0 Aufrufe • 3:54 Min. • April 30th, 2023
- Legen Sie einen eingeschläferten Fisch auf ein Sezierbett und enthaupten Sie ihn mit einer chirurgischen Klinge auf Höhe der Kiemen. Halten Sie den Kopf mit der Bauchseite nach oben und entfernen Sie die Weichteile, bis Sie das Chiasma opticum sehen, eine Struktur aus Sehnerven, die das Gehirn mit den Augen verbindet.
Durchtrennen Sie die Sehnerven und entfernen Sie die Augen. Richten Sie nun den Fisch mit der Rückenseite nach oben aus und entfernen Sie die Teile des Schädels, um das Gehirn zu isolieren. Übertragen Sie das Gehirn in eine Petrischale, die ein Seziermedium enthält, um einen konstanten pH-Wert des Gewebes aufrechtzuerhalten. Beobachte die Teile des Gehirns.
Die Riechkolben sind ein Paar Strukturen am vorderen Ende, die mit den Riechorganen verbunden sind und Geruchssignale erkennen. Das Telencephalon umfasst gedächtnisbezogene Bereiche. Die Habenula leitet Informationen vom Telencephalon an andere Teile des Gehirns weiter.
Das optische Tectum ist ein Zentrum der sensorischen Informationsverarbeitung. Das Kleinhirn spielt eine Rolle bei der somatischen Motorik und dem Gleichgewicht. Und das Mark leitet Informationen vom Rückenmark an das Gehirn weiter. Im folgenden Protokoll werden wir das Gehirn eines erwachsenen Zebrafisches isolieren, um neurale Stammzellen aus verschiedenen Regionen zu sammeln.
Bereiten Sie zunächst ein Sezierbett vor, indem Sie eine Petrischale mit Gelpacks füllen. Decken Sie dann die Schale mit dem entsprechenden Deckel ab und inkubieren Sie sie bei minus 20 Grad Celsius. Sobald das Gel gefroren ist, nimm die Schüssel aus dem Gefrierschrank und lege ein sauberes Quadrat Filterpapier auf den Deckel. Wickeln Sie sowohl das Papier als auch die Schale mit Plastikfolie ein.
Behandeln Sie anschließend alle Mikrodissektionsinstrumente mit 70%igem Ethanol. Legen Sie diese sterilisierten Werkzeuge neben ein Präpariermikroskop und positionieren Sie das fertige Präparierbett unter dem Mikroskop mit Lichtwellenleiterbeleuchtung. Legen Sie sofort eine zuvor präparierte Kopfprobe auf das Präparierbett und richten Sie sie so aus, dass ihre Rückenseite nach unten zeigt.
Machen Sie dann mit einer Schere einen Längsschnitt durch das Weichgewebe vom Hinterkopf bis zum Mund. Legen Sie anschließend die Schädelbasis mit einer Pinzette frei und entfernen Sie das gesamte angrenzende Gewebe. Schneiden Sie als Nächstes eine der Seitenwände des Schädels ab, beginnend am Hinterkopf und in Richtung der Tectum Region des Gehirns. Wiederholen Sie diesen Vorgang für die kontralaterale Seite. Fahren Sie mit dem Durchtrennen des Sehnervs fort. Entfernen Sie dann die beiden seitlichen Seiten des Schädels auf Höhe des Tectums
Zum Schluss drehst du den Kopf mit der Bauchseite nach oben. Und mit einer Pinzette den apikalsten Teil des Schädels abziehen, um das Gehirn freizulegen. Anschließend werden das Gehirn und alle verbleibenden Teile des Schädels in eine Schale mit Dissektionsmedium übertragen, das aus DMM F12 besteht, das mit Penicillin-Streptomycin ergänzt ist. Reinigen Sie mit dem Kunststoffgriff eines Mikromessers unter dem Mikroskop das Hirngewebe und achten Sie darauf, keine neuronalen Strukturen zu beschädigen. Verwenden Sie bis zu zwei Zebrafischgehirne, um aus dem gesamten Gehirn abgeleitete Neurosphären zu erzeugen.