Colon ascendens Stent Peritonitis (CASP) - ein standardisiertes Modell für polymikrobiellen Abdominal Sepsis

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, eine abdominale Sepsis zu erzeugen, indem ein Stent in den aufsteigenden Dickdarm einer Maus eingebracht wird. Dies wird erreicht, indem zunächst der aufsteigende Dickdarm präpariert wird. Anschließend wird eine angepasste Kanüle in den Dickdarm eingeführt und dort fixiert.

Schließlich wird der Stent entfernt und der Kolon zurück in die Bauchhöhle platziert. Letztendlich können Ergebnisse erzielt werden, die eine Sepsis durch Messung von Zytokinen und Bakterienzahlen im Plasma zeigen. Der Hauptvorteil dieser Technik gegenüber bestehenden Methoden wie der Sichelresektion und Punktion besteht darin, dass die Sepsis und Mortalität durch die Größe des eingesetzten Stents dosiert werden können.

Allgemein gilt, dass Personen, die neu in dieser Methode sind, Schwierigkeiten haben könnten, da mikrochirurgische Techniken etwas Übung erfordern. Bevor eine perfekte Durchführung möglich ist, beginnen Sie mit der Anästhesie der Maus durch eine intraperitoneale Injektion von Narkotikumflüssigkeit und positionieren das Tier in Rückenlage. Die Füße der Maus müssen mit Klebeband an der Platte fixiert werden, um eine stabile Position des Tieres während der Operation zu gewährleisten.

Passt eine intravenöse Kanüle, die üblicherweise für intravenöse Injektionen beim Menschen verwendet wird, an und schneidet ihre Kunststoffschläuche zu. Desinfiziert die Bauchhaut der Maus gründlich und führt einen kreisförmigen Schnitt etwa zwei Millimeter vom Ende entfernt sowie entlang der Mittellinie ungefähr 15 Millimeter lang durch. Öffnet die Bauchhöhle, indem ihr die Bauchmuskulatur und das Peritoneum entlang der Linea alba einschneidet.

Identifizieren Sie die Anschlussstelle und verwenden Sie Wattestäbchen, um das Ende des terminalen Ileums und des aufsteigenden Kolons vorsichtig aus der Bauchhöhle herauszuziehen. 15 Millimeter distal zur Ileozökalklappe durchstechen Sie die Wand des aufsteigenden Kolons mit einer 7-0-Naht. Befestigen Sie die Naht mit zwei chirurgischen Knoten an der Kolonwand.

Stechen Sie mit einer vorbereiteten Kanüle in den aufsteigenden Dickdarm. Ein bis zwei Millimeter proximal von der siebten Naht. Führen Sie die Kanüle vorsichtig in den Dickdarm ein, bis die Furche und das Plastikröhrchen auf gleicher Höhe mit dem Zirr liegen.

Führen Sie die freien Enden der 7-0-Naht um die Kanüle und legen Sie eine doppelte Schlinge exakt in die vorbereitete Rille des Plastikrohrs. Nehmen Sie die Nadel der 7-0-Naht und führen Sie sie nacheinander durch die antimesenteriale Wand des Kolons. Führen Sie zwei chirurgische Knoten aus, um das Plastikrohr zusätzlich mit der Kolonwand zu fixieren.

Schneiden Sie die Nahtenden ab. Ziehen Sie das Metallteil der Kanüle leicht zurück und schneiden Sie das Plastikröhrchen dicht an der Fixiernaht mit der Stärke 7,0 ab. Massieren Sie nun vorsichtig mit Wattestäbchen Stuhl aus dem Blinddarm in Richtung Kolonstent, bis eine kleine Spitze von Stuhl auf der Oberseite des Stents erscheint.

Legen Sie den Darm zurück in den Peritonealraum und führen Sie eine Flüssigkeitsersatztherapie durch intraperitoneale Gabe von 0,5 Millilitern Kochsalzlösung durch. Verschließen Sie das Peritoneum mit einer kontinuierlichen Naht. Verschließen Sie die Haut mit Einzel-nähten zur Schmerzlinderung.

