Name: Induktion der experimentellen autoimmunen Hypophysitis in SJL Mäuse (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-12-17T17:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 38 s
Description: Erfahren Sie die Induktion experimenteller autoimmuner Hypophysitis bei SJL-Mäusen durch Immunogen-Injektion und histopathologische Analyse. Dieses Protokoll ermöglicht die Untersuchung von Autoimmunmechanismen und Krankheitsschwere.

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Diese Arbeit wurde vom NIH DK080351 auf PC, und durch eine großzügige Schenkung des Terry und Kristine Gore Familie unterstützt.

Experimentelles Protokoll Sobald die Hypophyse Immunogen bereit ist (siehe begleitende Artikel), ist es subkutan in SJL Mäusen (The Jackson Laboratories, hat 000.686) injiziert. Eine zweite, identische Injektion ist 7 Tage später wiederholt. Mäuse werden dann verwendet, um in vivo und post-mortem Ergebnisse zu sammeln. Schritt 1. Die subkutane Injektion von Hypophysen-Immunogen in SJL Mäusen Mäuse werden zunächst betäubt durch die Injektion von 0,5 ml 20 mg / ml 2,2,2-Tribromethanol (Avertin, TCI America, T-1420) intraperitoneal. Mäuse werden dann subkutan mit 100 ul der Hypophyse Emulsion, die, wie in der Begleiter angegeben 2181 Artikel JoVE injiziert, enthält 1 mg Hypophysenextrakt und 0,25 mg von komplettem Freund-Adjuvans. Die Emulsion wird in der linken dorsalen Hinterbein Region ((50 ul) und der rechten Leistengegend (50 ul) injiziert. Die Hypophyse Emulsion wieder an Tag 7 in den gegenüberliegenden Seiten (50 ul in der rechten dorsalen Hinterbein Region und injiziert 50 pl in der linken Leistengegend). Mäuse sind täglich für die ersten 3 Tage überwacht und dann wöchentlich bis zum Tag der Opfer, die in der Regel 28 Tage nach der ersten Immunisierung. Schritt 2. Sammlung von in-vivo-Ergebnisse: Blood Assays Das Gewebe am häufigsten verwendet werden, um experimentelle Ergebnisse zu bewerten, während die Mäuse noch am Leben ist Blut. Blut wird routinemäßig 14 Tage nach der ersten Immunisierung, die Serumspiegel von Hypophyse Antikörpern oder anderen Markern wie Zytokine und Chemokine zu messen gezogen. Blut wird von lebenden Mäusen wie folgt gesammelt. Mäuse sind sicher durch die Genick gehalten und die Rückseite der Kieferknochen befindet. Sobald der Rückseite des Kieferknochens befindet, sind 4 mm Lanzetten zu durchbohren die submandibularis Leitbündel verwendet. Nach Blut gesammelt, mit Druck auf den auf dem Gelände einen Alkoholtupfer, um ein Hämatom zu vermeiden. Gesammelte Blut wird bei 2.000 g für 20 Minuten zentrifugiert und bei -80 ° C bis zur Verwendung. Schritt 3. Sammlung von Post-mortem-Ergebnisse: Pituitary Histopathologie Mäuse sind in der Regel 28 Tage nach der ersten Immunisierung geopfert. Der Kardinal-Funktion notwendig, um die Diagnose von EAH zu etablieren ist die Infiltration der Hypophyse durch hämatopoetische mononukleären Zellen. Mäuse sind, indem man sie in einem verschlossenen Plastikbeutel Kammer, die mit CO 2 durchströmt wird eingeschläfert. Mäuse sind in der Kammer für insgesamt 8 Minuten gehalten. Nach Euthanasie, ist die Hypophyse gesammelt wie in der Begleitung Artikel beschrieben. Eine erkrankte Hypophyse erscheint geschwollen und mehr fest mit dem umgebenden Dura mater. Sharp Pinzette werden die Hirnhäute rund um die Hypophyse zu lösen. Sobald die Hypophyse bewegt sich frei auf dem Keilbein, einem Ende der Hypophyse wird mit einer Pinzette gefasst und der Hypophyse wird vorsichtig angehoben. Die Drüse wird dann in ein Mikrozentrifugenröhrchen mit Beckstead das Fixiermittel 5 platziert. Die Hypophyse wird über Nacht, fest eingewickelt in Papier-Objektiv, und in einer Kassette. Die Drüsen werden anschließend mit dem folgenden Protokoll: <table border="1"><tbody><tr><td> Rufnummer </td><td> Reagens </td><td> Zeit in Minuten </td><td> Temperatur (Celsius) </td></tr><tr><td> 1 </td><td> 70% Alkohol </td><td> 5 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 2 </td><td> 70% Alkohol </td><td> 15 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 3 </td><td> 95% Alkohol </td><td> 15 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 4 </td><td> 95% Alkohol </td><td> 15 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 5 </td><td> 100% Alkohol </td><td> 15 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 6 </td><td> 100% Alkohol </td><td> 7,5 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 7 </td><td> 100% Alkohol </td><td> 7,5 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 8 </td><td> Xylol </td><td> 20 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 9 </td><td> Xylol </td><td> 20 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 10 </td><td> Xylol </td><td&gt; 20 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 11 </td><td> Paraffin </td><td> 30 </td><td> 58 </td></tr><tr><td> 12 </td><td> Paraffin </td><td> 5 </td><td> 58 </td></tr><tr><td> 13 </td><td> Paraffin </td><td> 5 </td><td> 58 </td></tr></tbody></table> Nach der Bearbeitung werden Hypophyse in Paraffin eingebettet und mindestens 5 nonconsecutive Abschnitte (5-mu m dick) werden von jeder Drüse abgeschnitten. Nach dem Anschneiden, sind die Drüsen mit Hämatoxylin und Eosin gefärbt und analysiert, um die mononukleäre Infiltration zu quantifizieren. Der Abschnitt mit den schwersten Infiltration ist für die Auswertung ausgewählt. Die Schwere wird auf der Grundlage einer subjektiven Einschätzung des Ausmaßes der Hypophysenvorderlappen Ersatz oder Zerstörung durch Immunzellen erzielt: Klasse 0, keine Krankheit, Grad 1, 2% -20% der Betroffenen; Grad 2, 20% -30%; Grad 3, 30% -50%; Grad 4, 50% -90%; Grad 5, mehr als 90%. Alle Abschnitte sind von zwei Personen geblendet, um die Quelle der Abschnitte erzielt.

