Name: Physiologische Aufnahmen von High-und Low Output NMJs auf der Crayfish Leg Streckmuskel (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-11-17T17:00:00.000+00:00
Duration: 10 min
Description: Erfahren Sie elektrophysiologische Aufnahmen von synaptischen Antworten am Streckmuskel des Krebsbeins. Diese Methode ermöglicht die Unterscheidung phasischer und tonischer motorischer Nervenendigungen durch Färbung und intrazelluläre Ableitungen.

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Wir danken Herrn Craig D. Slaven (Department of English, University of Kentucky) für die redaktionelle Unterstützung. Unterstützt von der University of Kentucky, Department of Biology, Office of Undergraduate Studies and College of Arts &amp; Sciences.

1) Einführung Motor Neurone mit einer Muskelfaser an Synapsen, die gemeinsam als neuromuskulären Synapse (NMJ) bezeichnet kommunizieren. NMJs kann leicht in den meisten Krebse Muskel Vorbereitungen zugegriffen werden. Viele der Krebse NMJs demonstrieren nicht spiking exzitatorischen postsynaptischen Potentiale (EPSP) ähnlich wie die abgestufte elektrische Signale in postsynaptischen Dendriten innerhalb der Säuger-ZNS-oder unterschwelligen Reaktionen in Vertebraten NMJs angemerkt erzeugt (Wiersma &amp; Van Harreveld, 1938; Katz &amp; Kuffler, 1946) . Die Krebse NMJs kann als grundlegende synaptischen Modelle dienen dazu, allgemeine Einsichten in die synaptische Übertragung und synaptischen Differenzierung. Im Allgemeinen regeln motorischen Einheiten Aspekte des Verhaltens von Tieren über die Art der synaptischen Kommunikation NMJs und Eigenschaften der Muskeln. Seit der ersten Beobachtung von "schnell" und "langsame" Muskelkontraktionen in Krabben und Krebse näher Muskel (Lucas, 1907, 1917), hat ähnliche muskuläre Kontraktion Differenzierung in andere Krebse Muskel-Typen wie Bauch-Beuger (Kennedy &amp; Takeda, 1965a beschrieben worden , b) Leib und Strecker (Van Harreveld &amp; Wiersma, 1936). "Fast" Wehen einleiten schnellen Antworten. Zum Beispiel ist die Krebse Schwanz Flip eine schnelle Verhalten. "Slow" Kontraktionen zu erhalten langsamen Bewegungen und zur Erhaltung der Haltung (Bradacs et al., 1997). Entsprechend "schnell" und "langsame" Muskelkontraktionen, "phasischen / high output" und "tonisch / low output" werden allgemein die motorischen Neuronen zu beschreiben. Der Unterschied in der Geschwindigkeit und der Zeitpunkt der Muskelkontraktion ist zum Teil im Zusammenhang mit präsynaptischen Unterschiede in der synaptischen Struktur und synaptischen Stärke (King et al., 1996). Myofibrilläre Protein-Isoform-Expression ist auch in kontraktilen Unterschiede wichtig, aber in Vorbereitung wie die des Beines Streckmuskel, in dem eine bestimmte Faser, die durch beide Arten von Motoneuronen innerviert ist, liegt der Fokus auf die synaptische Unterschiede der Terminals, da die Terminals Aktien die gleiche Zielzelle (Mykles et al., 2002). Eine frühere Studie untersuchten die beiden erregenden motorischen Axone des Beines extensor und beschrieb die phasischen und tonischen Phänotypen (Bradacs et al., 1997). In diesem Bericht zeigen wir, wie man die Zerlegung durchführen und erhalten Aufnahmen, so dass andere weiter zu untersuchen, können die Eigenschaften der synaptischen Differenzierung dieser Nervenendigungen. Betrachtet mit Transmissions-Elektronenmikroskopie, verschiedene Reihe von Abschnitten aus der tonische und phasische Terminals auf Krebse Bein Streckmuskel erhalten ergaben, dass Tonic Terminals mehr RRP Vesikel als phasische Terminals enthalten, die Mitochondrien sind häufiger in tonische Neuronen und Synapsen auf phasische Terminals sind komplexer als die der Low-Output-Synapsen, da sie enthalten mehrere aktive Zonen mit unterschiedlichen Abständen (Miller et al, 2002; Johnstone et al, 2008;. King et al, 1996;.. Bradacs et al, 1997). Die Low-Output-Tonic-Terminals sind auch anfälliger für die Verbesserung der synaptischen Übertragung mit dem Neuromodulator Serotonin (5-HT) als die