PTM-basiertes Tumor-Mikroumgebungs-Monitoring: Eine Methode zur Verfolgung von Veränderungen der EZM-Steifigkeit mit Hilfe von Tumor-Sphäroiden

- Bei der Tumorinvasion durchlaufen die peripheren Tumorzellen eine epitheliale zu mesenchymale Transition (EMT), was zu einem lokalen Abbau der extrazellulären Matrix oder EZM führt. Wir können die Interaktion von Tumorzellen mit der EZM in vitro untersuchen.

Um diese Wechselwirkungen zu untersuchen, wird ein vorgeformtes Sphäroid aus Pankreastumorzellen auf eine Platte übertragen, die ein Kollagengerüst zusammen mit eingebetteten fluoreszierenden Tracersonden und Kulturmedien enthält. Tumorsphäroide setzen Proteasen frei, die Kollagen abbauen und die EZM-Steifigkeit verringern, was zu einer freien Bewegung der Tracersonden in der EZM führt.

Inkubieren Sie die Platte für die gewünschte Zeitdauer. Beobachten Sie die Probe unter einem Lichtmikroskop, um das Raster der Probenpunkte im Kollagengerüst zu betrachten und Videodaten von ihnen aufzunehmen. Der Bereich der Matrix in der Nähe des Sphäroids zeigt den maximalen Kollagenabbau. Daher hat es die Sondenbewegung erhöht. Im Gegensatz dazu zeigt der Bereich, der weiter vom Sphäroid entfernt ist, einen geringeren Kollagenabbau, was zu einer eingeschränkten Bewegung der Sondenmoleküle führt.

Diese Technik zur Untersuchung der rheologis