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Krebsforschung
0 Aufrufe • 5:38 Min. • April 30th, 2023
- Säen Sie zunächst die Lungenkrebszellen in einen T-Kolben mit Gewebekulturmedium und lassen Sie ihn über Nacht wachsen. Als nächstes suspendieren Sie die miRNA mit einem Transfiktionsmittel in ein Transfiktionsmedium. Entfernen Sie das Medium und fügen Sie ein Transfiktionsmedium hinzu, das miRNA in Krebszellen einführt. miRNA ist ein nicht-kodierendes RNA-Molekül, das an eine komplementäre mRNA-Sequenz bindet und die Genexpression blockiert. Inkubieren Sie den Kolben für die gewünschte Dauer.
Ersetzen Sie als Nächstes das Medium durch Gewebekulturmedien und züchten Sie es über Nacht. Fügen Sie Trypsin für die Zelldissoziation hinzu. Übertragen Sie die Mischung in ein Zentrifugenröhrchen, das PBS enthält, und zentrifugieren Sie es. Entfernen Sie den Überstand und fügen Sie Lysepuffer hinzu, um die Zellen zu lysieren, und fügen Sie ultrareines Ethanol für die Fällung hinzu. Geben Sie das Gemisch in eine Trennsäule, um Nukleinsäure und Zentrifuge zu reinigen.
Entfernen Sie den Durchfluss und fügen Sie einen Waschpuffer hinzu, um die lysierte Zellmembran und die Zentrifuge zu entfernen. Entfernen Sie den Waschpuffer und fügen Sie DNase mit DNase-Aufschlusspuffer hinzu, um DNA aus de
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