phasischen Terminals (Cooper et al., 2003). Die Tatsache, dass die tonische und phasische NMJ auf dem gleichen Muskelfasern sind erleichtert präsynaptischen Unterschiede auf einer bestimmten Muskelfaser zu bewerten und zu Fragen der Muskelermüdung, synaptische Depression und synaptische Übersprechen Adresse. Verschiedene Fragen müssen noch in diesem Präparat behandelt werden, wie zum Beispiel, ob es Unterschiede in der postsynaptischen Rezeptor-Dichte und Glutamat-Rezeptor-Subtypen in postsynaptischen Ziele für die tonische und phasische Terminals, sondern ein besseres Verständnis der grundlegenden Unterschiede in der Anatomie und Physiologie dieser zwei Motor-Einheiten werden in den Aufbau einer tieferen Wissensbasis zu unterstützen. Die Hoffnung ist, dass die grundlegenden Prinzipien in dieser synaptischen Vorbereitung gelernt werden auf andere Synapsen in verschiedenen Zubereitungen und zukünftige Untersuchungen in diesem synaptischen Modell des Krebses zu erhöhen. 2) Die Methoden <ol><li> Alle Experimente werden auf der ersten oder zweiten Laufbeinen mittelständischer Krebse (Procambarus clarkii) durchgeführt. Die Tiere werden einzeln in Kunststoff-Behälter mit oxygenized Wasser untergebracht. Die Temperatur des Tieres Zimmer liegt im Bereich von 13 ° C-16 ° C. Die Tiere sind mit einem trockenen Fischfutter und das Wasser auf einer wöchentlichen Basis geändert zugeführt. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig1.jpg" alt="Abbildung 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 1"> Abbildung 1: Schematische Darstellung eines Krebse Fuß Bein und den sechs distalen Segmente. </li><li> Der distale Aspekt der Fuß Bein in einem Flusskrebs ist anatomisch in sechs Segmente (Abbildung 1) eingeteilt. Das Bein extensor ist in der meropodite befindet, und das Nervenbündel, das isoliert sein wird, ist in der Nähe des meropodite ischiopodite Gelenk. Das Tonikum oder phasische Axon kann be selektiv stimuliert wie für physiologische Zwecke benötigt, nachdem sie ausgesetzt sind. </li><li> Cooper und Cooper (2009) beschrieb einige Aspekte der ersten Sektion, einschließlich der Methoden für das Freilegen der Erreger des Openers Motoneuronen im meropodite Region, aber ihre Beschreibung nicht die Sorge für den Schutz der Extensoren von Schäden erforderlich ist, wie es war nicht erforderlich, um den Opener Muskel-Präparat Adresse. Um die extensor zu schützen, ist die erste oder zweite Fuß Bein von der Krebse entfernt, Mess 6-10 cm Körperlänge (Atchafalaya Biological Supply Co., Raceland, LA), durch die Induktion des Tieres auf die Gliedmaßen mit kräftigen Kneifen automatisieren distal der Bruchfläche in der ischiopodite Segment. Das Bein wird auf die Präparation Platte mit den seitlichen (Außenseite) dem Betrachter zugewandt platziert. Das Bein ist rund, bis der Betrachter sicher sein können, nach außen (lateral) Seite nach oben auf die Zerlegung Platte, in der Regel mit der gewölbten Seite nach oben (Abbildung 2) eingeschaltet. Aufstellen des Beins auf einem Stück Seidenpapier erleichtert die Vorbereitung wiederum während Sie diese Kürzungen. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig2.jpg" alt="Abbildung 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 2"> Abbildung 2: Die Außenseite des meropodite, in der Regel die Seite, ist gewölbt, nach oben auf die Zerlegung Platte .. </li><li> Mit einem Skalpell Leistungsschalter und Halter, ist eine scharfe Rasierklinge zu ätzen die Kutikula bis kurz Durchtrennen in das Muster in Abbildung 3 für die meropodite Segment ausgewiesen werden. Es wird darauf geachtet, nicht zu weit distal an der dorsalen Schnitt nach ventral Schnitt durch die meropodite-carpopodite Gelenk. