Name: Induktion der experimentellen autoimmunen Hypophysitis in SJL Mäuse (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-12-17T17:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 38 s
Description: Erfahren Sie die Induktion experimenteller autoimmuner Hypophysitis bei SJL-Mäusen durch Immunogen-Injektion und histopathologische Analyse. Dieses Protokoll ermöglicht die Untersuchung von Autoimmunmechanismen und Krankheitsschwere.

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Diese Arbeit wurde vom NIH DK080351 auf PC, und durch eine großzügige Schenkung des Terry und Kristine Gore Familie unterstützt.

Experimentelles Protokoll Sobald die Hypophyse Immunogen bereit ist (siehe begleitende Artikel), ist es subkutan in SJL Mäusen (The Jackson Laboratories, hat 000.686) injiziert. Eine zweite, identische Injektion ist 7 Tage später wiederholt. Mäuse werden dann verwendet, um in vivo und post-mortem Ergebnisse zu sammeln. Schritt 1. Die subkutane Injektion von Hypophysen-Immunogen in SJL Mäusen Mäuse werden zunächst betäubt durch die Injektion von 0,5 ml 20 mg / ml 2,2,2-Tribromethanol (Avertin, TCI America, T-1420) intraperitoneal. Mäuse werden dann subkutan mit 100 ul der Hypophyse Emulsion, die, wie in der Begleiter angegeben 2181 Artikel JoVE injiziert, enthält 1 mg Hypophysenextrakt und 0,25 mg von komplettem Freund-Adjuvans. Die Emulsion wird in der linken dorsalen Hinterbein Region ((50 ul) und der rechten Leistengegend (50 ul) injiziert. Die Hypophyse Emulsion wieder an Tag 7 in den gegenüberliegenden Seiten (50 ul in der rechten dorsalen Hinterbein Region und injiziert 50 pl in der linken Leistengegend). Mäuse sind täglich für die ersten 3 Tage überwacht und dann wöchentlich bis zum Tag der Opfer, die in der Regel 28 Tage nach der ersten Immunisierung. Schritt 2. Sammlung von in-vivo-Ergebnisse: Blood Assays Das Gewebe am häufigsten verwendet werden, um experimentelle Ergebnisse zu bewerten, während die Mäuse noch am Leben ist Blut. Blut wird routinemäßig 14 Tage nach der ersten Immunisierung, die Serumspiegel von Hypophyse Antikörpern oder anderen Markern wie Zytokine und Chemokine zu messen gezogen. Blut wird von lebenden Mäusen wie folgt gesammelt. Mäuse sind sicher durch die Genick gehalten und die Rückseite der Kieferknochen befindet. Sobald der Rückseite des Kieferknochens befindet, sind 4 mm Lanzetten zu durchbohren die submandibularis Leitbündel verwendet. Nach Blut gesammelt, mit Druck auf den auf dem Gelände einen Alkoholtupfer, um ein Hämatom zu vermeiden. Gesammelte Blut wird bei 2.000 g für 20 Minuten zentrifugiert und bei -80 ° C bis zur Verwendung. Schritt 3. Sammlung von Post-mortem-Ergebnisse: Pituitary Histopathologie Mäuse sind in der Regel 28 Tage nach der ersten Immunisierung geopfert. Der Kardinal-Funktion notwendig, um die Diagnose von EAH zu etablieren ist die Infiltration der Hypophyse durch hämatopoetische mononukleären Zellen. Mäuse sind, indem man sie in einem verschlossenen Plastikbeutel Kammer, die mit CO 2 durchströmt wird eingeschläfert. Mäuse sind in der Kammer für insgesamt 8 Minuten gehalten. Nach Euthanasie, ist die Hypophyse gesammelt wie in der Begleitung Artikel beschrieben. Eine erkrankte Hypophyse erscheint geschwollen und mehr fest mit dem umgebenden Dura mater. Sharp Pinzette werden die Hirnhäute rund um die Hypophyse zu lösen. Sobald die Hypophyse bewegt sich frei auf dem Keilbein, einem Ende der Hypophyse wird mit einer Pinzette gefasst und der Hypophyse wird vorsichtig angehoben. Die Drüse wird dann in ein Mikrozentrifugenröhrchen mit Beckstead das Fixiermittel 5 platziert. Die Hypophyse wird über Nacht, fest eingewickelt in Papier-Objektiv, und in einer Kassette. Die Drüsen werden anschließend mit dem folgenden Protokoll: <table border="1"><tbody><tr><td> Rufnummer </td><td> Reagens </td><td> Zeit in Minuten </td><td> Temperatur (Celsius) </td></tr><tr><td> 1 </td><td> 70% Alkohol </td><td> 5 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 2 </td><td> 70% Alkohol </td><td> 15 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 3 </td><td> 95% Alkohol </td><td> 15 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 4 </td><td> 95% Alkohol </td><td> 15 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 5 </td><td> 100% Alkohol </td><td> 15 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 6 </td><td> 100% Alkohol </td><td> 7,5 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 7 </td><td> 100% Alkohol </td><td> 7,5 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 8 </td><td> Xylol </td><td> 20 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 9 </td><td> Xylol </td><td> 20 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 10 </td><td> Xylol </td><td&gt; 20 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 11 </td><td> Paraffin </td><td> 30 </td><td> 58 </td></tr><tr><td> 12 </td><td> Paraffin </td><td> 5 </td><td> 58 </td></tr><tr><td> 13 </td><td> Paraffin </td><td> 5 </td><td> 58 </td></tr></tbody></table> Nach der Bearbeitung werden Hypophyse in Paraffin eingebettet und mindestens 5 nonconsecutive Abschnitte (5-mu m dick) werden von jeder Drüse abgeschnitten. Nach dem Anschneiden, sind die Drüsen mit Hämatoxylin und Eosin gefärbt und analysiert, um die mononukleäre Infiltration zu quantifizieren. Der Abschnitt mit den schwersten Infiltration ist für die Auswertung ausgewählt. Die Schwere wird auf der Grundlage einer subjektiven Einschätzung des Ausmaßes der Hypophysenvorderlappen Ersatz oder Zerstörung durch Immunzellen erzielt: Klasse 0, keine Krankheit, Grad 1, 2% -20% der Betroffenen; Grad 2, 20% -30%; Grad 3, 30% -50%; Grad 4, 50% -90%; Grad 5, mehr als 90%. Alle Abschnitte sind von zwei Personen geblendet, um die Quelle der Abschnitte erzielt.

