3D-DNA-Fisch: Eine Technik zur Lokalisierung eines bestimmten Gens auf einem Chromosom

- Nehmen Sie einen funktionalisierten Draht, an dessen Oberfläche Zellen befestigt und durch Immunfluoreszenzfärbung gefärbt sind. Waschen Sie es mit einer eiskalten Kochsalzlösung, Natriumcitrat oder SSC-Lösung. Legen Sie den Draht in ein Mikroröhrchen mit fluoreszenzmarkierten Sonden und verschließen Sie es mit einem Drahtstopfen. Inkubieren Sie das Mikroröhrchen in einer dunklen, feuchten Kammer in einem Hybridisierungsofen bei 75 Grad Celsius, um die DNA in den Zellen zu denaturieren.

Bringen Sie die Kammer bei 37 Grad Celsius in einen Ofen, damit die Sonden an die komplementäre Sequenz auf der DNA binden können. Nehmen Sie dann die Kammer aus dem Ofen und nehmen Sie den Draht heraus. Tauchen Sie den Draht in ein Rohr mit SSC-Lösung bei der gewünschten Temperatur. Waschen Sie den Draht mit der SSC-Lösung, die Tween enthält, um unspezifische oder teilweise hybridisierte Sonden zu entfernen, und waschen Sie ihn erneut in destilliertem Wasser.

Trocknen Sie den Draht und inkubieren Sie die funktionalisierte Spitze in DAPI-Lösung, um die Zellkerne zu färben. Spülen Sie den Draht in PBS ab und trocknen Sie ihn an der Luft. Legen Sie den Draht unter ein Fluoreszenzmikroskop. Die Sonde