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig3.jpg" alt="Abbildung 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 3"> Abbildung 3: Die meropodite Segment mit Zeilen wie eine vorgeschlagene Muster für das Ätzen aus dem Fenster der Nagelhaut. Die Zubereitung ist in Kochsalzlösung gelegt. Die Dissektion Gericht sollte eine Sylgard (Dow Corning)-Beschichtung auf der Unterseite (1 cm dick). Die Sylgard so verwendet wird, das Insekt Stifte in kann für die Abhaltung der Vorbereitung noch beklebt werden. An dieser Stelle ist ein Stift in der Mitte des carpopodite Segment und in der Dorsalseite des ischiopodite Segment (Abbildung 4) stecken. Dissected Vorbereitungen sind in Standard-Krebse Kochsalzlösung getaucht, modifiziert nach Van Harreveld s Lösung (1936), die mit 205 NaCl hergestellt wird; 5.3KCl; 13,5 CaCl 2; 2H 2 O, 2,45 MgCl 2; 6 H 2 O, 5 HEPES und angepasst pH 7,4 (in mm). <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig4.jpg" alt="Abbildung 4" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 4"> Abbildung 4: Die meropodite Segment mit geschnittenen Fenster abgehoben wird. Beachten Sie die Lage der Dissektion Pins. </li><li> Die Nagelhaut wird sanft in den distalen Bereich angehoben und die Muskelfasern sind weg von der Nagelhaut, indem sie Schläge auf der Basis des Hosenbein. Die Nagelhaut kann abgehoben werden. </li><li> Die apodeme (Sehne) am meropodite-carpopodite gemeinsame geschnitten. Ein Stift ist an der inneren Oberfläche der Beugesehne, um zu zeigen, wo der Schnitt gemacht (Abbildung 5) platziert werden. Die Sehne wird dann gekniffen, wo sie mit einer Pinzette und die Beugemuskeln zog, indem Sie ihn in einem kaudal (Abbildung 6), Freilegung der Hauptlauf Nerven und die Extensoren geschnitten wurde. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig5.jpg" alt="Abbildung 5" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 5"> Abbildung 5: Die apodeme der Beugemuskeln ist, durch Verschieben der flexor mit einem Stift markiert. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig6.jpg" alt="Abbildung 6" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 6"> Abbildung 6: Die apodeme der Beugemuskeln abgeschnitten und entfernt mit Vorsicht, da nicht der Hauptlauf Nervenschäden. </li><li> Der Hauptlauf Nerv an der meropodite-carpopodite gemeinsame geschnitten und sorgfältig wieder über die Extensoren gezogen. Die mediale Fläche des Muskels wird in dieser Studie verwendet. Die Trennung der Nerven auf die Extensoren von den Hauptlauf Nerv kann durch leichtes Ziehen am distalen Stumpf der Hauptlauf Nerven an der Seite des Präparats erhöht werden. Beim Schälen der Hauptlauf Nerven wieder über die Extensoren, können kleine Äste von Axon müssen geschnitten werden. Diese sind Zweige von den hemmenden motorischen Neurons auf die Extensoren. Die größeren Bündel abzweigt aus dem Hauptlauf Nerven in der Nähe des proximalen Endes des meropodite ist das kleine Nervenbündel von Interesse. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig7.jpg" alt="Abbildung 7" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 7"> Abbildung 7: Der Hauptlauf Nerv geschnitten und wieder in eine proximale Richtung gezogen. Das Nervenbündel mit Methylenblau-Färbung (Abb. 8) oder mit gesehen werden 4-Di-2-ASP Fluoreszenzfarbstoff (Abbildung 9). <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig8.jpg" alt="Abbildung 8" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 8"> Abbildung 8: Die Extensoren mit Methylenblau gefärbt. Beachten Sie das Axon verzweigt und diezwei leicht sichtbar Axone im Nerv. Rote Pfeile demark den Nerv zu verfolgen. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig9.jpg" alt="Abbildung 9" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 9"> Abbildung 9: Die Axone der motorischen Nerven gefärbt mit 4-Di-2-ASP. Das Tonikum Axon ist strahlend sichtbar aufgrund der erhöhten mitochondrialen Inhalt. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig10a.jpg" alt="Abbildung 10A" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 10A"> Abbildung 10A: Individual-Terminals der phasischen und tonischen Neuronen mit 4-Di-2-ASP gefärbt. Notieren Sie sich die Krampfadern auf der Tonika-Terminals und die dünne Beschaffenheit der phasischen Terminals. