Bestimmen Zellzahl während der Zellkultur mit dem Scepter Cell Counter

Der Zepterzellzähler ist ein tragbares automatisiertes Gerät zum Zählen von Zellen, zur Überwachung des Zelldurchmessers und -volumens sowie zur Überprüfung der Gesundheit und Qualität von Zellpopulationen. Es bietet erhebliche Vorteile gegenüber anderen Zählmethoden, einschließlich verbesserter Genauigkeit, Benutzerfreundlichkeit und niedriger Kosten für die Zählung von Zellen. Befolgen Sie mit dem Zepter die Anweisungen auf dem grafischen Display, um Zellen in den Einwegsensor zu saugen.

Die Zellen werden dann gezählt und das Gerät meldet Zellkonzentrationen und Statistiken, die auf einen Computer hochgeladen und analysiert werden können. Hallo, ich bin Sonya. Ich bin Forscher hier in Millport und werde Ihnen heute zeigen, wie man das Zepter benutzt.

Zellzähler Das Zählen von Zellen ist ein notwendiger, aber mühsamer Schritt für die in vitro Zellkultur. Konsistente Zellkonzentrationen gewährleisten experimentelle Reproduzierbarkeit und Genauigkeit. Zellzählungen sind wichtig für die Überwachung der Zellgesundheit und der Proliferationsrate, die Beurteilung von unsterblichen oder Transformationszellen, die Zellen für nachfolgende Experimente, Transfektion oder Infektion aussäen, und die Vorbereitung zellbasierter Assays, obwohl Geschwindigkeit und Genauigkeit erforderlich sind.

Bei der Zellzählung zählten 71 % von 400 befragten Forschern Zellen mit einem Hämozytometer. Die Hämozytometrie ist zwar kostengünstig, aber mühsam und anfällig für Voreingenommenheit und Missbrauch durch die Benutzer, was zu ungenauen Zählungen führt. Fehlerquellen in der Hämozytometrie sind eine ungleichmäßige Zellverteilung in der Probe, zu viele oder zu wenige Zellen in der Probe.

Subjektive Entscheidungen, ob eine bestimmte Zelle in den definierten Zählbereich fällt. Kontamination des Hämozytometers, Variation des Benutzertous und Variation der Füllrate des Hämozytometers, um die Langeweile zu lindern, die mit der manuellen Zählung verbunden ist. 29 % der Forscher zählen Zellen mit automatisierten Zellzählgeräten.

Für die meisten Forscher ist der Preis, der mit diesen großen Tischgeräten verbunden ist, jedoch ein Hindernis für ihre Verwendung. Der Zepterzellenzähler ist ein automatisiertes Handgerät, das die Automatisierung und Genauigkeit der Zählung zu relativ geringen Kosten in einem einfach zu bedienenden Handheld-Format bietet. Das System verwendet das Coter-Prinzip der impedanzbasierten Partikeldetektion in einem miniaturisierten Format unter Verwendung einer Kombination aus analoger und digitaler Hardware für die Signalverarbeitung, Datenspeicherung und grafische Anzeige.

Der Einwegsensor ist mit einer mikrofabrizierten Zellsensorzone ausgestattet, die die Unterscheidung nach Zellgröße und Zellvolumen bei einer Auflösung im Submikrometer- und Sub-Pikoliterbereich ermöglicht und durch präzise Liquid-Handling-Kanäle und Elektronik verbessert wird. Der Zepter-Zellzähler zeigt die Statistiken der Zellpopulation grafisch als zu verwendendes Histogramm an. Der Zepterzellzähler beginnt mit der Verdünnung einer Einzelzellsuspension von Zellen in phosphatgepufferter Kochsalzlösung.

Optimal ist eine Konzentration von 10.000 bis 500.000 Zellen pro Milliliter. Übertragen Sie 100 Mikroliter verdünnte Zellen in ein 1,5-Milliliter-Microview-Röhrchen. Schalten Sie den Zepterzellenzähler ein, indem Sie den Schalter auf der Rückseite des Instruments gedrückt halten und warten, bis die Anweisungen auf dem Bildschirm angezeigt werden.