<ol><li>Tzou, S. C., Lupi, I., Landek, M., Gutenberg, A., Tzou, Y. M., Kimura, H., Pinna, G., Rose, N. R., Caturegli, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autoimmune+Hypophysitis+of+SJL+mice%3A+Clinical+Insights+from+a+New+Animal+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Autoimmune Hypophysitis of SJL mice: Clinical Insights from a New Animal Model.</a> Endocrinology. , (2008).</li>
<li>Twarog, F. J., Rose, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+production+of+thyroid+autoantibodies+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">The production of thyroid autoantibodies in mice.</a> J Immunol. 101, 242-2450 (1968).</li>
<li>Patrick, J., Lindstrom, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autoimmune+response+to+acetylcholine+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Autoimmune response to acetylcholine receptor.</a> Science. 180, 871-872 (1973).</li>
<li>Caturegli, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autoimmune+hypophysitis%3A+an+underestimated+disease+in+search+of+its+autoantigen%28s%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Endocrinol+Metab%22%5BJournal%5D)">Autoimmune hypophysitis: an underestimated disease in search of its autoantigen(s).</a> J Clin Endocrinol Metab. 92, 2038-2040 (2007).</li>
<li>Beckstead, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+technique+for+preservation+of+fixation-sensitive+antigens+in+paraffin-embedded+tissues%3A+addendum%5BTitle%5D)+AND+%22J+Histochem+Cytochem%22%5BJournal%5D)">A simple technique for preservation of fixation-sensitive antigens in paraffin-embedded tissues: addendum.</a> J Histochem Cytochem. 43, 345-345 (1995).</li>
<li>Levine, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allergic+adenophypophysitis%3A+new+experimental+disease+of+the+pituitary+gland%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Allergic adenophypophysitis: new experimental disease of the pituitary gland.</a> Science. 158, 1190-1191 (1967).</li>
<li>Yoon, J. W., Choi, D. S., Liang, H. C., Baek, H. S., Ko, I. Y., Jun, H. S., Gillam, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+an+organ-specific+autoimmune+disease%2C+lymphocytic+hypophysitis%2C+in+hamsters+by+recombinant+rubella+virus+glycoprotein+and+prevention+of+disease+by+neonatal+thymectomy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">Induction of an organ-specific autoimmune disease, lymphocytic hypophysitis, in hamsters by recombinant rubella virus glycoprotein and prevention of disease by neonatal thymectomy.</a> Journal of Virology. 66, 1210-1214 (1992).</li>
<li>Davis, J. R., McMahon, R. F., Lowenstein, P. R., Castro, M. G., Lincoln, G. A., McNeilly, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenovirus-mediated+gene+transfer+in+the+ovine+pituitary+gland+is+associated+with+hypophysitis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Adenovirus-mediated gene transfer in the ovine pituitary gland is associated with hypophysitis.</a> J Endocrinol. 173, 265-271 (2002).</li>
<li>Rotondo, F., Quintanar-Stephano, A., Asa, S. L., Lombardero, M., Berczi, I., Scheithauer, B. W., Horvath, E., Kovacs, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenohypophysitis+in+rat+pituitary+allografts%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Exp+Pathol%22%5BJournal%5D)">Adenohypophysitis in rat pituitary allografts.</a> Int J Exp Pathol. , (2010).</li>
</ol>