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig10b.jpg" alt="Abbildung 10B" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 10B"> Abbildung 10B-Tonic beachten <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig10c.jpg" alt="Abbildung 10C" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 10C"> Abbildung 10C-Phasische beachten </li></ol> 3) Physiologische Profile <ol><li> Zur Wahrung der exzitatorischen postsynaptischen Potentiale (EPSPs) der Tonika oder phasische Neuronen, ist einer der isolierten Axone im Nerven-Bündel durch eine Saug-Elektrode (Abbildung 11) verbunden mit einem Grass-Stimulator stimuliert, während intrazellulären Potentiale im Muskel überwacht werden (Johnstone et al., 2008). Stimulation bei 70 Hz ist die Tonika Axon angewandt, um eine erleichterte Reaktion für die geringe Leistung NMJs zu fördern, oder ein einzelner Impuls (1 Hz) ist die phasische Axon angewendet, um große EPSPs der hohe Leistung zu erhalten NMJs wie gezeigt in Abbildung 12. Die EPSPs werden an einen Computer über ein PowerLab/4s Schnittstelle aufgezeichnet. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig11.jpg" alt="Abbildung 11" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 11"> Abbildung 11: Stimulationselektrode über ein einzelnes Axon innerhalb der Nerven-Bündel gelegt. Beachten Sie die grüne Linie, in der die 2 wichtigsten Axone. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig12.jpg" alt="Abbildung 12" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 12"> Abbildung 12: postsynaptischen Potentiale (EPSPs) der Tonika oder phasische Neurone durch intrazelluläre Ableitungen erhalten. </li><li> Untersuchung in der Natur der synaptischen Erleichterung und synaptische Depression kann durch verschiedene experimentelle Paradigmen mit dem Low-und High-Ausgang NMJs angefahren werden. Erleichterung der geringen Leistung NMJs hängt von der Frequenz, wie für die 20, 40 und 60 Hz Impulsen von etwa 20 Reize (Abbildung 13) dargestellt. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig13.jpg" alt="Abbildung 13" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 13"> Abbildung 13: EPSPs in Reaktion auf einen Zug von Stimulationsimpulsen bei drei verschiedenen Frequenzen 20, 40 und 60 Hz in normalen Krebse Kochsalzlösung verabreicht. </li><li> Die Rate der synaptische Depression auf die Frequenz der Stimulation ist auch die hohe Leistung NMJs verwandt. Abbildung 14 zeigt einen kontinuierlichen 5 Hz Stimulation Drücken der NMJ über 30 min. Bei höheren Stimulationsfrequenz, wird die Vorbereitung schneller drücken (Bradacs et al., 1997). <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig14.jpg" alt="Abbildung 14" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 14"> Abbildung 14: EPSP Amplitude der phasischen Reaktion während 5 Hz Stimulation Depressionen auslösen. </li></ol> 4) quantal Responses <ol><li> Ein Verfahren ähnlich wie bei dem Opener Muskeln des Krebses (Cooper und Cooper, 2009) beschrieben wird, in dieser Zubereitung verwendet. Die quantal EPSPs direkt über identifizierbare Regionen der Nervenendigung werden, indem das Lumen eines Makro-patch Aufnahme Elektrode auf die synaptische Krampfadern aufgezeichnet visualisiert mit den vitalen Farbstoff 4-Di-2-Asp (5 uM, 5-min-Behandlung, Cooper et al, 1995;. Magrassi et al, 1987).. Die spontane sowie evozierte quantal Antworten können entlang der Nervenendigungen aufgenommen werden. Die evozierte und spontane synaptische Potentiale sind mit der Makro-Patch-Elektrode (Dudel, 1981; Wojtowicz et al, 1991;. Mallart, 1993) erfasst. Kimax Glas (Außendurchmesser: 1,5 mm) gezogen wurde und Feuer-poliert, um Patch-Tipps mit Innen-Durchmessern von 10 bis 20 um (Abbildung 15) zu produzieren. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig15.jpg" alt="Abbildung 15" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 15"> Abbildung 15: Das Lumen eines Makro-patch Aufnahme Elektrode .. Das Lumen der Elektrode ist mit dem Bade Medium gefüllt ist. Der Verstärker ist die gleiche wie die für die intrazelluläre Aufnahme oben genannten verwendet. Elektrode und Dichtung Widerstand kann durch das Bestehen der Prüfung Stromimpulse durch die Elektrode bestimmt werden. In unseren Experimenten lagen Abdichtwiderstande 0,3 bis 1,0 MOhm und die Elektrode Widerstand reichte von 0,5 bis 1,0 MOhm. Seal Widerstand kann während der Aufnahme kontrolliert werden. </li><li> Direkte Zählung der quantal Ereignisse mit geringer Stimulation Frequenzen möglich. Für jede evozierte, kann die Anzahl der quantal Ereignisse ohne weiteres für die geringe Ausgangsklemmen bestimmt werden (Figure 16). Diese direkten zählt helfen Schätzung der mittleren quantal Inhalt (Del Castillo &amp; Katz, 1954;. Cooper et al, 1995). Da die evozierten hohe Leistung NMJs multi-quantal evozierten Ereignisse, die mittlere Amplitude oder Gebiet der Ausschläge, zusammen mit der durchschnittlichen Amplitude oder Gebiet der spontanen Ereignisse zu produzieren, kann die Angleichung der mittleren quantal Inhalt (Cooper et al verwendet werden., 1995). <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig16.jpg" alt="Abbildung 16" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 16"> Abbildung 16 Focal Spuren von einer phasischen und tonischen NMJ aufgezeichnet. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig17.jpg" alt="Abbildung 17" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 17"> Abbildung 17 </li></ol>

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L. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inverse+relationship+between+release+probability+and+readily+releasable+vesicles+in+depressing+and+facilitating+synapses.">Inverse relationship between release probability and readily releasable vesicles in depressing and facilitating synapses.</a> J. Neurosci. 22, 9661-9667 (2002).</li><li>Millar, A. G., Zucker, R. S., Ellis-Davies, C. G., Charlton, M. P., Atwood, H. L. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+sensitivity+of+neurotransmitter+release+differs+at+phasic+and+tonic+synapses.">Calcium sensitivity of neurotransmitter release differs at phasic and tonic synapses.</a> J. Neurosci. 25, 3113-3125 (2005).</li><li>Msghina, M., Govind, C. K., Atwood, H. L. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+structure+and+transmitter+release+in+crustacean+phasic+and+tonic+motor+neurons.">Synaptic structure and transmitter release in crustacean phasic and tonic motor neurons.</a> J. Neurosci. 18, 1374-1382 (1998).</li><li>Msghina, M., Millar, A. G., Charlton, M. P., Govind, C. K., Atwood, H. L. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+entry+related+to+active+zones+and+differences+in+transmitter+release+at+phasic+and+tonic+synapses.">Calcium entry related to active zones and differences in transmitter release at phasic and tonic synapses.</a> J. Neurosci. 19, 8419-8434 (1999).</li><li>Mykles, D. L., Medler, S. A., Koenders, A., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myofibrillar+protein+isoform+expression+is+correlated+with+synaptic+efficacy+in+slow+fibres+of+the+claw+and+leg+opener+muscles+of+crayfish+and.">Myofibrillar protein isoform expression is correlated with synaptic efficacy in slow fibres of the claw and leg opener muscles of crayfish and.</a> 205 (4), 513-522 (2002).</li><li>Sparks, G., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=5-HT+offsets+homeostasis+of+synaptic+transmission+during+short-term+facilitation.">5-HT offsets homeostasis of synaptic transmission during short-term facilitation.</a> J. Applied Physiol. 96, 1681-1690 (2004).</li><li>Sohn, J., Mykles, D. L., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+anatomical,+physiological+and+biochemical+characterization+of+muscles+associated+with+the+articulating+membrane+in+the+dorsal+surface+of+the+crayfish+abdomen.">The anatomical, physiological and biochemical characterization of muscles associated with the articulating membrane in the dorsal surface of the crayfish abdomen.</a> J. Exp. Zool. 287, 353-377 (2004).