Exosomenisolierung: Eine Technik zur Trennung von Exosomen aus dem Plasma von Patienten mit nicht-kleinzelligem Lungenkrebs

- Exosomen sind kleine, membrangebundene Vesikel, die Biomoleküle wie Lipide, Proteine, DNA, mRNA und microRNA tragen. Exosomen werden von verschiedenen Zelltypen in extrazelluläre Räume abgegeben und können aus Bioflüssigkeiten wie Plasma isoliert werden.

Zentrifugieren Sie zunächst die Plasmaprobe, um Zellen und Ablagerungen zu entfernen. Den Plasmaüberstand in ein frisches Röhrchen überführen. Behandeln Sie das Plasma mit der gewünschten Konzentration des Ribonuklease-Enzyms. Inkubieren Sie die Probe auf einem Heizblock bei 37 Grad Celsius für eine angemessene Dauer.

Das Enzym baut jegliche freie RNA in der Probe ab, während die exosomale RNA geschützt bleibt. Verdünnen Sie die Probe mit PBS. Fügen Sie anschließend die gewünschte Konzentration der Proteinase-K-Enzymlösung hinzu und inkubieren Sie sie für eine angemessene Zeit bei 37 Grad Celsius. Proteinase K baut den Großteil der Plasmaproteine ab. Es inaktiviert auch das zuvor hinzugefügte Ribonuklease-Enzym, wodurch das Risiko eines exosomalen RNA-Abbaus während der nachgelagerten Verarbeitung eliminiert wird.

Fügen Sie ein geeignetes Volumen Exosom-Fällungspuffer hinzu, um die Trennung des Exosoms vom Plasma zu erleichtern.