Transduktion zur Markierung von PDX-Tumorzellen: Einführung eines Lentivirus-exprimierenden fluoreszierenden Markers in die Tumorzelle in vitro

Das Lentivirus ist ein Retrovirus, das genetisches RNA-Material enthält. Dieses Virus bietet eine effiziente und stabile Methode, um Transgene in Krebszelllinien einzuführen. Beginnen Sie damit, Neuraminidase in ein Röhrchen zu geben, das Lentivirus enthält, das grün fluoreszierendes Protein (GFP) exprimiert. Halten Sie das Röhrchen eine Stunde lang bei 37 Grad Celsius, um die Bindungseffizienz des Virus zu erhöhen.

Zentrifugieren Sie anschließend ein Röhrchen mit der Tumorzellsuspension, um ein Pellet zu bilden. Fügen Sie Mammosphärenmedien hinzu, die Polybren enthalten, um die Zellen zu resuspendieren. Polybren ist ein kationisches Polymer, das die Effizienz lentiviraler Infektionen erhöht. Plattieren Sie nun die optimale Anzahl von Tumorzellen pro Vertiefung in einer Sechs-Well-Gewebekulturplatte. Geben Sie die erforderliche Menge Lentivirus in jede Vertiefung der Kulturplatte.

Schwenken Sie die Platte, um den Inhalt zu mischen, und halten Sie sie 96 Stunden lang bei 37 Grad Celsius mit einer kontinuierlichen Zufuhr von Kohlendioxid. Das Lentivirus dringt in die Zelle ein und setzt RNA frei. Die virale reverse Transkriptase wandelt die RNA in doppelsträngige DNA um, die sich in