Morpholino-Injektion: Eine Methode zur Unterdrückung der Zielgenexpression zur Untersuchung der Funktion im Zebrafisch

- Ein Ansatz, um die Funktion eines Gens zu bestimmen, besteht darin, seine Expression zu unterdrücken und die Wirkung zu beobachten. Morpholino-Oligomere werden häufig in Knock-down-Studien an Zebrafischen verwendet. Ein Morpholino ist ein synthetisches DNA-ähnliches Molekül mit einer Länge von etwa 25 Basen, das die Expression des Zielgens hemmt.

Für die Morpholino-Behandlung legen Sie einen betäubten Fisch mit einer teilweise amputierten Schwanzflosse auf eine Injektionsplatte und positionieren Sie die Platte unter einem Stereomikroskop. Injizieren Sie nur die dorsale Seite, während die nicht injizierte ventrale Seite als Kontrolle dient. Morpholinos können auf zwei Arten funktionieren, abhängig von der Sequenz, auf die sie abzielen. Zunächst binden sie sich an die Translationsstartstelle auf einer mRNA und verhindern die Proteinsynthese, indem sie die Translation blockieren.

Zweitens kann es an die Intron-Exon-Verbindung auf einer Prä-mRNA binden und ein ordnungsgemäßes Spleißen verhindern, was zu einem defekten Transkript führt, das von der Zelle abgebaut wird. Untersuchen Sie später die Schwanzflossen auf Auswuchs. Unterschiede zwischen dem Nachwachsen der morpholinobehandelt