0 Aufrufe • 3:14 Min. • April 30th, 2023
- Ein Zebrafischauge besteht aus Hornhaut, Sklera, Linse und Netzhaut. Die Hornhaut ist ein transparentes Gewebe, das Licht in das Auge eindringen lässt. Die Sklera ist ein undurchsichtiges Gewebe, das mit der Hornhaut durchläuft und eine äußere Schutzschicht bildet. Die Linse ist eine kugelförmige Struktur, die Licht auf die Netzhaut fokussiert, eine lichtempfindliche Gewebeschicht, die Licht in ein neuronales Signal umwandelt.
Um das Auge zu präparieren, füllen Sie eine Petrischale mit Silikon und lassen Sie sie aushärten. Legen Sie nun einen betäubten Fisch in die Schale und schneiden Sie die Augen mit einer Mikroschere heraus. Übertragen Sie die Augen auf eine mit PBS gefüllte Platte, um einen konstanten pH-Wert im Gewebe aufrechtzuerhalten, und richten Sie das Auge mit der hinteren Seite nach oben aus. Halten Sie das Auge mit einer Pinzette fest und machen Sie vorsichtig drei radiale Schnitte durch die Sklera und die Netzhaut.
Falten Sie als Nächstes das Taschentuch aus, um die Linse freizulegen. Positionieren Sie nun das Auge mit der vorderen Seite nach oben und entfernen Sie die Sklera und die Netzhaut. Entferne die Linse aus dem präparierten Auge und entferne das restliche Gewebe um das Auge herum. Im folgenden Protokoll werden wir Linsensektionen von Larven und adulten Zebrafischen durchführen, um die Linsenmorphologie zu analysieren.
Nach Bestätigung einer ausreichenden Sedierung mit Tricain entfernen Sie mit einer Mikrodissektionsschere sofort beide Augen eines erwachsenen Zebrafisches oder einer Zebrafischlarve und legen Sie beide Augen in eine 35-Millimeter-Petrischale mit einer mit PBS gefüllten Silikondissektionsform. Um die Linse eines erwachsenen Zebrafisches zu entnehmen, platzieren Sie das Auge mit der hinteren Seite nach oben und führen Sie die Pinzette in einem Winkel von weniger als 45 Grad durch die Papille ein. Machen Sie mit einer Präparierschere zwei oder drei radiale Schnitte durch die Netzhaut und Sklera von der Sehscheibe bis zur Ziliarzone im immobilisierten Auge und schälen Sie die Netzhaut und die Sklera wie Blütenblätter zurück. Drehen Sie das Auge mit der Hornhautseite nach oben um und verwenden Sie die flache Seite der Schere, um die Linse indirekt durch Manipulation der Sklera und der Hornhaut zu immobilisieren, während Sie mit einer Pinzette die Netzhaut und das anhaftende Gewebe wegziehen. Schneiden Sie dann vorsichtig überschüssiges Gewebe von der Linse ab.
Für die Entnahme von Zebrafisch-Larven spielt ein Larvenauge mit der hinteren Seite nach oben auf den flachen Teil einer Silikonschale von PBS. Und verwenden Sie eine geschärfte Wolframnadel, um Radioschnitte durch die Netzhaut und die Sklera zu machen, während Sie das Auge mit einer anderen Nadel oder Pinzette ruhigstellen. Schöpfen Sie dann die Linse vorsichtig mit der stumpfen Seite einer speziell angefertigten Wolframdrahtnadel aus dem dissoziierten Auge und ziehen Sie das anhaftende Gewebe vorsichtig ab.