Magnetisch aktivierte Zellsortierung: Eine Methode zur Isolierung von C-Kit-positiven Zellen

- c-Kit oder CD117 ist ein Tyrosinkinase-Transmembranrezeptor, der von hämatopoetischen Stamm- oder Vorläuferzellen exprimiert wird, die im Knochenmark und im Blut vorhanden sind. Es ist auch ein Marker zum Nachweis der akuten myeloischen Leukämie.

Um c-Kit-positive Zellen zu isolieren, werden murine Beinknochen entnommen und zerkleinert, um das Knochenmark von innen freizusetzen. Filtern Sie die Knochenmarksuspension, um Knochenfragmente zu entfernen. Das Filtrat, das Knochenmarkzellen enthält, wird auf ein Dichtegradientenmedium aufgetragen und zentrifugiert, um mononukleäre Zellen von anderen Fraktionen zu trennen.

Sammeln Sie die trübe Schicht der mononukleären Zellen in einem Röhrchen mit Mikrokügelchen, die an Anti-CD117-Mausantikörper konjugiert sind. Inkubieren Sie, damit die Antikörper-Bead-Komplexe an die CD117-Rezeptoren auf c-Kit-positiven Zellen binden können. Führen Sie die inkubierte Suspension durch eine magnetische Säule, die in einem Magnetfeld platziert ist. Alle c-Kit-positiven Zellen, die mit den magnetischen Mikrokügelchen markiert sind, verbleiben in der Säule, während die unmarkierten Zellen hindurchgehen.

Nehmen Sie die Säule aus dem Magnetfeld und spülen S