Lasermikrodissektion: Eine Technik zur Isolierung eindringender Darmkrebszellen aus einem organotypischen 3D-Kulturmodell

- Organotypische 3D-Modelle von Darmkrebs sind In-vitro-Kulturen, die so entwickelt wurden, dass sie In-vivo-Tumormikroumgebungen nachahmen. Die Kultur enthält häufig Stromazellen, wie Fibroblasten, die mit Darmkrebs-Epithelzellen in einer geeigneten extrazellulären Matrix-Mikroumgebung kokultiviert wurden.

In etablierten Kulturen dringen Tumorzellen mit metastasierendem Potenzial in die extrazelluläre Matrix ein. Um diese eindringenden Zellen zu isolieren, behandeln Sie zunächst das organotypische Modell mit Formaldehyd, um Zellen und extrazelluläre Matrix zu fixieren. Inkubieren Sie mit Alkohol, um die Probe zu dehydrieren.

Als nächstes in flüssiges Paraffinwachs einbetten, um einen Gewebeblock zu erzeugen. Verwenden Sie ein Ultramikrotom, um dünn geschnittene Abschnitte zu erhalten. Montieren Sie die Abschnitte auf einen entsprechenden Glasschieber.

Fügen Sie Xylol hinzu, um die Abschnitte zu entparaffinisieren. Inkubieren Sie die Abschnitte nacheinander in abnehmenden Ethanolkonzentrationen, um die Proben zu rehydrieren.

Behandeln Sie mit Cresylviolett, um Darmkrebszellen zu färben und von der Mikroumgebung zu unterscheiden. Legen Sie den Objektträger mit der Vorderseite nach u