Drosophila Egg Lege-Preference Assay: Eine Methode zur Überprüfung der Entscheidungsfindung bei Fliegen

- Um die Vorliebe einer weiblichen Fliege für die Eiablage oder Eiablage zu testen, geben Sie einer einzelnen weiblichen Fliege die Wahl zwischen zwei verschiedenen Substraten, auf denen sie ihre Eier in einer Testkammer ablegen kann. Die Fliege vergleicht die verfügbaren Optionen und wählt die Standorte, die sie bevorzugt, in der Regel das Substrat, das für ihren Nachwuchs am besten geeignet ist.

Stellen Sie sicher, dass die Fliege darauf vorbereitet ist, viele Eier zu legen, damit es in jedem Versuch eine robuste Anzahl von Eiern gibt. Am Ende des Experiments entfernst du die Fliege und zählst die Eier auf jedem Substrat, um die bevorzugte Eiablage der Fliege zu bestimmen.

Im Beispielprotokoll werden wir einen Hochdurchsatz-Assay verwenden, um die Präferenz der Eiablage für glatte oder saccharosehaltige Agarosesubstrate zu testen.

- Setzen Sie das Experiment fort, indem Sie sich zuvor konstruierte Eiablagekammern aus Acryl besorgen. Setze Plastikfolien in die Oberseite ein und lade ein Stück der Kammer, das als Unterseite dient.

Als nächstes betäuben Sie die Weibchen auf einem Kohlendioxid-Pad und laden Sie sie einzeln in jede Eiablagearena. Geben Sie den Fliegen 30 Minuten Zeit, sich vom Kohlendioxid zu erholen und sich an die neue Umgebung zu gewöhnen. Während sich die Fliegen anpassen, fülle eine Tube mit Agarose bis zur 10-Milliliter-Marke. Bereiten Sie dann ein 150 millimolare Saccharosesubstrat vor, indem Sie 750 Mikroliter 2 molare Saccharoselösung in das Röhrchen geben. Bewahren Sie eine Flasche geschmolzene 1%ige Agarose in einem Wasserbad auf.

Bereiten Sie das glatte Substrat auf die gleiche Weise vor, aber ersetzen Sie die Saccharoselösung durch destilliertes Wasser. Nehmen Sie als Nächstes das Substratstück der Kammer und pipettieren Sie 1.000 Mikroliter des Agarosesubstrats in jeden Trog. Die Agarose 30 Minuten lang beiseite stellen und fest werden lassen.

Sobald die Agarosesubstrate und Fliegen fertig sind, setzen Sie alle drei Teile der Eiablagekammer zusammen und nehmen Sie dann die Plastikfolien heraus. Stellen Sie die Kammern über Nacht in Fliegenbrutschränke.

Betäuben Sie Weibchen, indem Sie Kohlendioxid in die Kammer injizieren. Zerlegen Sie die Kammer und entsorgen Sie die betäubten Fliegen. Machen Sie zum Schluss Fotos von den Eiern für die Aufzeichnung.