miniCoopR-Vektor-basierte Transgenese: Eine Technik zum Screening von Melanom-induzierenden Genen im Zebrafisch-Tumormodell

- Beim Zebrafisch entsteht das Melanom durch die bösartige Umwandlung von Melanozyten - den Melanin-produzierenden Zellen. Um das Auftreten von Melanomen zu untersuchen, verwenden Sie ein melanomanfälliges, melanozytenarmes transgenes Zebrafischmodell. Diesem Modell fehlen Melanozyten aufgrund einer Funktionsverlust-Mutation in seinem Melanozyten-spezifischen Mitfa-Promotor.

Beginnen Sie damit, einen einzelligen Embryo dieses transgenen Modells auf einer Agarplatte zu entnehmen. Injizieren Sie eine Mischung, die einen Transposon-basierten miniCoopR-Vektor und Transposase-Enzym-mRNAs enthält, in den Embryo. Der Vektor enthält eine Genkassette, die ein Promotor-tragendes Mitfa-Minigen umfasst, das an ein Kandidatengen gekoppelt ist, das zwischen zwei Transposon-Elementen eingebettet ist.

Die co-injizierten mRNAs kodieren für Transposase-Proteine. Diese Proteine wirken auf die Transposon-Elemente und katalysieren die Kassettenexzision aus dem miniCoopR-Vektor, gefolgt von dessen Integration in die genomische DNA des Embryos. Anschließend steuert der Kassettenpromotor die Expression sowohl des Mitfa-Gens als auch des Kandidatengens von Interesse.

Das Mitfa-Gen unterstützt die Rettung u