Knochenmarkentnahme aus der Hintergliedmaße der Maus
JoVE Encyclopedia of Experiments
Krebsforschung
0 Ansichten • 3:38 Min. • February 9th, 2026
Loading...
Übersicht
Dieser Artikel stellt ein detailliertes Protokoll zur Isolierung von frischem, gesamtem Knochenmark aus den Hintergliedmaßen von Mäusen speziell für die nachgeschaltete Massenzytometrie-Analyse von neutrophilen Zelllinien vor. Die Methode soll die Untersuchung von Knochenmarkdefekten im Zusammenhang mit Blutkrankheiten wie Leukämie erleichtern.
Wesentliche Studienkomponenten
Bereich der Wissenschaft
- Hämatologie
- Immunologie
- Zellbiologie
Hintergrund
- Das Knochenmark ist ein lebenswichtiges Gewebe, das hämatopoetische Stammzellen enthält, die für die Blutbildung verantwortlich sind.
- Die Isolierung von Knochenmark aus großen Knochen wie dem Femur und der Tibia ergibt hohe Zellzahlen.
- Die Analyse des Knochenmarks ist entscheidend für die Untersuchung von Immunzellpopulationen und Bluterkrankungen.
- Die Massenzytometrie ermöglicht eine hochdimensionale Analyse von Zellpopulationen, einschließlich neutrophiler Zelllinien.
Zweck der Studie
- Eine reproduzierbare Anleitung zur Gewinnung von gesamtem Knochenmark aus den Hintergliedmaßen von Mäusen bereitstellen.
- Die Analyse von neutrophilen Vorläuferzellen aus frisch isoliertem Knochenmark mittels Massenzytometrie ermöglichen.
- Die Erforschung von Knochenmarkdefekten im Zusammenhang mit Blutkrankheiten unterstützen.
Verwendete Methoden
- Euthanasie von 6–10 Wochen alten C57 black-6 Mäusen.
- Sterilisation des Operationsbereichs mit 70 % Ethanol.
- Präparation zur Freilegung und Isolierung von Tibia und Femur aus den Hinterbeinen.
- Entfernung des Muskelgewebes, um Zugang zu den Knochen zu erhalten.
- Einlegen der Knochen in kalte PBS-Lösung zur Erhaltung der Zellviabilität.
- Vorbereitung eines zweischichtigen Mikrozentrifugenröhrchen-Systems mit einem Loch im inneren Röhrchen.
- Zentrifugation zur Gewinnung des Knochenmarks in das Sammelröhrchen.
Hauptergebnisse
- Effiziente Isolierung des gesamten Knochenmarks aus dem Femur und der Tibia der Maus.
- Das gewonnene Knochenmark eignet sich für nachgeschaltete Anwendungen wie die Massenzytometrie.
- Das Protokoll erhält physiologische Bedingungen, um die Zellintegrität zu bewahren.
- Liefert ausreichende Zellzahlen zur Analyse von neutrophilen Vorläuferzellen und anderen hämatopoetischen Zellen.
Schlussfolgerungen
- Dieses Protokoll stellt eine zuverlässige Methode zur Isolierung von gesamtem Knochenmark aus den Hintergliedmaßen von Mäusen bereit.
- Der Ansatz ermöglicht die Aufbereitung von Proben in hoher Qualität für die Massenzytometrie und verwandte Analysen.
- Es ist anwendbar für Studien, die hämatopoetische und immunzelluläre Populationen im gesunden und krankhaften Zustand untersuchen.
Häufig gestellte Fragen
Welche Mausstämme und welches Alter werden für dieses Protokoll empfohlen?
Das Protokoll verwendet 6–10 Wochen alte C57 black-6-Mäuse, die häufig in immunologischen und hämatologischen Studien eingesetzt werden.
Warum werden Femur und Tibia für die Isolierung von Knochenmark gewählt?
Diese großen Knochen liefern eine hohe Ausbeute an Knochenmarkzellen, wodurch sie ideal für nachgeschaltete Analysen wie die Massenzytometrie sind.
Wie wird die Sterilität während des Verfahrens aufrechterhalten?
Der Operationsbereich und die Maus werden mit 70 %igem Ethanol sterilisiert, und der Eingriff wird auf einem sterilen Operationsfeld unter Verwendung steriler Instrumente durchgeführt.
Welchem Zweck dient die Verwendung von kaltem PBS während der Knochenisolierung?
Kaltes PBS hilft, physiologische Bedingungen aufrechtzuerhalten und die Zellviabilität während des Isolationsprozesses zu bewahren.