Wenn Sie dazu aufgefordert werden, befestigen Sie einen Sensor am Ende der Zeptereinheit, wobei die Elektrodenmesstafel zur Vorderseite des Instruments zeigt. Zeptersensoren bestehen aus einer präzisionsgeformten Probenahmekammer mit einer elektronischen Erfassungszone und integrierten Zellsensorelektroden. Die Sensoren ermöglichen die Unterscheidung der Zellgröße mit einer Auflösung im Submikrometerbereich und des Zellvolumens mit einer Auflösung im unteren Pikoliterbereich.

Eine konsistente Sensortechnik stellt sicher, dass gleiche Probenvolumina gezählt und genaue Größenmessungen durchgeführt werden. Sobald der Sensor angebracht ist, führen Sie jeden Schritt des Zählvorgangs gemäß den Anweisungen auf dem Bildschirm wie folgt aus. Wenn der Bildschirm anzeigt, halten Sie den Kolben gedrückt, um mit dem Drücken des Kolbens zu beginnen, der Bildschirm zeigt dann an, tauchen Sie den Sensor ein, tauchen Sie den Sensor in die Zellsuspensionslösung und lassen Sie den Kolben los, um die Zellsuspension in den Sensor zu aspirieren.

Der Kolben fungiert als elektrisches Signal und saugt die Probe plus das Totvolumen in den Sensor. Die Geschwindigkeit oder Genauigkeit des Tauchens spielt keine Rolle, wie es beim Pipettieren der Fall ist. Dieser Vorgang dauert einige Sekunden, wenn er fertig ist.

Das Gerät gibt einen Signalton aus und die geladene Probe wird auf dem Bildschirm angezeigt. Sobald die Probe in den Sensor geladen ist, wird sie durch die Erfassungszone gezogen, um die Zellgröße und das Zellvolumen zu beurteilen. Sobald 50 Mikroliter Probe gezählt sind, weist der Sensor das Gerät durch die Mikrokanäle an, die Zählung zu stoppen.

Nachdem die Zählung abgeschlossen ist, zeigt der Gerätebildschirm die Zählung abgeschlossen an. Bitte Sensor ausbauen und entsorgen. Befolgen Sie die Anweisungen, entfernen und entsorgen Sie den Sensor.

Das Gerät zeigt dann ein Histogramm der Zellgröße oder des Zelldurchmessers auf seinem Bildschirm sowie die Zellkonzentration pro Milliliter an. Nachdem die Zählung abgeschlossen ist und das Histogramm auf dem Gerät angezeigt wird, wenden Sie Gates an, indem Sie die Umschalttaste drücken, wählen Sie Auto Gating oder Use Last, um das Gate entweder automatisch auf der Grundlage des Histogrammprofils festzulegen oder die Gates aus der vorherigen Zählung zu verwenden. Unabhängig von der Auswahl können die Tore manuell auf fein verschoben werden.

Optimieren Sie die Daten, drücken Sie die Umschalttaste erneut, um das linke Gate auszuwählen, und scrollen Sie mit dem Umschalter, um das Gate wie gewünscht zu verschieben. Drücken Sie dann erneut den Schalter, um das rechte Gate zu aktivieren, und scrollen Sie den Schalter, um das rechte Gate zu platzieren. Klicken Sie erneut.

Eine neue Zellkonzentration, das durchschnittliche Zellvolumen und der Durchmesser werden angezeigt. Der Umschalter kann auch auf beiden Seiten angebracht werden, um die Anzeige zwischen Datum, Uhrzeit, mittlerer Zellengröße und mittlerem Zellvolumen umzuschalten. Bis zu 72 Histogramme können auf dem Gerät selbst gespeichert werden. Um die Daten auf einen PC hochzuladen, schließen Sie das Instrument über den USB-Kabelanschluss auf dem Bildschirm am PC an.

Doppelklicken Sie auf die Zepter-Softwareanwendung, um die Software zu starten. Klicken Sie dann auf Verbinden. Alle Zählungen werden automatisch in die Software portiert.

