Mausmodelle für spontane Metastasen: Eine Plattform zur Untersuchung des Metastasierungspotenzials von orthotopisch injizierten kolorektalen Krebszellen

- Beginnen Sie mit einer Kultur aus grün fluoreszierendem Protein (GFP), das Darmkrebs-Organoide exprimiert. Ernte die Organoide. Mit einer Zellablösung-Enzymlösung behandeln, um die Organoide in eine einzellige Suspension zu dissoziieren. Zentrifugieren Sie, um den enzymhaltigen Überstand abzutrennen. Entfernen Sie den Überstand. Resuspendieren Sie die GFP-exprimierenden Darmkrebszellen mit einem künstlichen extrazellulären Matrix-haltigen Medium. Laden Sie die Zellsuspension in eine Spritze und halten Sie sie auf Eis, um eine Verfestigung der Matrix bei Umgebungstemperaturen zu verhindern.

Bereiten Sie als Nächstes eine betäubte Maus in Rückenlage vor. Ziehen Sie die Schleimhautschicht des Enddarms vorsichtig durch die Analöffnung heraus. Injizieren Sie nun die vorbereitete GFP-exprimierende Krebszellsuspension in die rektale submuköse Schicht, die das Netzwerk der Blutgefäße enthält. Lassen Sie die Maus wiederherstellen.

Innerhalb weniger Tage entwickelt sich an der Injektionsstelle ein GFP-exprimierender Primärtumor. Bei der spontanen Metastasierung lösen sich diese Tumorzellen ab und gelangen in den Blutkreislauf. Schließlich extravasieren die Zellen in entfernte Organe und vermehren sich, um GFP-positive metastasierende Tumoren zu bilden. Im folgenden Protokoll zeigen wir die Generierung eines spontanen Metastasen-Mausmodells für kolorektales Karzinom durch orthotopische Injektion von GFP-exprimierenden kolorektalen Organoidzellen.

- Etablierung eines Mausmodells für spontane Metastasen von Darmkrebspatienten-Xenotransplantaten, Dissoziation der GFP-markierten Organoide wie gezeigt und Verdünnung der einzelnen Tumorzellsuspensionen im Verhältnis 5 mal 10 zu den fünf Tumorzellen pro 50 Mikroliter PBS, ergänzt mit 50% künstlicher extrazellulärer Matrixkonzentration. Laden Sie 50 Mikroliter Zellen pro Maus in eine Spritze, die mit einer 22-Gauge-Nadel ausgestattet ist, und legen Sie die Tumorzellen auf Eis.

Bestätigen Sie als Nächstes, dass es keine Reaktion auf das Einklemmen der Zehen gibt, und legen Sie die erste anästhesierte NOG-Maus in Rückenlage auf den Labortisch. Ziehen Sie mit einer sterilen Pinzette die Rektumschleimhaut vorsichtig aus dem After heraus und injizieren Sie die Tumorzellen sofort in die rektale Submukosa.