Wie wird Knochenmark aus den Knochen gewonnen?
Die Knochen werden in ein Mikrozentrifugenröhrchen mit einem Loch am Boden gegeben, das in ein größeres Röhrchen eingesteckt ist, und zentrifugiert, um das Mark herauszupressen und zu sammeln.
Für welche nachgeschalteten Anwendungen ist das isolierte Knochenmark geeignet?
Das gewonnene Knochenmark eignet sich für die Massenzytometrie und andere Analysen hämatopoetischer und immunologischer Zellpopulationen.
Kann dieses Protokoll für andere Mausstämme oder Altersgruppen angepasst werden?
Obwohl das Protokoll für C57 black-6-Mäuse im Alter von 6–10 Wochen optimiert ist, kann es mit entsprechenden Anpassungen für andere Stämme oder Altersgruppen verwendet werden.
Ausschlaggebende Bedeutung für die Industrie
Eine effiziente Isolierung des gesamten Knochenmarks aus den Hintergliedmaßen von Mäusen ermöglicht die gewinnreiche Gewinnung von hämatopoetischen und immunzellulären Populationen für Forschungsvorhaben in der Entdeckungsphase. Dieses Protokoll unterstützt eine robuste Zielvalidierung und die mechanistische Risikominderung in hämatologischen und immunologischen Arbeitsabläufen, insbesondere bei Modellen von Blutkrankheiten. Eine zuverlässige Probenvorbereitung bildet die Grundlage für die Vorhersagegenauigkeit in nachgeschalteten Massenzytometrie- und translationsmedizinischen Studien.
Strategische Anwendungen in der Biopharma-Forschung und -Entwicklung
Frühe Entdeckung und Zielvalidierung
- Ermöglicht die Untersuchung hämatopoetischer Signalwege und die Spezifizierung von Immunzelllinien.
- Unterstützt die funktionelle Target-Validierung in krankheitsrelevanten Knochenmarksystemen.
- Erleichtert die mechanistische Ent风险bewertung für Forschungsportfolios zu Blutkrankheiten.
Screening und Assay-Entwicklung
- Liefert standardisierte, ertragreiche Zellpräparationen für quantitative Massenzytometrie-Assays.
- Gewährleistet Reproduzierbarkeit und Skalierbarkeit bei der Untersuchung von Immunzellpopulationen.
- Ermöglicht eine zuverlässige Bewertung der Wirkung von Substanzen auf hämatopoetische Zellen.
Translationale und präklinische Forschung
- Ermöglicht die Anwendung krankheitsrelevanter Modelle für die präklinische Untersuchung von Blutkrankheiten.
- Gewährleistet Kontinuität von der Entdeckung bis zur translationsmedizinischen Biomarker-Analyse.
- Unterstützt die risikoadjustierte Weiterentwicklung von Wirkstoffen in der Hämatologie und Immunologie.
Pipeline- und Workflow-Integration
Dieses Protokoll zur Knochenmarkentnahme verbindet den Bereich der frühen Entdeckungsforschung mit der präklinischen Forschung und liefert Grundmaterial für die Identifizierung von Leitverbindungen und translationsmedizinische Studien.
- Entdeckungsbiologie: Stellt Primärzellen für Hypothesentests und Pfadanalysen in der hämatopoetischen Forschung bereit.
- Screening: Liefert reproduzierbare, quantitative Zellinputs für zytometrische Assays mit hoher Dimensionalität.
- Analytik: Ermöglicht robuste Messung von Immunzellpopulationen und vergleichende Analysen unter verschiedenen Bedingungen.
- Translationale Forschung: Verbindet Entdeckungen mit präklinischen Krankheitsmodellen und Biomarker-Studien.
- Unternehmensweite Wiederverwendung: Etabliert einen standardisierten Protokollablauf, der in verschiedenen Programmen der Hämatologie und Immunologie angepasst werden kann.
Operative und unternehmerische Auswirkungen
- Wissenschaftlicher Wert: Erhöht die Vorhersagesicherheit und verringert mechanistische Mehrdeutigkeiten in Studien zu Immunzellen.
- Operationaler Wert: Fördert Standardisierung, Reproduzierbarkeit und Skalierbarkeit bei der Probenvorbereitung.
- Strategischer Wert: Verbessert die Qualität von Go/No-Go-Entscheidungen und die Kapitalnutzungseffizienz in frühen Portfoliophasen.
- Portfolio-Wirkung: Unterstützt die risikoadjustierte Priorisierung von Assets in Hämatologie und Immunologie.