Die Zepter-Anwendungssoftware zeigt das Histogramm an, das die Populationsverteilung der Kultur entweder in Volumen oder Durchmesser beschreibt. Heruntergeladene Dateien können dann nach Microsoft Excel exportiert werden, wo die Rohdaten in Bins mit bestimmten Zelldurchmessern oder Zellvolumina angezeigt werden. 19 verschiedene Zelllinien wurden für die Zählung vorbereitet und die theoretischen Ausgangskonzentrationen mit dem aculter counter bestimmt.

Diese Zellsuspensionen wurden dann weiter verdünnt, um Zellsuspensionen in theoretischen Zellkonzentrationen zu erhalten. Mit dem Zepterzellzähler wurden dann die Zellkonzentrationen bestimmt. Diese Abbildung zeigt fünf Verdünnungen, die für fünf repräsentative Zelllinien gemessen wurden, zusammen mit der theoretischen Zellkonzentration.

Die hohe Linearität, die durch die r-Quadrat-Werte angezeigt wird, zeigt, dass die Zepterzählung eine zuverlässige Methode für die getesteten Zelllinien über einen weiten linearen Arbeitsbereich ist. Die relative Gesamtgenauigkeit der Zepterzählung wird hier demonstriert, indem die aus der Zepterzählung gewonnenen Daten mit den aus der Zepterzählung gewonnenen Zählungen verglichen werden. Der Logarithmus der Zepterzellzahlen wird gegen den Logarithmus der Kepterzahlen aufgetragen und zeigt, dass die Zepterzahlen aller getesteten Zelllinien mit den Cterzahlen übereinstimmen.

Die Zählung von 19 Zelllinien wurde mit einem Z-Zwei-Schar-Zähler durchgeführt. Der Zepterzellzähler, ein automatisierter bildverarbeitungsbasierter Zähler, wie z. B. ein V-Zell- oder Zähltestsystem, und eine Hämo-TER-Zählung wurden gemäß den Anweisungen des Herstellers unter Verwendung der gleichen Zellstartsuspension und identischer Verdünnungen durchgeführt. Die in dieser Abbildung gezeigten Ergebnisse zeigen, dass die durch Zepterzählung gemessenen Zellkonzentrationen mit hoher Linearität eng mit den theoretischen Zellkonzentrationen übereinstimmen.

Der prozentuale Variationskoeffizient oder CV wurde für jede Verdünnung jeder Zelllinie berechnet. Für jedes hier gezeigte Zählsystem ist der durchschnittliche prozentuale CVS über 19 Zelllinien in Bezug auf die Zellkonzentration und die Zählmethode innerhalb des Betriebsbereichs angegeben. Der Zepterzellzähler ist präziser als die Hämozytometerzählung und zeigt kleinere Standardabweichungen und kleinere durchschnittliche Variationskoeffizienten an.

Die Zepterzählung ist 10-mal schneller als die Hämozytometrie und auch schneller als andere automatisierte Zähler. Hier wurden SF neun, MCF sieben und HC 2 93 Zellen mit den in diesem Video beschriebenen Methoden gezählt. Aufgezeichnet wurde die durchschnittliche Zeit, die für die Messung der Zellkonzentration benötigt wird.

Es ist zu beachten, dass die Hämozytometrie nur einmal pro Probe durchgeführt wurde. Scepter führt Messungen basierend auf der Zellgröße durch. So können Veränderungen in der zellulären Morphologie im Histogramm erfasst werden.

Gesunde Kulturen weisen eine schöne glockenförmige Gaußsche Verteilung auf, während ungesunde Zellen läusen und eine Verschiebung des Histogramms nach links verursachen. In ähnlicher Weise wurden bei der Mischung einer Population von 50 % toten Zellen mit 50 % lebenden Zellen Histogrammverschiebungen beobachtet. Ich habe Ihnen gerade gezeigt, wie Sie den neuen Zepterzellzähler für Millipore verwenden können, der die Art und Weise, wie Forscher ihre Zellen zählen, revolutioniert.