Vier Techniken berichtet worden, um Hypophysitis in Versuchstieren zu induzieren. Die Technik in diesem Artikel beschrieben wird, dass die Injektion von Hypophysen-Proteine ​​mit Freund Adjuvans vermischt wird, ist die älteste, seit 1967 6, und wurde in jüngerer Zeit 1 verbessert. Andere Techniken sind die Injektion von löslichen Rötelnvirus Glykoproteine ​​in 1992 7, die stereotaktische Injektion eines Adenovirus direkt in der Hypophyse in 2002 8 und die Transplantation von H...

<table><tbody><tr><td>SJL-Mäuse (The Jackson Laboratories)</td><td></td><td>Bestand 000686</td><td></td></tr><tr><td>2,2,2-Tribrom&amp;#8211;ethanol (Avertin)</td><td>TCI America</td><td>T-1420</td><td></td></tr><tr><td>Beckstead&amp;rsquo;s Fixativ</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

induktion der experimentellen autoimmunen hypophysitis in sjl mäuse

Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis in SJL Mice

Autoimmune Hypophysitis kann experimentell durch die Injektion von Hypophysen-Proteine ​​mit einem Adjuvans in anfälligen Mäusen 1 gemischt wiedergegeben werden. Mausmodelle erlauben uns zu untersuchen, wie Krankheiten zu entfalten, bieten häufig eine gute Nachbildung der gleichen Prozesse beim Menschen auftreten. Für einige Autoimmunerkrankungen wie Typ 1A Diabetes, gibt es Modelle (der NOD-Maus), die spontan ein Krankheitsbild ähnlich wie das menschliche Gegenstück. Für viele andere Autoimmunerkrankungen, muss jedoch das Modell experimentell induziert werden. Ein gemeinsamer Ansatz in dieser Hinsicht ist die Maus mit einer dominanten Antigen aus dem Organ untersucht abgeleitet injizieren. Zum Beispiel, injizieren Forscher im Bereich der Autoimmun-Thyreoiditis interessiert Mäuse mit Thyreoglobulin 2, und derjenigen, die unter Myasthenia gravis interessiert spritzen sie mit der Acetylcholin-Rezeptor 3. Wenn das Autoantigen für einen bestimmten Autoimmunerkrankungen nicht bekannt ist, injizieren Forscher eine Proteinrohextrakt von der Orgel durch die Autoimmunreaktion ausgerichtet. Für autoimmune Hypophysitis, bleiben die pathogenen Autoantigen (s) zu identifizieren 4, und damit eine grobe Hypophyse Protein-Präparation verwendet. In diesem Video-Artikel werden wir zeigen, wie experimentelle autoimmune Hypophysitis in SJL Mäusen zu induzieren.

Dieses Video zeigt, wie autoimmune Hypophysitis in SJL Mäusen und wie sie ihre Strenge durch Histopathologie beurteilen zu induzieren.

