Probenvorbereitung für die Lichtblattmikroskopie: Einbetten lebender Zebrafischembryonen für die Langzeitbildgebung

- Bereiten Sie zunächst Agarose vor, indem Sie E3-Medium hinzufügen, das die dechorionierten Embryonen mit Kalzium versorgt, um geschmolzene Agarose zu erhalten. Fügen Sie als nächstes MS222 hinzu, um Embryonen zu betäuben. Kühlen Sie die Agarosemischung auf 38 Grad Celsius ab, damit sie fast fest wird. Wählen Sie einige dechorionierte Embryonen aus, die fluoreszierende Proteine exprimieren, und übertragen Sie sie in die Agarosemischung.

Führen Sie dann einen Kolben vollständig in eine Glaskapillare ein und ziehen Sie einen Embryo heraus, wobei Sie darauf achten, dass er mit dem Kopf voran eintritt. Sobald die Agarose erstarrt ist, halte die Kapillare mit Klebeband aufrecht in einem Becherglas, das E3-Medium enthält. Der offene Kapillarboden fördert den Gasaustausch für die Embryoprobe.

Legen Sie die Kapillare in den Probenhalter eines Lichtblatt-Fluoreszenzmikroskops. Der Laser bildet ein dünnes Lichtblatt, das es ermöglicht, dass ein Detektionsobjektiv, das senkrecht zur Probe positioniert ist, ein Querschnittsbild aufnehmen kann. Im Beispielprotokoll werden wir Zebrafischembryonen montieren, um das sich entwickelnde Auge abzubilden.

Beginnen Sie mit der Zubereitung der Agarose.