Generierung eines PDOX-Mausmodells für Darmkrebs: Untersuchung der Progression von Darmkrebs in einem Mausmodell

- Lymphknoten oder LNs bieten aufgrund der in LNs vorhandenen Stromazellen eine Mikroumgebung für das Tumorwachstum. Follikuläre dendritische Zellen (FDCs) sind die am häufigsten vorkommenden Arten von Stromazellen, die Chemokine, Zytokine und Wachstumsfaktoren freisetzen, die mit Darmkrebsstammzellen interagieren und das Tumorwachstum erhöhen.

FDCs fördern auch die extranodale Metastasierung von Darmkrebs in Organen wie Lunge und Leber. Um das Fortschreiten des Darmkrebses zu untersuchen, implantieren wir tumorabgeleitete Krebszellen von Patienten in das Organ, das dem Tumorhistotyp in einem immungeschwächten Mausmodell entspricht, das als patientenabgeleitetes orthotopes Xenotransplantat oder PDOX bekannt ist.

Beginnen Sie damit, eine betäubte Maus in Rückenlage auf einem Sezierbrett mit Laborklebeband zu befestigen. Mischen Sie nun eine erforderliche Menge an Luciferase-markierten Darmkrebszellen und FDCs in einem Röhrchen. Nehmen Sie die resultierende Suspension in einer Spritze. Lokalisieren Sie als nächstes die Analöffnung der Maus und injizieren Sie die vorbereitete Darmkrebsmischung in die submuköse Schicht des Rektums.

Um die metastasierende Belastung zu beobachten, injizieren Sie Luciferin jede Woche intraperitoneal und bilden Sie die Maus mit Hilfe von Biolumineszenz-Bildgebung ab. In Gegenwart von Luciferase-Enzym und ATP wandelt sich Luciferin in Krebszellen in Oxyluciferin um und emittiert blau-grünes Licht. Im folgenden Protokoll werden wir ein orthotopes Xenotransplantat-Mausmodell zur Untersuchung des Fortschreitens des Darmkrebses generieren.

- Um ein CRC-Mausmodell zu erstellen, legen Sie eine narkotisierte, sechs bis acht Wochen alte männliche NOD-SCID-Maus in Rückenlage unter ein Präpariermikroskop und befestigen Sie die Schnauze an einem Isofluran-Nasenkegel und die vorderen Gliedmaßen mit Klebeband, um die Stabilität zu gewährleisten. Platzieren Sie einen kleinen Gegenstand, z. B. einen kleinen Mullabschnitt, unter der Basis des Schwanzes und heben Sie den Anus an, um die Sichtbarkeit und den Winkel zu verbessern. Verwenden Sie eine gebogene, geschmierte Pinzette mit stumpfer Spitze, um den Analkanal zu erweitern, die distale Anal- und Rektumschleimhaut freizulegen und den Kot zu entfernen.

Verbinden Sie eine sterile abnehmbare 30-Gauge-Nadel mit einer 50-Mikroliter-Glasspritze. Ziehen Sie 10 Mikroliter der in den vorherigen Schritten hergestellten Tumor- und HK-Zellsuspension in die Spritze. Injizieren Sie die 10 Mikroliter in die distale hintere rektale Submukosa, 1 bis 2 Millimeter über dem Analkanal, und achten Sie darauf, dass sie nicht in die Beckenhöhle gelangen. Entfernen Sie schließlich die Maus aus dem Isofluran-Nasenkegel und beobachten Sie sie eine Stunde lang nach dem Verfahren auf Anzeichen von Beschwerden.