</li><li>Tsien, R. W., Harata, N. C., Choi, S. W. P. y. l. e., Aravanis, A. M., AM, G. C. h. e. n. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vesicles,+quanta+and+synaptic+plasticity.+Molecular+Mechanisms+of+synaptic+function.">Vesicles, quanta and synaptic plasticity. 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G., Van Harreveld, A. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influence+of+the+frequency+of+stimulation+on+the+slow+and+fast+contraction+in+crustacean+muscle.">The influence of the frequency of stimulation on the slow and fast contraction in crustacean muscle.</a> Physiol. Zool. 11, 75-81 (1938).</li><li>Wojtowicz, J. M., Smith, B. R., Atwood, H. L. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activity-dependent+recruitment+of+silent+synapses.">Activity-dependent recruitment of silent synapses.</a> Ann. N.Y. Acad. Sci. 627, 169-179 (1991).</li></ol>

Wir haben in diesem Bericht gezeigt, wie zu sezieren, aufzuzeichnen und zu quantifizieren synaptischen Antworten in einer einzigartigen Krebse neuromuskuläre Vorbereitung, in denen beide High-und Low-Ausgänge innervieren die gleichen Muskelfaser. Die neuromuskuläre Präparate in die Krebse bieten viele Vorteile gegenüber Wirbeltieren neuromuskulären Verbindungen, da nur wenige exzitatorischen Motoneuronen benötigt werden, um einen Muskel innervieren, und da die Neuronen erkennbar von der Vorbereitung bis Vorbereitung (Atwood, 1976). Darüber hinaus ist die erregenden Neurotransmitters Glutamat, und die exzitatorischen postsynaptischen Potentiale (EPSP) werden benotet, daher werden die biophysikalischen Eigenschaften von abgestuften Veranstaltungen analog zu den Dendriten der Neuronen im ZNS der Wirbeltiere. Die quantal Ströme können aber direkt an der postsynaptischen Websites (Cooper et al., 1995) überwacht werden. Repetitive 5 Hz Stimulation der phasischen Nerven führt zu großen EPSPs, die sich stark nach einigen Minuten werden depressiv. Diese Art der Depression ist häufig bei Arthropoden phasischen motorischen Endplatten (Atwood und Cooper, 1996). Die Anwesenheit der Tonika-Terminals neben der phasischen Terminals erlaubt es, festzustellen, ob die postsynaptische Ziel stark während und nach der Depression der phasischen motorischen Neurons verändert. Darüber hinaus bieten die niedrigen Ausgangsklemmen eine schöne Vorbereitung auf die Mechanismen, die synaptischen Erleichterung zugrunde zu untersuchen (Desai-Shah et al, 2008;. Desai-Shah und Cooper, 2009) Die hohe Leistung Terminals bieten einen Spielplatz der Modulation in Höhe von synaptische Depression und die Recovery-Prozess zu untersuchen. Zugänglich und lebensfähigen Präparate sollten bei der Entschlüsselung der Mechanismen, die hinter synaptische Depression zu helfen. In dieser Krebse Bein extensor Vorbereitung ist exogene Applikation von Serotonin ein weiteres Werkzeug zur Wiederherstellung von synaptische Depression und möglicherweise ein Mittel zur Förderung der Erforschung der Mobilisierung der synaptischen Vesikel-Pools zu untersuchen. Dieses Präparat enthält mehrere experimentelle Vorteile, da die einzelnen Muskelfasern von beiden phasischen und tonischen Motoneuronen innerviert. Da Serotonin erhöht die Anzahl der Vesikel, die mit evozierten Stimulation freigesetzt werden, und da es Genesung fördert während der Depression, ist es offensichtlich, dass es einige Modulation der Vesikel-Pools für die Verbesserung der Wahrscheinlichkeit der Fusion mit Serotonin vorhanden ist (Johnstone et al., 2008 ; Logsdon et al, 2006;. Sparks et al, 2004).. Modelle, die die Dynamik der Vesikel-Pools innerhalb der präsynaptischen Nervenendigung erklären während niederfrequente Stimulation, um eine depressive Zustand entgegen, müsste auch unter den verschiedenen experimentellen Protokollen, die möglich sind mit diesem Präparat in Betracht gezogen werden. Es hat in anderen Systemen wurde festgestellt, dass etwa 30% der Vesikel-Pool eine schnelle Wiederverwertung unterzogen wird, während der Rest der Recycling-Vesikel