Layered Agar Mounting: Vorbereitung lebender Zebrafischembryonen für die Langzeitbildgebung mit einem inversen Mikroskop

0 Aufrufe • 3:27 Min. • April 30th, 2023

- Beginnen Sie mit einer Petrischale, die Embryonen im E3-Medium enthält. Fügen Sie Tricain hinzu, um die Embryonen zu betäuben, und Phenylthiouria, PTU-Lösung, um die Pigmentbildung zu hemmen. Mit Hilfe eines Präpariermikroskops werden die Embryonen dechorioniert.

Übertragen Sie einen der dechorionierten Embryonen mit einer Glaspipette in eine kleine Petrischale mit einem flachen Glasboden in der Mitte, und entfernen Sie das überschüssige Medium. Geben Sie anschließend eine Agaroselösung in einer optimalen Konzentration, um die Verzerrung und Motilität des Embryos zu minimieren, in ein Mikrofugenröhrchen und erhitzen Sie es. Senken Sie die Temperatur auf 30 Grad Celsius, um den Embryo nicht durch Hitze zu beschädigen.

Gießen Sie die erste Schicht Agarose über den Embryo und füllen Sie die flache Vertiefung vollständig aus. Stellen Sie ein weiteres Deckglas über die Vertiefung und fügen Sie 1% Agarose hinzu. Die zweite Schicht hält das Deckglas an Ort und Stelle.

Sobald die Agarose fest wird, füllen Sie die Petrischale mit dem E3-Medium, das Tricain enthält. Dies ist die dritte Schicht und hält die Agarose und den Embryo mit Feuchtigkeit versorgt. Im folgenden Protokoll werden wir

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