<ol><li>Tzou, S. C., Lupi, I., Landek, M., Gutenberg, A., Tzou, Y. M., Kimura, H., Pinna, G., Rose, N. R., Caturegli, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autoimmune+Hypophysitis+of+SJL+mice%3A+Clinical+Insights+from+a+New+Animal+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Autoimmune Hypophysitis of SJL mice: Clinical Insights from a New Animal Model.</a> Endocrinology. , (2008).</li>
<li>Twarog, F. J., Rose, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+production+of+thyroid+autoantibodies+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">The production of thyroid autoantibodies in mice.</a> J Immunol. 101, 242-2450 (1968).</li>
<li>Patrick, J., Lindstrom, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autoimmune+response+to+acetylcholine+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Autoimmune response to acetylcholine receptor.</a> Science. 180, 871-872 (1973).</li>
<li>Caturegli, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autoimmune+hypophysitis%3A+an+underestimated+disease+in+search+of+its+autoantigen%28s%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Endocrinol+Metab%22%5BJournal%5D)">Autoimmune hypophysitis: an underestimated disease in search of its autoantigen(s).</a> J Clin Endocrinol Metab. 92, 2038-2040 (2007).</li>
<li>Beckstead, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+technique+for+preservation+of+fixation-sensitive+antigens+in+paraffin-embedded+tissues%3A+addendum%5BTitle%5D)+AND+%22J+Histochem+Cytochem%22%5BJournal%5D)">A simple technique for preservation of fixation-sensitive antigens in paraffin-embedded tissues: addendum.</a> J Histochem Cytochem. 43, 345-345 (1995).</li>
<li>Levine, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allergic+adenophypophysitis%3A+new+experimental+disease+of+the+pituitary+gland%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Allergic adenophypophysitis: new experimental disease of the pituitary gland.</a> Science. 158, 1190-1191 (1967).</li>
<li>Yoon, J. W., Choi, D. S., Liang, H. C., Baek, H. S., Ko, I. Y., Jun, H. S., Gillam, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+an+organ-specific+autoimmune+disease%2C+lymphocytic+hypophysitis%2C+in+hamsters+by+recombinant+rubella+virus+glycoprotein+and+prevention+of+disease+by+neonatal+thymectomy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">Induction of an organ-specific autoimmune disease, lymphocytic hypophysitis, in hamsters by recombinant rubella virus glycoprotein and prevention of disease by neonatal thymectomy.</a> Journal of Virology. 66, 1210-1214 (1992).</li>
<li>Davis, J. R., McMahon, R. F., Lowenstein, P. R., Castro, M. G., Lincoln, G. A., McNeilly, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenovirus-mediated+gene+transfer+in+the+ovine+pituitary+gland+is+associated+with+hypophysitis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Adenovirus-mediated gene transfer in the ovine pituitary gland is associated with hypophysitis.</a> J Endocrinol. 173, 265-271 (2002).</li>
<li>Rotondo, F., Quintanar-Stephano, A., Asa, S. L., Lombardero, M., Berczi, I., Scheithauer, B. W., Horvath, E., Kovacs, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenohypophysitis+in+rat+pituitary+allografts%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Exp+Pathol%22%5BJournal%5D)">Adenohypophysitis in rat pituitary allografts.</a> Int J Exp Pathol. , (2010).</li>
</ol>

