JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Krebsforschung
0 Aufrufe • 4:29 Min. • April 30th, 2023
- Sphäroide sind dreidimensionale in vitro Zellkulturmodelle. Für die Immunfluoreszenzfärbung wird zunächst eine Sphäroidkultur des gewünschten Zelltyps in einer Multiwell-Platte erzeugt. Sammeln Sie die Sphäroide mit einer Mikropipette mit breiter Blende und achten Sie darauf, dass sie nicht durch Scherkräfte reißen.
Als nächstes fixieren und permeabilisieren Sie die Sphäroide, um einzelne Zellen durchlässig zu machen. Inkubieren Sie nun mit einer Lösung, die Proteine enthält, um unspezifische Proteininteraktionsstellen auf der Zelloberfläche zu blockieren. Behandeln Sie die Sphäroide mit einem gewünschten Primärantikörper-Cocktail. Inkubieren, damit die Antikörper an die Zielmoleküle auf der Zelloberfläche binden können.
Als nächstes markieren Sie die Sphäroide mit einer fluoreszenzmarkierten Sekundärantikörperlösung, die spezifisch für die Primärantikörper ist. Behandeln Sie schließlich die Sphäroide mit einem geeigneten fluoreszierenden DNA-bindenden Farbstoff, um Zellkerne zu färben. Mit einem Laser-Scanning-Fluoreszenzmikroskop können Sie mehrere optische Querschnitte des Sphäroids in verschiedenen optischen Ebenen abbilden.
Die aufgenommenen Bilder reflektieren fluoreszenzma
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