Gegebenenfalls sollte die subkutane Verabreichung eines starken analgetischen Wirkstoffs wie Buprenorphin erfolgen; das Tier anschließend in seinen Käfig zurückbringen, der Futter und Wasser enthalten muss. Fünf Stunden nach casp das Tier erneut präparieren und anästhesieren, um den operativen Eingriff am Tier durchzuführen. Die Nähte der Bauchwand öffnen.

Ziehen Sie den aufsteigenden Dickdarm mit dem eingesetzten Stent vorsichtig heraus, schneiden Sie die Nähte durch, die den Stent fixieren, und entfernen Sie den Stent. Verschließen Sie den Defekt im Dickdarm mit einzelnen umstülpenden Nähten. Legen Sie den Darm zurück in die Bauchhöhle und spülen Sie die Bauchhöhle zweimal mit je fünf Milliliter Kochsalzlösung aus.

Schließen Sie das Peritoneum mit einer kontinuierlichen Naht. Verschließen Sie die Haut mit Einzelnahten zur Analgesie. Führen Sie regelmäßig die subkutane Verabreichung eines starken analgetischen Wirkstoffs durch.

Stellen Sie das Tier innerhalb der ersten beiden Tage nach der Operation zurück in seinen Käfig mit ausreichend Futter und Wasser. Überwachen Sie die Tiere alle sechs Stunden in den ersten Stunden nach der CASP-Operation; die Tiere zeigen klinische Anzeichen einer beginnenden Sepsis. Die Überlebensraten nach der CASP-Operation hängen vom Durchmesser des eingesetzten Stents ab. Eine CASP mit 14 Gauge führt zu einer Letalität von 100 %, eine CASP mit 16 Gauge zu einer Letalität von 70 % und eine CASP mit 18 Gauge zu einer Letalität von 50 %.

Sham-CASP ist mit einer Überlebensrate von 100 % verbunden. Das Ergebnis einer CASP hängt von der Zeitspanne ab. Nach der CASP führt die Entfernung des Stents drei Stunden nach CSP zu einer Überlebensrate von 45 %. Wird der Stent fünf Stunden nach CSP entfernt, überleben nur 10 % der Tiere das Verfahren. Eine Stententfernung nach neun Stunden führt zu einer Letalität von 100 %. Sham-CASP führt zu einer Überlebensrate von 100 %.

Die makroskopische Untersuchung der Bauchhöhle 24 Stunden nach CSP zeigt typische Anzeichen einer Peritonitis, Ödeme, Vasodilatation, Arithmie, scharfe Abgrenzung von nekrotischen Herden an der Darmwand, Darmparese, freie Flüssigkeit und septische Sekrete. Die systemische Infektion kann mittels bakteriologischer Analyse 12 Stunden nach CSP nachgewiesen werden. Massive Bakterienmengen können in der Peritonealspülflüssigkeit, im Blut, in Leber, Lunge, Milz und Nieren detektiert werden.

Die durch CSP induzierte Sepsis äußert sich in einer lokalen und auch systemischen Freisetzung pro- und antiinflammatorischer Zytokine und Chemokine. 12 Stunden nach CSP können signifikante Mengen von TNF-α, IL-1β, IL-6, IL-10, MCP-1 und anderen mittels ELISA im Blut, aber auch in Überständen von Organsuspensionen wie Leber, Lunge, Milz und Niere gemessen werden. Wenn die Technik einmal beherrscht ist, kann sie bei korrekter Durchführung innerhalb von 10 Minuten durchgeführt werden.

Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie man eine abdominale Sepsis mit den Modellen SSP und SSP mit Intervention erzeugt. Das war's. Vielen Dank fürs Zuschauen und viel Erfolg bei Ihren Experimenten.