Vier Techniken berichtet worden, um Hypophysitis in Versuchstieren zu induzieren. Die Technik in diesem Artikel beschrieben wird, dass die Injektion von Hypophysen-Proteine ​​mit Freund Adjuvans vermischt wird, ist die älteste, seit 1967 6, und wurde in jüngerer Zeit 1 verbessert. Andere Techniken sind die Injektion von löslichen Rötelnvirus Glykoproteine ​​in 1992 7, die stereotaktische Injektion eines Adenovirus direkt in der Hypophyse in 2002 8 und die Transplantation von H...

<table><tbody><tr><td>SJL-Mäuse (The Jackson Laboratories)</td><td></td><td>Bestand 000686</td><td></td></tr><tr><td>2,2,2-Tribrom&amp;#8211;ethanol (Avertin)</td><td>TCI America</td><td>T-1420</td><td></td></tr><tr><td>Beckstead&amp;rsquo;s Fixativ</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

induktion der experimentellen autoimmunen hypophysitis in sjl mäuse

Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis in SJL Mice

Autoimmune Hypophysitis kann experimentell durch die Injektion von Hypophysen-Proteine ​​mit einem Adjuvans in anfälligen Mäusen 1 gemischt wiedergegeben werden. Mausmodelle erlauben uns zu untersuchen, wie Krankheiten zu entfalten, bieten häufig eine gute Nachbildung der gleichen Prozesse beim Menschen auftreten. Für einige Autoimmunerkrankungen wie Typ 1A Diabetes, gibt es Modelle (der NOD-Maus), die spontan ein Krankheitsbild ähnlich wie das menschliche Gegenstück. Für viele andere Autoimmunerkrankungen, muss jedoch das Modell experimentell induziert werden. Ein gemeinsamer Ansatz in dieser Hinsicht ist die Maus mit einer dominanten Antigen aus dem Organ untersucht abgeleitet injizieren. Zum Beispiel, injizieren Forscher im Bereich der Autoimmun-Thyreoiditis interessiert Mäuse mit Thyreoglobulin 2, und derjenigen, die unter Myasthenia gravis interessiert spritzen sie mit der Acetylcholin-Rezeptor 3. Wenn das Autoantigen für einen bestimmten Autoimmunerkrankungen nicht bekannt ist, injizieren Forscher eine Proteinrohextrakt von der Orgel durch die Autoimmunreaktion ausgerichtet. Für autoimmune Hypophysitis, bleiben die pathogenen Autoantigen (s) zu identifizieren 4, und damit eine grobe Hypophyse Protein-Präparation verwendet. In diesem Video-Artikel werden wir zeigen, wie experimentelle autoimmune Hypophysitis in SJL Mäusen zu induzieren.

Dieses Video zeigt, wie autoimmune Hypophysitis in SJL Mäusen und wie sie ihre Strenge durch Histopathologie beurteilen zu induzieren.

Induktion der experimentellen autoimmunen Hypophysitis in SJL Mäuse

Eine autoimmune Hypophysitis kann experimentell durch die Injektion von Hypophysenproteinen, gemischt mit einem Adjuvans, in suszeptible Mäuse reproduziert werden1. Maus ...

Die autoimmune Hypophysitis ist gekennzeichnet durch eine Vergrößerung der Hypophyse und einen Mangel an einem oder mehreren hypophysären Hormonen. Die ursächlichen autoantigenen Strukturen sind weiterhin unbekannt. Ein begleitendes Video demonstriert ein Protokoll zur Herstellung eines murinen hypophysären Immunogens, das hier verwendet wird, um ein Mausmodell zu erzeugen, das der humanen autoimmunen lymphozytären Hypophysitis ähnelt.Das hypophysäre Immungen wird in eine empfängliche Mauslinie injiziert. Anschließend wird die Injektion sieben Tage später wiederholt; nach 14 Tagen wird Blut für Biomarker-Studien gesammelt. Am Tag 28 werden Hypophysen von geopferten Mäusen entnommen, geschnitten und gefärbt, um das Ausmaß der Leukozyteninfiltration zu bestimmen.Die autoimmune Hypophysitis ist eine zunehmend erkannte Erkrankung, die sich schwer von anderen nicht hormonproduzierenden Raumforderungen unterscheiden lässt, die im Hypophysentalkessel entstehen. Obwohl die Erkrankung vor etwa 50 Jahren erstmals beschrieben wurde, sind die Autoantigene, die vom Immunsystem des Patienten bei der autoimmunen Hypophysitis erkannt werden, weiterhin unklar geblieben. 2008 veröffentlichten wir di