durch einen traditionellen langsamen Recycling Weg gehen durch das endoplasmatische Retikulum (Harata et al, 2001;. Tsien et al. , 2001). Solche Dual-Pfade können auch vorhanden sein in diesem System. Wenn ATP im gedrückten Zustand der präsynaptischen Terminal fehlt, dann An-und Abdocken möglicherweise nicht eintreten, und so viele mehr entladen Vesikel würde bei der synaptischen Oberfläche bleiben. Seit mehr Vesikel schnell freigesetzt werden, wenn die Terminals 5 HT ausgesetzt sind, ist es denkbar, dass mehr in die leicht lösbare Pool (RRV) enthalten sind. Doch im gedrückten Zustand mit reduziertem ATP, kann die An-und Abdocken sogar in Gegenwart von 5-HT, die wieder verlässt entladen Bläschen an der synaptischen Oberfläche blockiert werden. Da die vorläufigen Daten deuten darauf hin, dass mehr Bläschen im Laufe der Zeit sind mit verlängerten 5 HT Belichtung und Stimulation, die Verteilung der Vesikel-Pool von der schnellen und langsamen Recycling Pfade können verzerrt an die zuständigen Vesikel für re-release (von Johnstone et al freigegeben werden. , 2008, siehe Testberichte-Desai-Shah et al, 2008;. Desai-Shah und Cooper, 2009) Mit den Techniken der Schwerpunkt macropatch Aufnahmen von postsynaptischen Ströme und Maßnahmen der einzelnen Quanten aus definierten Regionen des motorischen Nerven Terminal kann man Fragen stellen, um festzustellen, ob synaptische Depression als Folge von weniger Vesikel freigesetzt oder wegen Veränderungen der Funktion auftretenden von postsynaptischen Rezeptoren. Es hat sich gezeigt, dass die Vesikel empfindlicher auf Fusion am phasischen NMJ dieser Zubereitung für eine gleiche Kalzium Exposition sind (Miller et al. 2005), die wahrscheinlich Konten für die höheren quantal Inhalt der phasischen Terminals (Msghina et al bedeuten. , 1998, 1999). Daneben wirken sich Unterschiede in der Calcium-bindende Protein frequenin (Jeromin et al., 1999) und Ultrastruktur (King et al., 1996), um die Differenz synaptischen Wirksamkeit (Cooper beitragenet al., 2003). (.; Cooper et al, 2003. Bradacs et al, 1997) Einige frühere Studien haben die Muskel-Phänotyp der extensor Muskelfasern untersucht. Vergleicht man die Regulierung von Muskel-Differenzierung für rein tonische und phasische Fasertypen in die Krebse auf gemischte Fasertypen, für das Bein extensor dass dumpf innerviert ist wie könnte Hinweise auf Muskel-Phänotyp Expression und Regulation (Laframboise et al, 2000 bereitzustellen;. Sohn et al, 2000;. Griffis et al, 2001;. Mykles et al, 2002).. Viele grundlegende Fragen bleiben in der Neurobiologie angesprochen werden, und das Präparat kann bei der Bewältigung einige von ihnen zu helfen. Ein paar interessante Themen im Bereich heute bekannt, dass mit dem Bein extensor näherte sein könnte: 1) Bestimmung der zellulären Mechanismen, die synaptische Depression im High-Output-Anschlüsse unterliegen (Ist die Depression durch eine Reduktion der Ca2 +-Eintrag, das Fehlen eines kompetenten leicht lösbare Vesikel (RRV) Pool und / oder Veränderungen der postsynaptischen Empfänglichkeit?) 2) Die Bestimmung der mechanistische Rolle von 5-HT, wenn nach der Induktion der synaptischen Depression zu einer schnelleren Genesung und 3 zu fördern angewendet) Feststellung, ob die Formen der quantal Strömungen, die aus anregenden phasischen Terminals entstehen werden während der Induktion von Depressionen bis hin zu Vor-und postsynaptischen Komponenten synaptische Depression Adresse verändert. Diese NMJ ist wichtig, laufende Forschung und zukünftige Forscher, weil es uns ermöglicht, wichtige Informationen, dass die Untergebenen Mechanismen der synaptischen Leistung direkt an der Freisetzung Standorten gemessenen Adressen zu erhalten. Aktuelle Forschung in diesem Bereich ist die Bereitstellung von Informationen über die Modulation der synaptischen Depression, die durch 5-HT und die Dynamik der Vesikel-Pools. Solche Themen beziehen sich auf die wesentlichen Grundlagen der synaptischen Übertragung, die für alle neuronalen Systemen.

