3D-Co-Kultur mit direkter Interaktion: Co-Kultivierung von Krebszellen mit Monozyten, um deren Interaktion zu untersuchen

Fügen Sie zunächst DQ-Kollagen IV, ein durch Fluoreszenzfarbstoff abgeschrecktes Proteinsubstrat, in einen extrazellulären Matrixextrakt oder ECME hinzu. Gießen Sie diesen Extrakt in jede Vertiefung eines Objektträgers mit zwei Vertiefungen. Bezeichnen Sie das erste gut als Co-Kultur, das zweite als Kontrolle. Geben Sie eine angemessene Menge fluoreszenzmarkierter Krebszellsuspension in die Vertiefungen und inkubieren Sie den Objektträger bei 37 Grad Celsius für die gewünschte Zeit, um die Zelladhäsion zu fördern.

Geben Sie eine erforderliche Menge Monozyten-Zellsuspension in die erste Vertiefung. Lassen Sie die ECME bei 37 Grad Celsius erstarren. Gießen Sie gleiche Anteile von Krebszell- und Monozyten-Kulturmedien in jede Vertiefung und inkubieren Sie den Objektträger bei 37 Grad Celsius für die gewünschte Dauer in einer Kohlendioxidumgebung. In der Co-Kultur-Vertiefung sezernieren Krebszellen Proteine wie Monozyten und Chemolockstoffprotein, um Monozyten anzuziehen.

Im Gegensatz dazu produzieren Monozyten Matrix-Metalloproteinase oder MMP, um das Kollagen abzubauen und die Invasion von Krebszellen zu fördern. Betrachten Sie den Objektträger unter einem konfokalen Mikroskop. Der D