Immunhistochemische Färbung: Ein Verfahren zur Gewinnung räumlicher Informationen aus dünnen Gewebeschnitten

- Legen Sie zunächst einen dünnen Gewebeschnitt in eine Ammoniaklösung, um eine schonende Antigenentnahme zu ermöglichen. Übertragen Sie den Schnitt auf einen mit Polylysin beschichteten Objektträger. Negativ geladene Zellen binden an das positiv geladene Polylysin. Fügen Sie anschließend Wasserstoffperoxid hinzu, um die endogene Peroxidaseaktivität zu blockieren. Waschen Sie den Objektträger in Tris-Buffered Kochsalzlösung, TBS.

TBS fördert den Zugang der Antikörper zu Antigenen, indem es die Proteinvernetzungen aufbricht. Waschen Sie den Schnitt mit einer Blocklösung, um die unspezifische Antikörperbindung zu reduzieren. Geben Sie primäre Antikörper in den Schnitt und inkubieren Sie über Nacht. Der primäre Antikörper bindet an sein spezifisches Antigen, das auf der Zelloberfläche vorhanden ist. Waschen Sie den Objektträger mit TBS.

Fügen Sie Biotin-konjugierte Sekundärantikörper hinzu, die an die Fc-Region des Primärantikörpers binden. Waschen Sie den Abschnitt mit dem Enzym Streptavidin-Biotin-Peroxidase. Als nächstes fügen Sie dem Gewebe ein chromogenes Substrat der Peroxidase hinzu. Die Peroxidase wandelt Chromogen in ein gefärbtes unlösliches Produkt um.

Färben Sie das Gewebe