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- Schaffen Sie zunächst ein dreiseitiges Gehege um den Testbereich, um äußere Reize zu minimieren, die das Verhalten der Fische beeinträchtigen können. Richten Sie eine diffuse Deckenbeleuchtung ein, um Reflexionen auf der Wasseroberfläche zu vermeiden. Als nächstes füllen Sie die Arena, die in dunkle und helle Zonen unterteilt ist, mit 28 Grad Celsius warmem Lebensraumwasser.
Platziere die Arena in der Umzäunung. Halten Sie das Habitatbecken mit den zu testenden Fischen außerhalb des Geheges. Lassen Sie die Fische sich akklimatisieren, um ihren Stress abzubauen.
Fangen Sie
nun vorsichtig einen Fisch aus dem Habitatbecken ein und setzen Sie ihn in das Testbecken. Positionieren Sie den Fisch senkrecht zu den Längsseiten der Arena, um eine Verzerrung in Richtung einer der beiden Zonen zu vermeiden. Beobachten Sie das Verhalten der Fische mit Hilfe einer Aufzeichnungssoftware und wiederholen Sie den Test für den Rest der Fische. Messen Sie die durchschnittliche Zeit, die jeder Fisch in der hellen und dunklen Zone verbringt.
Zebrafische neigen dazu, mehr Zeit in der dunklen Zone zu verbringen, wenn sie ängstlich sind. Im Beispielprotokoll führen wir einen Hell-Dunkel-Test durch, um die Auswirkungen der Ethanolexposition auf das Verhalten von Zebrafischen zu beobachten.
- Besorge dir eine hell-dunkle Arena mit einer Breite von 9 und 1/2 Zentimetern, einer Länge von 55 Zentimetern und einer Tiefe von 9 1/2 Zentimetern mit einem weißen, wasserdichten Boden. Kleben Sie weißes und schwarzes, wasserfestes, nicht reflektierendes Papier mit Velcro an die Innenwände der Arena, wobei die Hälfte der Arena weiß und die andere Hälfte schwarz bedeckt ist. Füllen Sie die Arena bis zu einer Tiefe von 5 Zentimetern mit 25 bis 28 Grad Celsius heißem Lebensraumwasser. Halten Sie diese Temperatur während des gesamten Tests aufrecht.
Minimieren Sie äußere visuelle Reize, indem Sie eine weiße dreiseitige Umzäunung für die Platzierung der Arena konstruieren. Stellen Sie sicher, dass der Testbereich über eine diffuse Deckenbeleuchtung verfügt, die keine Reflexionen auf der Wasseroberfläche verursacht, aber dennoch hell genug für die Bewegungsverfolgungssoftware oder die nachträgliche manuelle Quantifizierung von Videobildern ist. Stellen Sie dann die Aufzeichnungs- und Bewegungsanalyseparameter der Verhaltensverfolgungssoftware mit einer Testdauer von 5 bis 15 Minuten ein, je nach Forschungsfragestellung.
Transportieren Sie die zu testende Fischgruppe zum Forschungsbereich im Habitatbecken und setzen Sie sie außerhalb des Arenageheges ab. Lassen Sie den Fisch 10 Minuten akklimatisieren. Netzen Sie einen Fisch aus der entsprechenden Gruppe vorsichtig ein und platzieren Sie ihn in der Mitte der Hell-Dunkel-Arena, wobei Sie jeden Fisch freilassen, wenn er parallel zur Längsachse der Arena positioniert ist, um zu vermeiden, dass der Fisch in die helle oder dunkle Zone gedrängt wird.
Beginnen Sie sofort nach dem Loslassen des Tieres mit der Aufzeichnung des Verhaltens. Achten Sie auf Softwareprobleme beim Verfolgen des Fisches oder auf das Springen oder Einfrieren von Fischen. Nachdem der Versuch beendet ist, netzen Sie die Fische vorsichtig ein und bringen Sie sie aus der Arena in ein Auffangbecken oder Lebensraumbecken. Drehen Sie die Arena um 180 Grad, nachdem die Hälfte der Probanden getestet wurde, um Verwirrungen aufgrund von Verzerrungen zu vermeiden, die sich daraus ergeben, dass das Ende der Arena auf das offene Ende des Geheges ausgerichtet ist.
Beginnen Sie die Analyse, indem Sie die Zeit untersuchen, die Sie in hellen und dunklen Zonen verbracht haben. Ermitteln Sie für jede Gruppe und für jeden Fisch die relative Zeit, die Sie in der hellen und dunklen Zone verbracht haben, und analysieren Sie mit einem t-Test bei einer Stichprobe, um festzustellen, ob die Gruppen einen Bereich gegenüber dem anderen signifikant bevorzugen. Um Präferenzen zu vergleichen, berechnen Sie einen Präferenzindex, indem Sie die Zeit, die Sie in der hellen Zone verbringen, von der Zeit in der dunklen Zone subtrahieren, und vergleichen Sie die Unterschiede zwischen den Gruppen mithilfe von t-Tests. Vergleichen Sie mehrere Gruppen mit einer unidirektionalen Varianzanalyse, wobei Sie bei Bedarf den Post-hoc-Test der ehrlichen signifikanten Differenz von Tukey verwenden.