im lebenden Organismus Elektroporation: Eine ortsspezifische Methode zur Transfektion von Zebrafischen

- Legen Sie zunächst einen betäubten Fisch mit der Rückenseite nach oben in einen vorbenetzten Schwamm. Injizieren Sie vor der Elektroporation genetisches Material in das Zielgewebe, in diesem Fall in einen Teil des Vorderhirns, der Telencephalon genannt wird. Geben Sie anschließend eine kleine Menge Ultraschallgel auf den Kopf. Tragen Sie das Gel auch auf die Spitze der Elektroden auf, um einen effizienten Betrieb zu ermöglichen. Platzieren Sie die positive Elektrode auf der ventralen Seite des Kopfes und die negative Elektrode auf der dorsalen Seite.

Drücken Sie nun die Elektroden vorsichtig gegen den Kopf und verabreichen Sie mehrere Impulse elektrischen Stroms. Der Strom erzeugt temporäre Poren in der Plasmamembran von elektroporierten Zellen und macht sie durchlässig. Der Strom erleichtert auch die Bewegung von negativ geladenen Partikeln, wie z. B. DNA-Expressionsplasmiden oder RNAi-Oligonukleotiden, die in der Umgebung vorhanden sind, in die Zellen. Im folgenden Beispiel werden wir die Elektroporation verwenden, um ein rekombinantes Plasmid in Ependymogliazellen einzuführen, Stammzellen, die für die Bildung neuer Neuronen verantwortlich sind.

- Decken Sie das Fisch-Telencephalon mit einer kleinen Menge Ultraschallgel ab. Für die Elektroporation des mit Plasmid injizierten Tieres nehmen Sie den Schwamm aus der Auswurfeinrichtung und tauchen Sie die Innenseite der Elektrodenspitzen in Ultraschallgel. Positionieren Sie den Fischkopf zwischen den Elektroden, wobei sich die positive Elektrode an der ventralen Seite des Kopfes und die negative Elektrode an der dorsalen Seite befindet. Drücken Sie dann, während Sie den Körper des Fisches noch im Schwamm halten, die Elektroden sanft und präzise gegen das Telencephalon und leiten Sie den Strom mit dem Fußpedal, wobei Sie die Elektroden an Ort und Stelle halten, bis alle fünf Impulse beendet sind.