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Krebsforschung
0 Aufrufe • 3:21 Min. • April 30th, 2023
- Der exokrine Teil der Bauchspeicheldrüse besteht aus Azinuszellen und duktalen Zellen. Azinuszellen synthetisieren und sezernieren Verdauungsenzyme in ihr Lumen. Die duktalen Zellen kleiden die Röhre aus, die diese Enzyme an den Dünndarm liefert. Um sich an genetischen und umweltbedingten Stress anzupassen, werden Azinuszellen morphologisch und funktionell in gangartige Zellen umgewandelt, die als Azinus-zu-Duktal-Metaplasie (ADM) bezeichnet werden.
Manchmal kann ADM zum Ausbruch von Bauchspeicheldrüsenkrebs führen. Um ADM ex vivo zu induzieren, stellen Sie eine gekühlte Kollagenzellsuspension her, indem Sie primäre Azinuszellen mit Kollagengel kombinieren, das auf Eis aufbewahrt wird, um eine Verfestigung der Matrix zu verhindern. Behandeln Sie die Suspension mit einem ADM-Teststimulans oder -inhibitor von Interesse.
Verteilen Sie die Suspension in eine Kulturplatte und inkubieren Sie, um die Kollagenverfestigung zu erleichtern und die Zellen darin einzubetten. Als nächstes pipettieren Sie ein zusätzliches Volumen des Mediums, das das gewünschte Test-ADM-Stimulans oder den Inhibitor enthält, über die verfestigte Kollagenzellschicht.
Inkubieren Sie die Platte für eine angemessene Dauer. Bei der Induktion der Azinus-zu-duktalen Metaplasie transdifferenzieren pyramidenförmige primäre Azinuszellen zu Zellen mit gangzellähnlicher Morphologie. Im folgenden Protokoll werden wir die ex vivo Induktion von Azinus-zu-duktaler Metaplasie in primären murinen Azinuszellen unter Verwendung von TGF alpha als Stimulans demonstrieren.
- Um ein Kollagengel herzustellen, kombinieren Sie 7 Milliliter Typ-1-Rattenschwanzkollagen, 700 Mikroliter das 10-fache des Waymouth-Mediums und 466,6 Mikroliter 0,34 molare Natriumhydroxid in einem 50-Milliliter-Röhrchen auf Eis, um Kollagengel herzustellen. In einem 50-Milliliter-Röhrchen nach dreistündiger Inkubation gleiche Volumina Zellsuspension und Kollagengel mischen und vorsichtig mischen. 2.000 Mikroliter nacheinander in eine Sechs-Well-Platte geben, während die Platte auf Eis bleibt, und schwenken, um die Kollagenzellschicht gleichmäßig zu verteilen.
Um das Medium zu verfestigen, inkubieren Sie die Platte in einem Zellkultur-Inkubator bei 37 Grad Celsius und 5 % Kohlendioxid für 30 Minuten. Fügen Sie dann 1,5 Milliliter pro Vertiefung des 1-fachen des vollständigen Mediums von Waymouth mit dem gewünschten Stimulus oder den gewünschten Inhibitoren hinzu.
Wechseln Sie das Medium am nächsten Tag und dann jeden zweiten Tag. Abhängig vom verwendeten Stimulus kann zwischen dem dritten und dem fünften Tag eine Azinus-zu-duktale Metaplasie (ADM) beobachtet werden.