Pseudofracture: eine akute periphere Gewebe Trauma-Modell

Wenn ein langer Knochen, wie z. B. ein Oberschenkelknochen oder ein Schienbein, gebrochen wird, sind der verletzte Muskel und das verletzte Weichgewebe geschädigten Knochenfragmenten und Knochenmark ausgesetzt. Darauf folgt eine starke Immunantwort, die die Gewebereparatur unterstützt. Ein Modell zur Untersuchung der Auswirkungen dieser Exposition kann durch die Entnahme sowohl von Femuren als auch von Tibia erstellt werden.

Von einer Spendermaus. Die Knochen werden zerkleinert, um eine Knochenlösung herzustellen, die dann in den verletzten Oberschenkel einer Empfängermaus injiziert wird. Anschließend werden die Immunantworten überwacht und entfernte Organverletzungen bewertet, um die Langzeitwirkungen von frakturinduzierten Traumata zu untersuchen.

Der Hauptvorteil dieser Technik gegenüber bestehenden Methoden des peripheren Gewebetraumas, wie dem bilateralen Femurfrakturmodell, besteht darin, dass dieses Modell, das Pseudofrakturmodell, ein langfristiges Überleben ohne Komplikationen einer verlängerten Anästhesie oder komplizierter Frakturfixationstechniken ermöglicht und somit die Untersuchung von Immunreaktionen in der späten Zeit nach einem Trauma ermöglicht. Bevor Sie mit dem Eingriff beginnen, bereiten Sie die folgenden Vorräte vor: einen Eiskübel, chirurgische Betadin-Instrumente, GREs-Hämostaten, einen Mörser und eine Stößelzange, 20-Gauge-Nadeln, eine Ein-CC-Spritze, eine PBS-Anästhesie und einen Fluor-Nasenkonus. Eine einzige euthanasierte Alters- und Gewichtsübereinstimmung.

Die gegene Spendermaus sollte genug Material für drei Empfänger liefern. Klebe den Spender auf eine Plexiglasplatte und achte darauf, dass du die unteren Extremitäten nur an der Fußspitze abklebst. Rasieren Sie vorsichtig die unteren Extremitäten.

Bedecken Sie sie dann vollständig mit Betadin und Alkohol für die Sterilität, um die langen Knochen von der unteren Extremität zu entfernen, machen Sie einen chirurgischen Schnitt in die Haut im Leistenbereich und schneiden Sie die Haut weiter entlang der Länge der Extremität bis zum Knöchel, ziehen Sie die Haut zurück und präparieren Sie sie von der subkutanen Gesichtshaut und dem Muskel weg. sowohl auf medialer als auch auf lateraler Seite. Führen Sie dann eine Klinge der Schere unter die Muskeln ein, die vorne und seitlich der Tibia liegen. Schieben Sie die Klinge proximal und distal, um die Muskeln sauber vom darunter liegenden Knochen wegzuheben.

Wiederholen Sie diese Technik an der hinteren und medialen Unterseite der Tibia, um die Muskeln unter der Tibia zu trennen. Beim disalen Gleiten sollte auf der hinteren Seite nur minimale zusätzliche Anstrengungen unternommen werden, um das Wadenbein am proximalen Ende dieser Beinmuskulatur von der Tibia wegzuschnappen. Schneiden Sie die Sehnen so nah wie möglich an ihren Ansatzpunkten ab und ziehen Sie die Muskeln distal zurück, während Sie an der Muskelgruppe zusammenziehen. Nach unten hin löst ein kleiner Ruck die distalen Ansätze aus dem Sprunggelenk mit einer Schere, die das Sprunggelenk durchtrennt

Löse das Schienbein an dieser Stelle nicht vom Oberschenkelknochen, da diese Verbindung eine zusätzliche Hebelwirkung bietet, die bei der Dissektion des Oberschenkelknochens vom Hüftgelenk hilft. Verwenden Sie eine ähnliche Technik, um die Muskeln vom Oberschenkelknochen zu lösen. Führen Sie dies bei Bedarf posterior und sowohl medial als auch lateral durch.

Schneiden Sie den distalen Ansatz dieser Muskelgruppen ab, um sie vom Kniegelenk zu lösen. Verlängern Sie den Hautschnitt nach Bedarf, um eine ausreichende Exposition zu erreichen, und folgen Sie ihm unter den Muskeln. Um das Ende des Oberschenkelknochens aus dem Hüftgelenk zu präparieren, entfernen Sie den Oberschenkelknochen und befestigen Sie das Schienbein an der Spendermaus und legen Sie sie auf sterile Gaze.

Trennen Sie die beiden Knochen am Kniegelenk, indem Sie einfach jeden Knochen mit einer separaten Hand greifen und die beiden Knochen entlang ihrer langen AEs vorsichtig in entgegengesetzte Richtungen drehen oder drehen. Um die verbleibenden Sehnenansätze von den langen Knochen zu entfernen, wickeln Sie ein vier mal vier Stück Gaze um die Länge des Knochens. Fassen Sie die Knochen fest an und kratzen Sie mehrmals über die gesamte Länge, um das restliche Gewebe von der Oberfläche zu entfernen.

Legen Sie die gesammelten Knochen in ein steriles 1,5-Milliliter-Mikro-Gefäß auf Eis. Transportieren Sie die Spenderknochen in eine gründlich desinfizierte biologische Sicherheitswerkbank. Zur Herstellung der Knochenlösung.