Durchführungsaspekte
- Erfordert Fachkenntnisse in der Mausdissektion und steriler Technik.
- Benötigt Zugang zu Mikrozentrifugen und der Infrastruktur für Massenzytometrie.
- Setzt eine standardisierte Vorgehensweise über mehrere Arbeitsgruppen hinweg für reproduzierbare Probenqualität voraus.
- Kann an andere Mausstämme oder Altersgruppen angepasst werden, sofern die Protokollparameter angepasst werden.
- Die Zellviabilität und -ausbeute hängen von einer präzisen Handhabung und der Verwendung kalten PBS ab.
Biopharma-Häufig gestellte Fragen
Warum ist die Nullhypothesenprüfung entscheidend zur Validierung von Knochenmarkdefekten?
Die Nullhypothesentestung ermöglicht eine objektive Bewertung, ob beobachtete Unterschiede in den Zellpopulationen des Knochenmarks statistisch signifikant sind, und unterstützt so eine stringente Zielvalidierung in der Hämatologieforschung.
Wie passt die Isolierung der unabhängigen Variablen bei der Knochengewinnung aus Mäusen in die Entdeckungspipeline?
Die Isolierung von Variablen wie Mausstamm, Alter und Knochenursprung stellt sicher, dass nachgeschaltete Analysen echte biologische Effekte widerspiegeln und mechanistische Erkenntnisse in frühen Entdeckungsabläufen stärken.
Wozu ermöglichen quantitative Messungen abhängiger Variablen aus der Massenzytometrie?
Quantitative Auswertungen der Massenzytometrie ermöglichen eine präzise Charakterisierung von Immun- und hämatopoetischen Zellpopulationen, wodurch belastbare Vergleiche zwischen experimentellen Bedingungen möglich werden und datengestützte Entscheidungen unterstützt werden.
Warum sind Anforderungen an die Replikation bei der Knochenmarkentnahme für interdisziplinäre Teams wichtig?
Die Replikation stellt sicher, dass Zellausbeuten und Populationsprofile konsistent sind, was den zuverlässigen Datenaustausch und die Zusammenarbeit zwischen Entdeckungs-, Screening- und translationsorientierten Forschungsteams erleichtert.
Welche statistischen Analysefähigkeiten sind erforderlich, bevor Massenzytometrie-Daten ausgewertet werden können?
Teams benötigen statistische Werkzeuge, um Verteilungen von Zellpopulationen zu analysieren, die Signifikanz zu bewerten und die Reproduzierbarkeit zu überprüfen, um sicherzustellen, dass Massenzytometriedaten fundierte F&E-Entscheidungen ermöglichen.
06:17
Osteoklasten Ableitung aus Knochenmark der Maus
Ähnliche Videos
0 Aufrufe
08:01
Fluoreszenz-aktivierte Zellsortierung zur Reinigung von Plasmazytoide dendritischer Zellen aus dem Knochenmark der Maus
Ähnliche Videos
0 Aufrufe
07:21
Identifizierung und Isolierung von Oligopotent und Lineage-committed myeloischen Vorläuferzellen aus Maus Knochenmark
Ähnliche Videos
0 Aufrufe
10:29
Induktion der Graft-versus-Host-Krankheit und In Vivo T-Zell-Überwachung mit einem MHC-matched Mausmodell
Ähnliche Videos
0 Aufrufe
04:00
Isolierung und Kultivierung von Knochenmark-Stromazellen aus einem Schienbein der Maus
Ähnliche Videos
0 Aufrufe
05:54
Induktion der Graft-versus-Host-Krankheit in Mausmodellen durch allogene Knochenmark- und Milzzelltransplantation
Ähnliche Videos
0 Aufrufe
07:10
Oberschenkelknochenmark-Aspiration im Live-Mäuse
Ähnliche Videos
0 Aufrufe
11:25
Busulfan als myelosuppressiven Agenten zur Erwirtschaftung stabiler Hochrangige Knochenmark Chimärismus bei Mäusen
Ähnliche Videos
0 Aufrufe
07:17
Murine Hind Gliedmaßen langen Knochen Dissection und Knochenmark-Isolation
Ähnliche Videos
0 Aufrufe
09:05
Erzeugung einer großen Zahl von myeloischen Vorläuferzellen und dendritischen Zellen Vorstufen aus murinen Knochenmark mit einer neuartigen Zelle Sortieren Strategie
Ähnliche Videos
0 Aufrufe
Zuletzt aktualisiert: 15 August 2026