Name: Protokoll für Mosquito Aufzucht (A. gambiae) (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-04T01:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 3 s
Description: Lernen Sie die Laboraufzucht von Anopheles gambiae mit kontrollierten Bedingungen bei 27°C und 80% Luftfeuchtigkeit. Diese Methode ermöglicht Malaria-Vektorforschung durch alle Lebensstadien.

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Mosquito Essen: <ol><li> Lebensmittel A: geerdet Fischfutter (Aquaricare). Eine kleine Prise hinzugefügt werden muss. </li><li> Lebensmittel B: geerdet Katzenfutter (Purina). Eine kleine Prise hinzugefügt werden muss. </li><li> Lebensmittel C: Katzenfutter (Purina). Zwei Tabletten hinzugefügt werden muss. </li></ol> Blood: Tierischem oder menschlichem Blut kann nach hinten Moskitos eingesetzt werden. Frisches Blut mit einer Spritze gesammelt und in ein steriles 15 ml Falcon-Röhrchen mit 1 ml der CPD (Antikoagulans) für jeweils 10 ml Blut, dann vorsichtig gemischt und zentrifugiert bei Raumtemperatur bei 2000 rpm für 5 min. Der Überstand wird verworfen, kümmert sich um die Buffy-Coat, die anderen Blutzellen (zB WBC) umfasst entfernen. Die RBC Pellet wird dann in ein gleiches Volumen RPMI-Medium mit einer Pipette suspendiert und weitere in diesem Medium dreimal gewaschen. Nach dem letzten Waschen, die pelletierten Erythrozyten sind in dem gleichen Volumen RPMI resuspendiert und bei 4 ° C (für 8-10 Tage aufbewahrt werden). Gerade vor dem Füttern wird der RBC (in RPMI) zentrifugiert (2000 rpm für 5 min) zu Pellets automatisch in die Zellen und die gepackte RBC ist in Serum (O + Humanserum) resuspendiert, um eine 40% Hämatokrit zu erhalten. Das Blut muss bei 37 ° C immer für die Fütterung gehalten werden. TAG 1: <ol><li> Die 3-5 Tage alten adulten weiblichen Mücken sind auf Blut, Eier zu legen zugeführt. </li><li> Für Blut füttern, ist eine künstliche Membran (Parafilm) Fütterung Methode wie folgt verwendet: <ol><li> Rote Blutkörperchen (siehe oben für Blut Vorbereitung) sind mit hitzeinaktiviertes Serum gemischt, um eine ~ 40% Hämatokrit (verpackt RBC 40% und Serum 60%) erhalten. Dies ist auf die Glasfeeder aufgenommen. </li><li> Der Anleger ist es, eine Warmwasser-Jacke (37 ° C) verbunden ist, und auf den Käfig, um die Moskitos Zugriff auf die Membranoberfläche zu ermöglichen. </li><li> Die Mücken sind erlaubt, für ~ 30 Minuten zu ernähren. </li></ol></li></ol> TAG 3: <ol><li> Die Weibchen legt Eier 2 Tage, nachdem sie ernähren sich von Blut. Ein kleines Filterpapier in eine konische Form gewickelt ist in einem kleinen Becherglas mit destilliertem Wasser gelegt, um sicherzustellen, dass Filterpapier feucht wird. Der Becher wird in den Käfig über Nacht für die Moskitos, Eier zu legen gehalten. </li></ol> TAG 4: <ol><li> Das Filterpapier mit dem Moskito-Eier ist in einer Plastikschale mit ~ 300 ml destilliertes Wasser gegeben. Eine Prise von Lebensmitteln A ist, um das Fach aufgenommen und Eier dürfen die Larven in den nächsten Tagen schlüpfen. </li></ol> DAYS 5 bis 8: <ol><li> Wachsenden Larven gefüttert werden jeden Tag mit zwei Tabletten von Lebensmitteln C und überwacht für die Dichte und der Bevölkerung. Am achten Tag (5 Tage alte Larven), ist die Larven Bevölkerung von 1-Fach nach ~ 10 Tabletts verdünnt, mit einer Prise von Lebensmitteln A und zwei Tabletten von Lebensmitteln C in den einzelnen Fächern. (~ 30 Min.) </li></ol> DAYS 9 bis 12: <ol><li> Die Larven gefüttert werden jeden Tag mit der Nahrung C. Am 12. Tag (9 Tage alte Larven), wird das Wasser mit frischem Wasser verändert, und das Essen wird hinzugefügt (eine Prise von Lebensmitteln B und zwei Tabletten von Lebensmitteln C). Die Puppen beginnt mit der Entwicklung in diesem Stadium. Die Schalen sind mit Netzen abgedeckt, um zu entkommen der Erwachsenen zu vermeiden. (~ 8-10 Minuten) </li></ol> TAG 13 bis 15: Die Puppen dürfen bei Erwachsenen für die nächsten 2 emerge - 3 Tage. Das Essen ist jeden Tag, um die Larven / Puppen gegeben durch vorsichtiges Entfernen der net zu vermeiden Flucht von Erwachsenen. TAG 16: <ol><li> Die Erwachsenen werden in einem Käfig durch einen Aspirator verbunden Vakuum gesammelt. Der Käfig besteht aus einem kleinen 100 ml Flasche mit einem Baumwollfaden, der mit 10% Saccharose (autoklaviert) und einem Papiertuch Futter auf dem Boden, um mögliche Zucker verschüttet, die während Käfig Handhabung auftreten können, genießen getränkt ist. (~ 30-40 Minuten) </li></ol> TAG 17 bis 21: <ol><li> Die Erwachsenen (Männer und Frauen) werden dann in der Insektarium Zimmer für 4-5 Tage gehalten, gefüttert 10% Saccharose, bevor sie wieder Blut zugeführt werden, um den nächsten Zyklus zu beginnen. Das gleiche Mücken können verwendet werden, um Eier mehr als einmal zu verlegen. </li><li> Die Mücken, die nicht für Experimente oder die Aufzucht benötigt werden kann, indem man den Käfig in ein Gefrierfach getötet werden. Die verwendeten Schalen und Käfige müssen gereinigt und getrocknet werden, bevor sie wieder verwendet werden können. </li></ol> HINWEIS: Es kann einige Variationen in der Mücke Aufzucht-Methode und verschiedene Labore können verschiedene Techniken.

