Photomotor Response Assay: Eine Methode zur Messung der Verhaltensreaktion von Zebrafischlarven auf eine plötzliche Änderung der Lichtverhältnisse

- Übertragen Sie zunächst 10 Zebrafischembryonen mit Hilfe einer Transferpipette in ein mit 20 Millilitern Wasser gefülltes Becherglas. Züchten Sie nun die Embryonen bei 28 Grad Celsius unter dem entsprechenden Hell-Dunkel-Zyklus, der für ein Experiment erforderlich ist. Als nächstes werden die Larven in Vertiefungsplatten umgefüllt. Achten Sie darauf, dass jede Vertiefung eine Larve enthält, um genügend Platz zum Schwimmen zu haben.

Füllen Sie nun jede Vertiefung vollständig mit Wasser. Platzieren Sie die Well-Platte in der Verhaltensaufzeichnungskammer und verfolgen Sie die Bewegung der Larven mithilfe der Video-Tracking-Software. Die Larven zeigen eine erhöhte Bewegung im Dunkeln und eine verminderte Bewegung im Licht, wenn sie aufgrund des erhöhten Stressniveaus einem abnormalen Hell-Dunkel-Zyklus ausgesetzt sind. Die Berechnung der Differenz zwischen der durchschnittlichen zurückgelegten Strecke in der letzten Minute einer Anfangsperiode und der ersten Minute der folgenden Periode gibt uns Aufschluss über die photomotorische Reaktion der Fische.

In diesem Protokoll werden wir die photomotorische Reaktion von Zebrafisch- und Dickkopf-Elritzenlarven untersuchen, die Koffein ausgesetzt waren. Legen Sie zunächst die Well-Platte mit dem Versuchsfisch in die Verhaltensaufzeichnungskammer. Öffnen Sie dann das zuvor entwickelte Tracking-Protokoll. Stellen Sie im Video-Tracking-Viewer sicher, dass alle Larven sichtbar sind, dass sich nur eine Larve in jeder Vertiefung befindet und dass die Vertiefungen mit den definierten Beobachtungsbereichen ausgerichtet sind.

Klicken Sie anschließend auf Experimentieren und Ausführen. Geben Sie den Namen und den Speicherort der Daten an und klicken Sie auf das Symbol Mehrere Live-Bilder, um alle vordefinierten Anzeigebereiche hervorzuheben. Schließen Sie abschließend das Bedienfeld der Aufnahmekammer und klicken Sie auf dem Computermonitor auf Hintergrund und dann auf Start.