Antikörper-Microarray: Eine Technik zur Untersuchung der Proteinexpression von miRNA-behandelten Lungenkrebszellen

- Beginnen Sie mit der Zugabe einer Biotinlösung und eines Markierungspuffers zur Proteinprobe. Inkubieren, um die Bindung von Biotin an die Proteine zu erleichtern. Fügen Sie ein Stoppreagenz und einen Vortex hinzu. Legen Sie anschließend einen Antikörper-Microarray-Objektträger in eine Schale, die ein Blockierungsreagenz enthält, um eine unspezifische Bindung von Antikörpern zu verhindern. Waschen Sie den Objektträger mit doppelt destilliertem Wasser, um die Verstopfungslösung zu entfernen. Legen Sie den Microarray-Objektträger in eine Kammer. Mischen Sie die biotinylierte Proteinprobe mit einer Kupplungslösung und geben Sie sie auf den Objektträger, um die Bindung der Zielproteine an die entsprechenden Antikörper zu erleichtern. Schieben Sie den Objektträger in eine Schüssel mit einem Waschpuffer und ersetzen Sie den Puffer durch doppelt destilliertes Wasser. Legen Sie den Objektträger anschließend in einen Detektionspuffer, der fluoreszenzmarkiertes Streptavidin enthält, um seine Bindung an die biotinylierten Proteine zu fördern.

Inkubieren Sie die Schale im Dunkeln, um die Fluoreszenzintensität aufrechtzuerhalten. Entfernen Sie den Objektträger und legen Sie ihn in einen Micro