Bildgebung der Kalziumdynamik in Pankreaszellen: Eine Technik zur Untersuchung von Echtzeitänderungen der zytosolischen Kalziumkonzentration auf der Pankreasinsel

- Pankreasinseln sind eine Ansammlung von hormonproduzierenden Pankreaszellen, die eine entscheidende Rolle bei der Aufrechterhaltung der Glukosehomöostase spielen. Eine erhöhte Glukosekonzentration löst den Verschluss von Kaliumionenkanälen aus und verhindert so den Ausfluss von Kaliumionen, was zu einer Membrandepolarisation führt. In der Folge öffnen sich spannungsabhängige Calciumionenkanäle, die den Einstrom von Calciumionen ermöglichen. Diese erhöhte zytosolische Kalziumkonzentration regt die Ausschüttung von Hormonen wie Insulin an. Um die zytosolische Kalziumdynamik abzubilden, übertragen Sie in Echtzeit einige Inseln, die mit geeignetem Kalziumindikatorfarbstoff beladen sind, zwischen die Abstandswände eines vormontierten feinen Netzes.

Positionieren Sie das Netz kopfüber auf einem Deckglas, das in der Bildgebungskammer eines inversen Mikroskops eingesetzt ist. Platzieren Sie ein grobes Netz und ein Gewicht, um die Zellen zu immobilisieren. Geben Sie die Bildgebungslösung in die Kammer. Richten Sie als Nächstes ein Perfusionssystem ein, um Glukose oder ein Testhormon von Interesse einzuführen. In den Zellen zeigen vorgeladene fluoreszierende Calciumindikatoren einen Anstie