0 Aufrufe • 2:09 Min. • April 30th, 2023
- Legen Sie zunächst einen Objektträger mit Klebeband zwischen zwei andere Objektträger. Diese bieten Halt und Abstandshalter für die Vorbereitung des Agarose-Pads. Geben Sie anschließend einen Tropfen geschmolzene Agarose auf die Folie. Drücken Sie sofort mit einer weiteren Folie darauf.
Nachdem die Agarose fest geworden ist, trennen Sie die Objektträger vorsichtig, so dass die Agarose auf einem Objektträger verbleibt. Verwenden Sie immer frisch hergestellte Pads, da ausgetrocknete Pads die Tiere austrocknen können. Stellen Sie sicher, dass keine Risse oder Blasen vorhanden sind, die die Integrität des Belags beeinträchtigen können.
Geben Sie dann einen Tropfen Betäubungsmittel in die Mitte des Polsters und übertragen Sie 10 bis 15 Tiere darauf, wobei Sie so wenig Bakterien wie möglich mitbringen. Überschüssige Bakterien könnten die Bildgebung beeinträchtigen. Wenn die Betäubungslösung austrocknet, geben Sie einen zweiten Tropfen auf die Tiere.
Legen Sie vorsichtig ein Deckglas über das Pad. Vermeiden Sie es, Blasen zu bilden oder zu viel Druck auf ihn auszuüben, um Schäden an den Tieren zu vermeiden. Beschriften Sie abschließend die Folie, die für die Bildgebung bereit ist.
- Beginnen Sie mit der Vorbereitung der Objektträger für die Bildgebung. Geben Sie einen Tropfen geschmolzene Agarose auf einen Objektträger und drücken Sie das Tröpfchen sofort mit einem anderen Objektträger nach unten, indem Sie die Agarose vorsichtig flach drücken Benötigen Sie die Agarose zum Trocknen für eine Minute.
Trennen Sie dann vorsichtig die beiden Objektträger und lassen Sie das erstarrte Pad auf einer der Objektträger. Legen Sie den Objektträger auf den Mikroskoptisch und geben Sie einen 5- bis 10-Mikroliter-Tropfen Anästhetikum in die Mitte des Agras-Pads.
Verwenden Sie ein hitzesterilisiertes Plektrum, um 10 bis 15 Tiere schnell von der Lagerplatte in das Anästhestatröpfchen zu übertragen, bevor die Lösung austrocknet. Bringen Sie dann ein Deckglas an, indem Sie es direkt über dem Agarose-Pad positionieren und vorsichtig nach unten fallen lassen.