Rekombinante Virionenpräparation des Merkelzell-Polyomavirus (MCPyV): Eine Technik zur Herstellung von rekombinantem MCPyV-Virion mit hohem Titer

- Das Merkelzell-Polyomavirus oder MCPyV ist ein doppelsträngiges DNA-Onkovirus mit einem zirkulären Genom, das das Merkelzellkarzinom, eine Art von Hautkrebs, verursacht. Um MCPyV-Virionen herzustellen, wird zunächst eine adhärente Kultur von Verpackungszellen mit einem Cocktail behandelt, der ein Transfektionsmittel, das virale Genom und zwei Expressionsplasmide enthält, die für Proteine kodieren, die für die Förderung der viralen Replikation erforderlich sind.

Während der Inkubation bildet das Transfektionsreagenz mit den Plasmiden Lypoplexe, die deren Abgabe in die Verpackungszellen erleichtern. Im Zellkern angekommen, ermöglicht die Zellmaschinerie die Expression der Virus- und Plasmidgenome. Die Expressionsplasmide kodieren für Proteine des Großtumorantigens und des Kleintumorantigens. Diese Proteine wandern in den Zellkern und treiben die virale DNA-Replikation voran. Anschließend kodiert das virale Genom für strukturelle Kapsidproteine. Diese Proteine wandern in den Zellkern und helfen beim Zusammenbau rekombinanter Virionen.

Ernten Sie als Nächstes die kultivierten Zellen. Behandeln Sie sie mit einer Lösung, die Reinigungsmittel und DNase enthält. Das Detergens lysiert die