<ol><li>Bangs, M. J., Soelarto, T., Barodji,, Wicaksana, B. P., Boewono, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Colonization+of+Anopheles+maculatus+from+Central+Java%2C+Indonesia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Mosq+Control+Assoc%22%5BJournal%5D)">Colonization of Anopheles maculatus from Central Java, Indonesia.</a> J Am Mosq Control Assoc. 18, 359-363 (2002).</li>
<li>Beier, M. S., Beier, J. C., Merdan, A. A., el Sawaf, B. M., Kadder, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laboratory+rearing+techniques+and+adult+life+table+parameters+for+Anopheles+sergentii+from+Egypt%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Mosq+Control+Assoc%22%5BJournal%5D)">Laboratory rearing techniques and adult life table parameters for Anopheles sergentii from Egypt.</a> J Am Mosq Control Assoc. 266, 266-270 (1987).</li>
<li>Benedict, M. Q. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBenedict%2C+MQ+%22Care+and+maintenance+of+anopheline+mosquitoes%2C+The+molecular+biology+of+disease+vectors%3A+A+methods+manual%22">Care and maintenance of anopheline mosquitoes, The molecular biology of disease vectors: A methods manual</a>. Crampton, J. M., Beard, C. B., Louis, C. , Champman & Hall. London. 3-12 (1997).</li>
<li>Casanges, A. H., Mcgovran, E. R., Chiles, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rearing+of+Anopheles+quadrimaculatus+Say+and+Aedes+aegypti+%28L.%29+in+the+laboratory%5BTitle%5D)+AND+%22Mosq+News%22%5BJournal%5D)">Rearing of Anopheles quadrimaculatus Say and Aedes aegypti (L.) in the laboratory.</a> Mosq News. 9, 112-117 (1949).</li>
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<li>Nasirian, H., Ladonni, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Artificial+bloodfeeding+of+Anopheles+stephensi+on+a+membrane+apparatus+with+human+whole+blood%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Mosq+Control+Assoc%22%5BJournal%5D)">Artificial bloodfeeding of Anopheles stephensi on a membrane apparatus with human whole blood.</a> J Am Mosq Control Assoc. 22, 54-56 (2006).</li>
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<li>Stobart, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+affecting+the+control+of+body+volume+in+the+larvae+of+the+mosquitoes+Aedes+aegypti+and+Aedes+detritus%5BTitle%5D)+AND+%22Edw.+J.+Exp.+Boil%22%5BJournal%5D)">Factors affecting the control of body volume in the larvae of the mosquitoes Aedes aegypti and Aedes detritus.</a> Edw. J. Exp. Boil. 54, 67-82 (1971).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Lebensmittel A</td><td></td><td>Aquaricare</td><td></td><td>Fein gemahlenes Fischfutter. Eine kleine Prise muss hinzugefügt werden.</td></tr><tr><td>Lebensmittel B</td><td></td><td>Purina</td><td></td><td>Fein gemahlenes Katzenfutter. Eine kleine Prise muss hinzugefügt werden.</td></tr><tr><td>Lebensmittel C</td><td></td><td>Purina</td><td></td><td>Katzenfutter. Zwei Tabletten müssen hinzugefügt werden.</td></tr><tr><td>RBC</td><td></td><td></td><td></td><td>hergestellte rote Blutkörperchen: 40 % Hämatokrit in humanem Serum</td></tr><tr><td>RPMI</td><td>Medium</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CPD</td><td></td><td></td><td></td><td>Antikoagulans</td></tr><tr><td>Serum</td><td></td><td></td><td></td><td>O+ humanes Serum</td></tr><tr><td>Mückenfütterungsapparatur</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anopheles gambiae</td><td></td><td></td><td></td><td>Mücken</td></tr><tr><td>10 % Saccharose</td><td></td><td></td><td></td><td>Mückenfutter</td></tr><tr><td>Insektarium</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

protokoll für mosquito aufzucht (a. gambiae)

