Organoid-Elektroporation: Eine Methode zur Transfektion von Plasmid-DNA in gastrointestinale Organoide

- Organoide sind winzige, dreidimensionale Zellkulturen, die aus gewebespezifischen Stammzellen gewonnen werden. Sie sind genomisch stabil, aber durch Transfektion genetisch veränderbar und damit ideal für genetische Untersuchungen. Für die Transfektion werden die Organoide in eine Multiwell-Kulturplatte mit einem spezifischen Nährmedium gesät und für die gewünschte Dauer inkubiert. Geben Sie als Nächstes eine Dissoziationsmischung auf die Platte, um die Dissoziation der Organoidzellen zu unterstützen. Die Mischung in ein Röhrchen geben und zentrifugieren. Resuspendieren Sie das Organoid-Pellet in einem Elektroporationspuffer, der fluoreszenzmarkierte Plasmid-DNA enthält. Der Puffer stabilisiert die Zellen und verhindert den Zelltod durch elektrischen Stress.

Füllen Sie die Mischung in eine Küvette und elektropolieren Sie die Zellen. Elektrische Impulse durch die Zellmembran führen zu einer vorübergehenden Porenbildung, um die Aufnahme von Plasmid-DNA in die Zelle zu erleichtern. Nach der Elektroporation sofort Kulturmedium in die Zellsuspension geben und das Gemisch in ein Röhrchen überführen. Zentrifugieren Sie nun die Zellen. Resuspendieren Sie das Pellet in der Kellermatrix und