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Research

Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie und Infektion

Verzögerte Überempfindlichkeitsreaktionen (DTH) ist eine entzündliche Reaktion durch CCR7-Effektor-Memory-T (TEM)-Lymphozyten vermittelt. Hier zeigen wir, wie um Antigen-spezifische TEM-Zellen zu aktivieren, bewegen Adoptiveltern DTH in Lewis-Ratten und überwachen die entzündliche Reaktion.

Induktion und Überwachung von Adoptive Allergien vom verzögerten Typ in Ratten

Autoimmune Hypophysitis kann in Mäusen durch Injektion ein Auszug aus Maus Hypophyse Proteine ​​reproduziert werden.

Vorbereitung der Maus Pituitary Immunogen für die Induktion der experimentellen autoimmunen Hypophysitis

Das Video zeigt die Induktion einer experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis in einem Mausmodell durch Injektion einer Kombination aus Myelin-Oligodendrozyten-Glykoproteinen und inaktiviertem Mycobacterium tuberculosis. Das Modell ermöglicht es Forschenden, Krankheitsmechanismen zu untersuchen und therapeutische Interventionen zu testen.

Induktion einer experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis im Mausmodell

In diesem Video wird ein Mausmodell für Multiple Sklerose mit Hilfe der experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis (EAE) erstellt. Der Maus wird eine Emulsion injiziert, die ein neuronales Peptid und ein Adjuvans enthält, wodurch eine Immunantwort ausgelöst wird, die autoreaktive T-Zellen aktiviert. Darauf folgt eine Injektion von Pertussis-Toxin (PTX), um die Durchlässigkeit der Blut-Hirn-Schranke zu erhöhen, so dass die autoreaktiven T-Zellen das Gehirn infiltrieren können. Diese...

Der Transfer von bm12-Lymphozyten in einen C57BL/6-Empfänger ist ein etabliertes Modell des systemischen Lupus erythematodes. Hier beschreiben wir, wie man mit diesem Modell eine Krankheit auslösen kann und wie man T-follikuläre Helferzellen, Keimzentrum-B-Zellen und Plasmazellen mittels Durchflusszytometrie charakterisiert.

Das BM12 Inducible Modell des systemischen Lupus erythematodes (SLE) in C57BL / 6-Mäuse

Dieses Manuskript beschreibt die Methoden zur Induktion und Bewertung des experimentellen Modells der autoimmunen Enzephalomyelitis (EAE), zusammen mit der Beurteilung der Immunzellverteilung und der mRNA-Zytokinspiegel in Lymphknoten, Milz, Blut und Rückenmark mittels Durchflusszytometrie bzw. quantitativer PCR in verschiedenen Krankheitsstadien.

Die Induktion der experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis bei Mäusen und die Auswertung des Krankheitsabhängige Verteilung von Immunzellen in verschiedenen Geweben

Dieser Bericht beschreibt einen einfachen Ansatz, um erfolgreich experimentelle autoimmune Neuritis (EAN) mit dem Myelin Protein zero (P0)180-199 Peptid in Kombination mit Freunds kompletten Adjuvans und Pertussis-Toxin zu induzieren. Wir präsentieren Ihnen eine ausgereifte Paradigma in der Lage, präzise Bewertung des Ausmaßes der funktionelle Defizite und Neuropathologie, die in diesem EAN auftreten.

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Wir beschreiben ein in vivo Immunisierungs-, translationales Hepatitis-Modell bei BALB / c-Mäusen, das verwendet werden kann, um die Pathogenese der medikamenteninduzierten Autoimmunhepatitis einschließlich der bei dieser Krankheit beobachteten Geschlechtsunterschiede zu untersuchen. Wir werden beschreiben, wie dieses Modell reproduzierbare Analysen mit experimentellen In-vivo- und In-vitro-Techniken demonstriert.

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Ein adoptives Transfermodell der rheumatoiden Arthritis bei Mäusen

Erfahren Sie die Induktion experimenteller autoimmuner Hypophysitis bei SJL-Mäusen durch Immunogen-Injektion und histopathologische Analyse. Dieses Protokoll ermöglicht die Untersuchung von Autoimmunmechanismen und Krankheitsschwere.

Induktion der experimentellen autoimmunen Hypophysitis in SJL Mäuse

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