Induktion der experimentellen autoimmunen Hypophysitis in SJL Mäuse

Eine autoimmune Hypophysitis kann experimentell durch die Injektion von Hypophysenproteinen, gemischt mit einem Adjuvans, in suszeptible Mäuse reproduziert werden1. Maus ...

Die autoimmune Hypophysitis ist gekennzeichnet durch eine Vergrößerung der Hypophyse und einen Mangel an einem oder mehreren hypophysären Hormonen. Die ursächlichen autoantigenen Strukturen sind weiterhin unbekannt. Ein begleitendes Video demonstriert ein Protokoll zur Herstellung eines murinen hypophysären Immunogens, das hier verwendet wird, um ein Mausmodell zu erzeugen, das der humanen autoimmunen lymphozytären Hypophysitis ähnelt.Das hypophysäre Immungen wird in eine empfängliche Mauslinie injiziert. Anschließend wird die Injektion sieben Tage später wiederholt; nach 14 Tagen wird Blut für Biomarker-Studien gesammelt. Am Tag 28 werden Hypophysen von geopferten Mäusen entnommen, geschnitten und gefärbt, um das Ausmaß der Leukozyteninfiltration zu bestimmen.Die autoimmune Hypophysitis ist eine zunehmend erkannte Erkrankung, die sich schwer von anderen nicht hormonproduzierenden Raumforderungen unterscheiden lässt, die im Hypophysentalkessel entstehen. Obwohl die Erkrankung vor etwa 50 Jahren erstmals beschrieben wurde, sind die Autoantigene, die vom Immunsystem des Patienten bei der autoimmunen Hypophysitis erkannt werden, weiterhin unklar geblieben. 2008 veröffentlichten wir die Entwicklung eines Mausmodells, das die menschliche Erkrankung nahezu exakt nachbildet, die es nachzuahmen vorgesehen war.Dieses Mausmodell kann verwendet werden, um die an der Hypophysitis beteiligten hypophysären Autoantigene zu identifizieren und mehr über die Pathogenese sowie die natürlichen Verläufe der Hypophysitis zu erfahren. Das Modell basiert auf der Injektion von Proteinen aus der Maushypophyse in eine empfängliche Stammeslinie wie den SJL-Stamm. Diese Proteine müssen mit einem starken Adjuvans gemischt werden, um eine lokale entzündliche Umgebung zu erzeugen, die schließlich das Auftreten hypophysärer autoreaktiver Lymphozyten induziert.Zunächst in den Lymphknoten, die den Injektionsort entwässern, und anschließend in der Hypophyse. Das Modell erfordert die Injektion vergleichsweise großer Mengen an Hypophysenproteinen, insgesamt zwei Milligramm pro Maus. Dies deutet darauf hin, dass das körpereigene Antigen oder die körpereigenen Antigene in geringer Menge in der Fruchtbarkeitsdrüse vorhanden sind. Die Injektion einer sachgemäß präparierten Emulsion ist entscheidend für die Induktion der Erkrankung, da sie einer langsamen, kontinuierlichen Freisetzung von Hypophysenproteinen an den Injektionsstellen entspricht, was letztlich die Bildung und Aktivierung hypophysenspezifischer Lymphozyten unterstützt.In dem begleitenden Video wird eine Methode zur Herstellung von Hypophysen-Immunogen vorgestellt. Aus euthanasierten Mäusen isolierte Hypophysen werden homogenisiert und durch Zentrifugation mit niedriger Geschwindigkeit geklärt. Die Proteinmischung wird hinsichtlich ihrer Menge mittels colorimetrischem BCA-Assay und hinsichtlich ihrer Qualität durch Polyacrylamid-Gelelektrophorese beurteilt.Der wässrige Proteinhomogenat wird anschließend mit einem öligen Adjuvans, das inaktive Mycobacterium-tuberculosis-Bazillen enthält, gemischt, um die Hypophysenemulsion herzustellen. Nachdem die Emulsion wie im begleitenden Video gezeigt hergestellt wurde, entfernen Sie die Mikroemulgier-Nadel von der Ein-Milliliter-Spritze und befestigen eine 25-Gauge-Nadel. Für jede zu behandelnde Maus werden 100 Mikroliter der Hypophysenemulsion benötigt.Nach der Anästhesie