Negative immunomagnetische Selektion: Eine Methode zur Aufreinigung von B-Zellen aus mononukleären Zellen des peripheren Blutes

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Zu den mononukleären Zellen des peripheren Blutes oder PBMCs gehören B-Zellen, T-Zellen, natürliche Killer- oder NK-Zellen und Monozyten. B-Zellen produzieren Immunglobulinmoleküle, um Infektionen zu bekämpfen. Bei Leukämie vermehren sich diese Zellen und metastasieren in verschiedene Organe.

Um B-Zellen zu isolieren, beginnen Sie mit einer Suspension isolierter PBMCs. Fügen Sie eine primäre Antikörpermischung hinzu, die gegen bestimmte Zelloberflächenmoleküle gerichtet ist, die als Differenzierungscluster oder CD bezeichnet werden. Spezifische Antikörper binden an das CD-3-Molekül auf T-Zellen, das CD-14-Molekül auf Monozyten und das CD-16-Molekül auf NK-Zellen, wobei die B-Zellen unmarkiert bleiben.

Waschen Sie anschließend die Probe, um die ungebundenen Antikörper zu entfernen. Geben Sie der Probe sekundäre Antikörper-konjugierte magnetische Mikrokügelchen zu. Sekundäre Antikörper binden an die FC-Region von Primärantikörpern, die an bestimmte Zellen gebunden sind. Das Röhrchen mit der markierten Zellsuspension unter den Einfluss eines Magnetfeldes setzen. Im Feld wandern die magnetisch markierten Zellen und binden an die Röhrenwand, was zu einer negativen Selektion der unerwünschten Zellen führt. Der Überstand mit den angereicherten B-Zellen wird in ein frisches Entnahmeröhrchen gegeben.

In diesem Protokoll führen wir eine negative immunomagnetische Selektion von leukämischen B-Zellen aus PBMCs von Patienten mit chronischer lymphatischer Leukämie durch.

Der Überstand wird verworfen und 10 Millionen PBMC in einem Milliliter Isolationspuffer resuspendiert, d. h. PBS mit 0,1 % BSA und 2 Millimolar EDTA, wobei der pH-Wert auf 7,4 eingestellt wird. CLL-Lymphozyten müssen nun von den PBMC-Präparaten gereinigt werden. Fügen Sie dann 10 Mikrogramm monoklonale Maus-Anti-CD-3-, CD-14- und CD-16-Primärantikörper hinzu und inkubieren Sie 30 Minuten lang bei 4 Grad Celsius.

Nachdem Sie die Zellen mit dem Isolationspuffer gewaschen und 5 Minuten lang bei 4 Grad Celsius bei 500 g zentrifugiert haben, resuspendieren Sie die 10 Millionen PBMCs in 1 Milliliter Isolationspuffer. Inkubieren Sie die resuspendierten Zellen mit 100 Mikrolitern gewaschener magnetischer Kügelchen 30 Minuten lang bei 4 Grad Celsius und sanft resuspendieren. Legen Sie dann das Röhrchen für zwei Minuten in den Magnethalter und geben Sie den Überstand mit den ungebundenen Zellen mit einer 5-Milliliter-Pipette in ein frisches Röhrchen. Nach diesem Schritt können gereinigte CLL-Lymphozyten verwendet werden.

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Last updated: 25 July 2026