Die Haube sollte mit einem sterilen Feldverband, einem sterilen Mörser und Stößel, einer sterilen Pinzette, einem sterilen Acht-Milliliter-Röhrchen, einer sterilen PBSA-Pipette mit einem Milliliter und entsprechenden Pipettenspitzen vorbereitet werden. Ein 100-Mikroliter-Pipettenmann mit entsprechenden Spitzen, einer Ein-Milliliter-Spritze und 20-Gauge-Nadeln überträgt die Knochen mit der Pinzette in den Mörser und zerkleinert die Knochen mit dem Stößel sanft. Pipettieren Sie einen Milliliter PBS in den Mörser und zerkleinern Sie die verbleibenden Fragmente mit kreisenden Bewegungen, um eine vollständige Wiederbelebungssuspension zu gewährleisten.

Fügen Sie dann einen weiteren Milliliter PBS hinzu und zerkleinern Sie weiter, um die Knochenlösung zu erhalten, die einen rosa Farbton haben sollte. Gießen Sie die Lösung langsam aus dem Mörtel in das Acht-Milliliter-Röhrchen und achten Sie darauf, dass größere Reste zurückbleiben. Übertragen Sie die Knochenlösung in eine Ein-Milliliter-Spritze.

Mit einer 20-Gauge-Nadel sollte die Knochenlösung auf Eis bleiben. Pipettieren Sie einen Mikroliter der Knochenlösung auf eine Mac Congar-Platte und verteilen Sie sie gleichmäßig auf der Oberfläche. Inkubieren Sie die Platte 24 bis 48 Stunden lang, um die Sterilität zu gewährleisten.

Beginnen Sie den chirurgischen Eingriff bei Weichteilverletzungen und Knochenlösungsinjektionen, indem Sie die Anästhesietiefe einer penta barbital anästhesierten Maus am Zeh beurteilen. Kneifen. Legen Sie die Maus in Rückenlage auf eine Plexiglasplatte und fixieren Sie das Tier, indem Sie mit Oscar a five Clipper mit einer Klinge der Größe 40 dünne Streifen Klebeband locker um den distalen Teil jeder Extremität wickeln. Rasieren Sie den Bauch, die Leistengegend und den Oberschenkel des Tieres.

Übertragen Sie die Maus in das sterile Operationsfeld. Wischen Sie den Operationsbereich mit Betadine ab. Wischen Sie es dann mit Alkohol ab, um es zu sterilisieren.

Setzen Sie einen Nasenkegel auf die Maus, der ein Stück Gaze mit einem Milliliter 99 % Fluor enthält. Sobald sich die Atmung des Tieres zu verlangsamen beginnt, entfernen Sie den Nasenkegel. Wenn während eines Teils des Eingriffs eine zusätzliche Anästhesie erforderlich ist, kann zusätzliches Pentobarbital injiziert oder Fluor verabreicht werden.

Falten Sie dann einen sterilen Feldverband und drapieren Sie ihn über die Maus, um nur die unteren Extremitäten und den Kopf freizulegen. Bei dieser Weichteilverletzung handelt es sich um eine beidseitige Quetschverletzung der hinteren Gliedmaßen. Stellen Sie sicher, dass die Maus mit leicht abduzierten und seitlich gedrehten Hintergliedmaßen positioniert ist.

Dies hilft bei der Zugänglichkeit des richtigen Muskels. Gruppieren Sie die Kniebeuger, um die Quetschverletzung durchzuführen: Klemmen Sie einen großen 18 Zentimeter großen Hämostaten um den Mittelpunkt der hinteren Oberschenkelmuskulatur entlang des Femurs, wobei die konvexe Krümmung zum Femur zeigt. Sperren Sie das Hämostat nur für 30 Sekunden auf den ersten Klick.

Führen Sie die Nadel zwei bis drei Millimeter durch die Haut ein, da die Spitze der Abschrägung gerade den Oberschenkelknochen berührt. Injizieren Sie je 0,15 Milliliter der Knochenlösung in die zerquetschte Oberschenkelmuskulatur auf jeder Seite. Ziehen Sie die Nadel zurück und legen Sie schnell einen sterilen, behandschuhten Finger über die Injektionsstelle, um einen Rückfluss von Knochenlösung aus der Wunde zu verhindern.

Halten Sie diesen Finger dort für einige Sekunden. Setzen Sie die Maus wieder in den Käfig ein und lassen Sie direkt nach Abklingen der Narkose volle Bewegungsfreiheit. Angemessen. Die Schmerzbehandlung muss durchgeführt werden, wenn die Maus erwacht.

Dieses allgemeine Schema zeigt die biphasische Immunantwort nach einem Trauma zum Zeitpunkt Null. Ein Trauma wird induziert. Darauf folgt eine frühe hyperinflammatorische Reaktion, die nach sechs Stunden ihren Höhepunkt erreicht und durch die Beurteilung der systemischen Entzündung und der Funktionsstörung entfernter Organe gemessen wird.

Die zweite Komponente der posttraumatischen Immunantwort ist eine verzögerte Immunsuppression, gemessen an einer Dysfunktion der Immunzellen, die als Tief nach etwa 48 Stunden dargestellt wird. Dies ist ein repräsentatives Diagramm der inflammatorischen Zytokinreaktion im Plasma, die früh nach einem Trauma auftritt und ein Beispiel für eine systemische Entzündung ist. Es wurde festgestellt, dass die Dysfunktion von Fernorganen, gemessen durch Leberschädigung, innerhalb eines ähnlichen Zeitrahmens erhöht ist.

Dieses repräsentative Diagramm ist ein Beispiel, um die Dysfunktion von Immunzellen spät nach einem Trauma hervorzuheben. Bei diesem Verfahren ist es wichtig, während des gesamten Experiments auf Sterilität und präzise Manipulation zu achten. Dies ist kein Modell für eine echte Fraktur oder eine Wundinfektion.