegen. Fahren Sie fort, die Puppe zu öffnen, indem Sie die Hülle abschneiden und abziehen. Sobald sie befreit ist, bedecken Sie die sezierte Puppe mit PBS, um ein Austrocknen zu vermeiden. Machen Sie einen sauberen Querschnitt durch den Thorax und entfernen Sie den hinteren Teil des Schlachtkörpers.

Um den Auge-Hirn-Komplex freizulegen, zu dem die beiden Netzhäute gehören, die mit den Sehlappen verbunden sind, beginnen Sie, das Epithel von der aufgeschnittenen Kante des Thorax zu reißen und die Kopfkapsel allmählich zu öffnen. Führen Sie dann den Auge-Hirn-Komplex vorsichtig von den Überresten der Kopfkapsel weg.

Im Beispielprotokoll sehen wir eine Demonstration einer puppenhaften Auge-Hirn-Dissektion, die zur Isolierung von Gewebe für verschiedene nachgelagerte Analysen verwendet wird.

- Nachdem Sie die Drosophila-Puppen auf eine schwarze Präparierschale gelegt haben, legen Sie ein frisches Stück doppelseitiges Klebeband auf die Präparierschale, weg von den Puppen, und verwenden Sie eine Pinzette, um die Puppen mit der Rückenseite nach oben vorsichtig auf das Klebeband zu legen.

Stellen Sie die Schale unter ein Stereomikroskop und verwenden Sie eine Pinzette, um das Operculum jeder Puppe zu entfernen. Verwenden Sie eine Mikrodissektionsschere, um jede Puppenhülle zu schneiden, so dass sie aufgeklappt werden kann, um den Kopf, den Thorax und das vordere Bauchsegment freizulegen, und befestigen Sie die Ränder der Puppenhülle am doppelseitigen Klebeband.

Durchstechen Sie den Bauch jeder Puppe mit einer scharfen Pinzette und entfernen Sie die Puppe aus ihrer Puppenhülle. Legen Sie die Puppe auf die Sezierschale, weg vom Klebeband, und bedecken Sie die Puppe mit 400 Mikrolitern eiskaltem PBS. Fassen Sie jede Puppe mit einer Pinzette am Bauch und verwenden Sie die Mikrodissektionsschere, um einen sauberen Querschnittsschnitt durch den Brustkorb zu machen und die Puppen in zwei Hälften zu schneiden.

Fassen Sie mit zwei Paar feiner Pinzetten die Schnittkanten jedes Thoraxepithels und reißen Sie nach und nach die Brust- und Kopfkapsel auf, wodurch der Auge-Hirn-Komplex im umgebenden Fettgewebe freigelegt wird. Führen Sie dann, ohne das Gewebe zu greifen, mit einer Pinzette jeden durchscheinenden, cremefarbenen, hantelförmigen Auge-Hirn-Komplex von den Überresten der Kopfkapsel weg.