Isolierung von Pankreasinseln durch Kollagenase-Perfusion: Eine enzymatische Methode zur Isolierung von Pankreas-Inselzellen

- Inselzellen in der Bauchspeicheldrüse produzieren essentielle Hormone, die an den endokrinen Funktionen beteiligt sind. Um Inselzellen zu isolieren, wird zunächst eine euthanasierte Maus gesichert und ihre Bauchhöhle chirurgisch freigelegt. Bürsten Sie die Leber und den Darm beiseite, um den gemeinsamen Gallengang zu lokalisieren und abzuklemmen. Identifizieren Sie die Ampulle von Vater, den Gang, der durch die Vereinigung von Bauchspeicheldrüse und Gallengang gebildet wird.

Als nächstes injizieren Sie eine Kollagenase-Enzymlösung in den gemeinsamen Gallengang. Der Rückfluss aus dem Gang bläht die Bauchspeicheldrüse erfolgreich auf und erleichtert die Kollagenase-induzierte Dissoziation des Pankreasgewebes. Exzidieren Sie die Bauchspeicheldrüse in ein Röhrchen, das mehr Kollagenaselösung enthält. Zerkleinern Sie das Gewebe mechanisch und inkubieren Sie, um die Gewebeverdauung durch die Kollagenase zu unterstützen.

Sobald Sie eine homogene Suspension erhalten haben, stoppen Sie den enzymatischen Verdau, indem Sie eine Lösung hinzufügen, die Proteine enthält, die die Kollagenaseaktivität hemmen. Zentrifuge, um ein Gewebepellet zu sammeln. Resuspendieren Sie das Pellet in einem geei