Protocol for Mosquito Rearing (A. gambiae)

Dieses Protokoll beschreibt Mücke Aufzucht im Insektarium. Das Insektarium Zimmer sind bei 28 ° C und ca. 80% Luftfeuchtigkeit, mit einem 12-Std. Tag / Nacht-Zyklus. Für dieses Verfahren benötigen Sie Moskito-Käfige, 10% sterile Saccharose-Lösung, Papierhandtücher, Becher, Whatman-Filterpapier, Glas Speiser, menschlichem Blut und Serum, Wasserbad, Parafilm, destilliertes Wasser, saubere Kunststoff-Trays, Moskito Essen (beschrieben unten), Moskitonetz, um die Fächer, Vakuum, und eine Sammlung Kammerdeckel zu Erwachsenen zu sammeln.

Dieses Video zeigt den allgemeinen Techniken verwendet, um hinten Anopheles gambiae im Labor. Die Methoden für die Pflege Labor Mücken sind in allen Phasen des Organismus Lebenszyklus von Larven zu Blut-Fütterung Erwachsene Puppen gezeigt.

Protokoll für Mosquito Aufzucht (A. gambiae)

Dieses Protokoll beschreibt die Mückenaufzucht im Insektarium. Die Räume des Insektariums werden bei 28 °C und ~80 % Luftfeuchtigkeit mit einem 12-stündigen Tag-Nacht-Rhythmus ...

Mein Name ist Shish und ich bin Postdoktorand im Labor von Dr. George OU an der John Hopkins School of Public Health, Abteilung für Molekulare Mikrobiologie und Immunologie. Ich werde zeigen, wie man die Mücke *Anopheles gambiae* im Labor hält. Wir pflegen sie im Insektarium, das üblicherweise bei 27 Grad Celsius und einer Luftfeuchtigkeit von 80 % gehalten wird.Der Insektenzuchtraum wird ebenfalls in einem 12-Stunden-Tag-Nacht-Zyklus gehalten, um die natürlichen Bedingungen nachzuahmen. Dies ist der Insektenzuchtraum, den wir hier als zentrale Einrichtung betreiben, um diese Insekten zu pflegen. Wie Sie sehen können, enthalten alle verschiedenen Schalen Mücken in allen Entwicklungsstadien – Eiern, den verschiedenen Larvenstadien und den Puppen.Diese Tabletts enthalten Larven, die etwa 11 oder 12 Tage alt sind, und dies ist ein Käfig, in dem wir die erwachsenen Mücken sammeln und in einer 10%igen Saccharoslösung halten. Um die Mückenhaltung zu beginnen, müssen wir die Mücken mit Blut füttern, da die Mücken das Protein des Blutes benötigen, um Eier abzulegen. Der erste Tag ist also der Tag nachdem die erwachsenen Mücken in einem Käfig gesammelt und in 10%iger Saccharose gehalten wur

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Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

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Genetische Kreuzungen Nagetier Malaria-Parasiten werden durch Zuführen von zwei genetisch verschiedene Parasiten Mücken durchgeführt. Rekombinante Nachkommen sind von der Maus Blut nach Abzug Mücken infizierten Mäuse beißen geklont. Dieses Video zeigt, wie genetische Kreuzungen...

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Aedes Aegypti Moskitos mit Wolbachia infiziert werden in natürlichen Populationen zu unterdrücken, die Übertragung von Arboviren freigesetzt. Wir beschreiben Methoden nach hinten Ae. Aegypti mit Wolbachia Infektionen im Labor für Experimente und Feld Freigabe, Vorsichtsmaßnahmen zum Labor Anpassung und Auswahl zu minimieren.

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Einsatz des GAL4-UAS-Systems für die funktionelle Genetik bei Anopheles gambiae

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Vorbereitung bestrahlter und markierter männlicher Aedes aegypti-Moskitos für die Freisetzung in einem operationellen sterilen Insektentechnikprogramm

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Lernen Sie die Laboraufzucht von Anopheles gambiae mit kontrollierten Bedingungen bei 27°C und 80% Luftfeuchtigkeit. Diese Methode ermöglicht Malaria-Vektorforschung durch alle Lebensstadien.

Protokoll für Mosquito Aufzucht (A. gambiae)

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