Intraduktale Injektion: Abgabe der Injektionsmischung in die Kanäle der Brustdrüse der Maus

Eine intraduktale Injektion ist eine Technik zur Verabreichung einer Injektionsmischung, die Krebszellen, Expressionsvektoren oder ein mit einem Tracerfarbstoff ergänztes Therapeutikum in die Kanäle der Brustdrüse enthalten kann.

Füllen Sie für dieses Verfahren eine Spritze mit der Injektionsmischung. Legen Sie als nächstes eine betäubte Maus mit der Bauchseite nach oben auf ein Operationsbett. Machen Sie einen Schnitt in der Haut zwischen der Leisten- oder dem fünften Paar Brustdrüsen. Trennen Sie vorsichtig den Hautlappen vom parietalen Peritoneum, um den Duktalbaum sichtbar zu machen.

Heben Sie den Nippel mit einer Pinzette an und schneiden Sie vorsichtig den äußeren Teil ab, um die Kanalöffnung zu sehen. Heben Sie den Rand des Hautlappens mit einer Pinzette an und führen Sie die Spritzennadel vorsichtig in den Sauger ein, um die Injektionsmischung zu verabreichen. Überwachen Sie die Bewegung des Tracerfarbstoffs in den Milchgangbaum. Der Farbstoff breitet sich im duktalen Baum aus, ohne in das Stroma einzudringen, was auf eine erfolgreiche Injektion hinweist.

Warten Sie einige Sekunden, um ein Verschütten zu vermeiden, und entfernen Sie dann langsam die Nadel von der Injektionsstelle. Schließen Sie den Schnitt mit dem Wundclip. Im folgenden Protokoll führen wir eine intraduktale Injektion durch, um das Cre-exprimierende Adenovirus in die Brustdrüse der Maus zu bringen.

Verwenden Sie während des gesamten chirurgischen Eingriffs aseptische Techniken. Machen Sie einen Schnitt auf der Haut in einer Länge von etwa einem Zentimeter zwischen den beiden vierten Leistendrüsen. Trennen Sie vorsichtig den Hautlappen vom parietalen Peritoneum, um den Milchgangbaum sichtbar zu machen.

Halten Sie den Nippel vorsichtig mit einer Uhrmacherzange fest, um den äußeren Nippel zu entfernen, ohne die Haut in der Nähe mit einer Mikrodissektionsschere zu schneiden. Laden Sie etwa drei bis fünf Mikroliter der Cre-Adenovirus-Injektionsmischung in eine 25-Mikroliter-Hamilton-Spritze mit einer 33-Gauge-Metallnabennadel

.

Schätzen Sie das Volumen der Injektionsmischung in der Spritze auf der Grundlage des in der Mischung enthaltenen blauen Farbstoffs. Halten Sie den Rand des Hautlappens vorsichtig mit einer fein gebogenen Pinzette fest und injizieren Sie die Cre-Adenovirus-Injektionsmischung langsam in die Brustwarze, während Sie die Ausbreitung des blauen Farbstoffs in den Milchgangbaum überwachen. Halten Sie die Injektionsrate so langsam wie möglich, um eine Beschädigung des duktalen Lumens zu vermeiden.

Eine erfolgreiche intraduktale Injektion wird durch injizierte Flüssigkeiten angezeigt, die sich über den gesamten duktalen Baum verteilen, ohne in das Stromakompartiment zu gelangen. Ziehen Sie die Nadel vorsichtig aus dem Nippel zurück, um ein Auslaufen der eingespritzten Flüssigkeit zu vermeiden. Untersuchen Sie die distale Seite der Brustdrüse oder den umgebenden Bereich der injizierten Brustwarze.

Farbstoff, der in das nahe gelegene Stroma diffundiert, wie hier gezeigt, deutet eher auf eine Injektion von Brustfettpolstern als auf eine erfolgreiche intraduktale Injektion hin. Verschließen Sie die Operationswunden und die Haut mit Wundklammern.

Nehmen Sie die Maus aus der Anästhesie und legen Sie sie zur Genesung auf ein Heizkissen in einem sauberen Käfig. Überwachen Sie die Entwicklung des Mammatumors, wie im Textprotokoll beschrieben.