einer Maus mit Everton sicherstellen, dass keine Reaktion auf einen Zehenquetschtest erfolgt, dann 50 Mikroliter der Emulsion subkutan in den linken dorsalen Hinterbeinbereich injizieren. Sicherstellen, dass die Nadelspitze vollständig unter der Haut ist und keine Emulsion aus der Injektionsstelle austritt. Danach 50 Mikroliter in den rechten inguinalen Bereich injizieren.Stellen Sie erneut sicher, dass nichts austritt. Beachten Sie, dass die Emulsion weißlich ist und sich nach der Injektion vor dem weißen Hintergrund des SGL L-Mausfells schwer unterscheiden lässt. Stellen Sie die Maus in ihren Käfig zurück und überwachen Sie ihre Erholung.Überwachen Sie die injizierten Mäuse täglich für die ersten drei Tage nach der Injektion, um sicherzustellen, dass kein extremer Stress auftritt. Das Adjuvans ist proinflammatorisch, da es inaktivierte m tuberculosis-Bazillen enthält. Am siebten Tag die Injektion auf gegenüberliegenden anatomischen Seiten wiederholen.Injizieren Sie 50 Mikroliter in den rechten dorsalen Hinterbeinbereich und 50 Mikroliter in den linken Leistenbereich. Überwachen Sie die Maus wie zuvor, da die experimentellen Ergebnisse erst nach Auftreten einer Immunantwort bewertet werden. Blut ist das am häufigsten verwendete Gewebe zur Beurteilung der experimentellen Ergebnisse, solange die Mäuse noch leben.Regelmäßig wird 14 Tage nach der ersten Immunisierung Blut entnommen, um die Serumspiegel von Hypophysen-Antikörpern oder anderen Markern wie Zytokinen und Chemokinen zu messen. Um Blut von einer lebenden Maus zu sammeln, halte das Tier sicher am Nackenfell und orte die Rückseite des Unterkiefers. Sobald diese Stelle klar identifiziert ist, stich mit einem vier Millimeter langen Lanzett in das submandibuläre Gefäßbündel.Blut beginnt aus der durchstochenen Stelle auszutreten. Sammeln Sie sechs Tropfen Blut in einem Mikrozentrifugenröhrchen. Reinigen Sie die durchstochene Stelle mit einem feuchten Papiertuch, um die Blutung zu stoppen.Stellen Sie die Blutröhrchen in eine Zentrifuge und zentrifugieren Sie sie mit 2000 G für 20 Minuten. Diese Zentrifugation trennt die Blutzellen, die sich im Pellet befinden, vom Serum snat. Überführen Sie das Serum in ein neues Mikrozentrifugenröhrchen.Lagern Sie das Serum bei minus 80 Grad Celsius, bis es benötigt wird. Es dauert etwa einen Monat, bis die immunisierten Mäuse eine voll ausgeprägte autoimmune Hypophysitis entwickeln. Daher werden die Mäuse in der Regel 28 Tage nach der ersten Immunisierung getötet.Nachdem Sie den Schädel geöffnet haben, heben Sie das Gehirn an und klappen es nach hinten, um die Hypophyse freizulegen. Eine erkrankte Hypophyse erscheint geschwollen und ist fester mit den umgebenden Hirnhäuten verwachsen. Bewegen Sie die Spitze einer feinen Pinzette um die Hypophyse, um die Hirnhäute zu lösen.Sobald sich die Hypophyse frei auf diesem Phen-Knochen bewegt, greifen Sie ein Ende der Drüse mit einer Pinzette an und heben Sie sie vorsichtig von diesem Phen-Knochen ab. Legen Sie das Gewebe in ein Mikrozentrifugenröhrchen, das ein Milliliter gepufferte Lösung enthält, eine auf Zink basierende Fixierlösung, und fixieren Sie die Drüse über Nacht bei Raumtemperatur. Am nächsten Tag überführen Sie die Hypophyse auf ein Stück Objektpapier.Wickeln Sie die Hypophyse in Linsenpapier ein und legen Sie sie in eine Histologiekassette. Bearbeiten Sie die Probe, indem Sie sie in steigenden Konzentrationen von Alkohol und anschließend Xylol inkubieren. Entfernen Sie das Linsenpapier und geben Sie die Hypophyse in eine Metallform.Dann bedecken Sie die Hypophyse mit Paraffin. Stellen Sie die Gewebekassette auf die Form und füllen Sie sie mit zusätzlichem Paraffin. Schließlich stellen Sie die gesamte Anordnung auf Eis, damit das Paraffin erstarrt.Nachdem das Paraffin erstarrt ist, schneiden Sie mit einem Mikrotom fünf Mikrometer dicke Schnitte. Nehmen Sie die Schnitte auf einem Objektträger auf. Sammeln Sie von jeder Maushypophyse mindestens fünf nicht aufeinanderfolgende Schnitte auf dem gleichen Objektträger.Färben Sie die Objektträger mit Hämatoxylin und Eosin mithilfe einer automatisierten Gewebefärbevorrichtung. Untersuchen Sie die Objektträger mit einem Lichtmikroskop, um die Ergebnisse zu erfassen. Das charakteristische Merkmal einer Hypophyse, die eine Hypophysitis entwickelt hat, ist die Infiltration durch Lymphozyten, die als kleine blaue Zellen erscheinen und einzeln oder in Gruppen angeordnet durch das Hypophysengewebe ziehen.Lymphozyten sind mit unterschiedlich starken Zerstörungen der normalen endokrinen Zellen der Hypophyse assoziiert. Der Abschnitt mit der stärksten lymphozytären Infiltration und Zerstörung der Hypophyse wird von zwei Untersuchern, die über die experimentellen Bedingungen im Unklaren gelassen wurden, zur Bewertung ausgewählt. Die Bewertung basiert auf einer subjektiven Einschätzung des Ausmaßes der Schädigung.Ein Wert von null weist auf eine normale Hypophyse hin, wobei Lymphozyten und andere hämatopoetische mononukleäre Zellen selten zu sehen sind. Ein Wert von eins bedeutet, dass die mononukleäre Infiltration zwischen zwei und 20 % der gesamten vorderen Hypophysenfläche einnimmt. Ein Wert von zwei zeigt an, dass die mononukleäre Infiltration zwischen 20 und 30 % der gesamten vorderen Hypophysenfläche einnimmt.Ein Wert von drei bedeutet, dass die mononukleäre Infiltration zwischen 30 und 50 % der gesamten vorderen Hypophysenfläche einnimmt. Ein Wert von vier bedeutet, dass die mononukleäre Infiltration zwischen 50 und 90 % der gesamten vorderen Hypophysenfläche einnimmt, und ein Wert von fünf bedeutet, dass die mononukleäre Infiltration nahezu die gesamte vordere Hypophysenfläche einnimmt. Nach der Einarbeitung kann die Injektion des Immunogens in eine Maus innerhalb von 15 Minuten durchgeführt werden.Die Gewinnung von peripherem Blut von einer Maus kann innerhalb von fünf Minuten erfolgen, und die Herstellung von Objektträgern für die Histopathologie ist innerhalb von sechs Stunden möglich, während gleichzeitig der Immunisierungsprozess durchgeführt wird. Es ist wichtig, nach der Anästhesie und der Injektion des Immungens sorgfältig auf den Gesundheitszustand der Maus zu achten. Zusätzlich zur Histopathologie der Hypophyse.Dieses Verfahren kann verwendet werden, um eine Vielzahl experimenteller Ergebnisse mithilfe verschiedener Methoden zu sammeln, wie beispielsweise der Beurteilung der Unterpopulationen von Immunzellen in den drainierenden Lymphknoten mittels Durchflusszytometrie. Die Technik der Immunisierung mit einem Gewebeextrakt zur Induktion einer autoimmunen Erkrankung eröffnet Forschern auf dem Gebiet der Autoimmunität die Möglichkeit, die entscheidenden Ereignisse in der Krankheitspathogenese zu entdecken. Nach dem Anschauen dieses Videos sollte man ein gutes Verständnis dafür haben, wie man Mäuse zur Induktion einer experimentellen autoimmunen Hypophysitis immunisiert und wie man deren Auftreten und Schweregrad bewertet.Es sollte nicht vergessen werden, dass die Arbeit mit Mikrotomklingen gefährlich sein kann. Deshalb sollten stets Vorsichtsmaßnahmen wie das Tragen von Handschuhen und Arbeiten unter guter Beleuchtung getroffen werden.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

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