<ol><li> Crayfish (Procambarus clarkii). Atchafalaya Biological Supply Co., Raceland, LA., USA. </li><li> Standard-Krebse Kochsalzlösung: <ul><li> Geändert von Van Harreveld-Lösung (1936). (In mm) 205 NaCl, 5,3 KCl, 13,5 CaCl 2 · 2H 2 O, 2,45 MgCl 2 6H 2 O, 5 HEPES und auf pH 7,4 eingestellt </li></ul></li><li> Dissection-Tools: Fine Nr. 5 Pinzette, feine Schere, Messer Messerhalter, # 26002-20 Insektennadeln (alle von Fine Science Tools (USA), Inc., 373-G Vintage Park Drive, Foster City, CA 94404-1139 erhalten) </li><li> Sylgard beschichtet Dissektion Gericht, eine Aufnahme Gericht entweder mit Saug-Elektrode gebaut oder mit einem Saug-Elektrode und Anthere Manipulators mit einer Saug-Elektrode zu halten. </li><li> Präpariermikroskop mit Zoom-Funktion für die intrazelluläre Aufnahme. Für fokale Aufnahme auf visualisiert Terminals ein zusammengesetztes Mikroskop mit aufrechten Ziele (4 x und 20x) verwendet wird. Man braucht eine Hg-Lichtquelle. </li><li> Standard intrazellulären Verstärker und A / D-Karte für Online-Aufzeichnung auf einem Computer. Elektrische Signale werden auf Linie zu einem PowerLab/4s Schnittstelle (ADInstruments, Australien) aufgezeichnet. Wir verwenden Standard-Software von ADInstruments namens Chart-oder Scope. </li><li> Chemicals: <ul><li> Wir verwenden eine wichtige Fluoreszenzfarbstoff, 4 [4 (diethylamino) Styryl] N methylpyridiniumiodid (4 DI 2 Asp; Molecular Probes, Eugene, OR), die Krampfadern (Marigassi et al, 1987 visualisieren;. Cooper et al, 1995a. ). Alle Kochsalzlösung Chemikalien wurden von Sigma Chemical Company (St. Louis, MO) erhalten. </li></ul></li><li> Für intrazelluläre Ableitungen verwenden wir Glaskapillare Schlauch (Katalog # 30-31-0 von FHC, Brunswick, ME, 04011, USA) und für fokale macropatch Elektroden verwenden wir Kimax-51, Kimble Products Kunst. Nr. 34502, ID 0,8-1.1mm, Länge 100mm. Die intrazelluläre Elektrode sollte einen Widerstand von 20 bis 30 mOhm. Die macropatch Elektrode wird durch den Abbruch der Spitze des Glases nach einer feinen Spitze von einer Elektrode Abzieher gemacht wurde gebaut. Die abgebrochene Spitze braucht, um eine saubere senkrecht zu brechen etwa 20 um im Durchmesser. Die Spitze wird dann Wärme poliert, um etwa 10 &amp;mgr; m Innendurchmesser. Der Schaft der Elektrode wird dann über ein Heizelement ausführen, um dazu führen, dass etwa 45 Grad mit einer allmählichen Kurve biegen. Dadurch entsteht eine ebene oder senkrecht Elektrode Lumen über die Nervenendigung als der Winkel mit dem Mikro-Manipulator wird über weitere 45 Grad auf die Vorbereitung zu produzieren. </li></ol>

physiologische aufnahmen von high-und low output nmjs auf der crayfish leg streckmuskel

Physiological Recordings of High and Low Output NMJs on the Crayfish Leg Extensor Muscle

Wir erklären im Detail, wie zu entlarven und zu leiten elektrophysiologischen Ableitungen der synaptischen Antworten für hoch (phasischen) und niedriger (Tonika) Ausgang Motoneuronen innervieren die Extensoren in den Fuß Bein eines Krebse. Deutliche Unterschiede sind in der Physiologie und Morphologie der phasischen und tonischen Nervenendigungen. Das Tonikum Axon enthält viele mehr Mitochondrien, so dass es einen wichtigen stärker als die phasischen Axon Fleck. Das Tonikum Terminals haben Krampfadern, und der phasischen Terminal ist fadenförmig. Das Tonikum-Terminals sind in der synaptischen Effektivität niedrig, aber zeigen dramatische erleichtert Antworten. Im Gegensatz dazu sind die phasischen Terminals in quantal Wirksamkeit hoch, aber zeigen synaptische Depression mit hoher Frequenz Stimulation. Die quantal Ausgang ist mit einer Brennweite macropatch Elektrode direkt über die visualisierte Nervenendigungen platziert gemessen. Beide phasischen und tonischen Terminals innervieren die gleichen Muskelfasern, die inhärenten Unterschiede in den Neuronen, anstatt Differential retrograde Feedback von den Muskeln, Konto für die morphologische und physiologische Differenzierung schlägt.

Dieser Artikel beschreibt, wie elektrophysiologischen Ableitungen der synaptischen Antworten auf die Extensoren Verhalten in den Fuß Bein eines Krebse und wie die Nervenendigungen werden visualisiert, um die Brutto-morphologischen Unterschiede von High-und Low-Output-Nervenendigungen zeigen.

Physiologische Aufnahmen von High-und Low Output NMJs auf der Crayfish Leg Streckmuskel

Wir erläutern im Detail, wie man elektrophysiologische Ableitungen synaptischer Antworten von Motoneuronen mit hoher (phasischer) und niedriger (tonischer) Ausgabeleistung freilegt und durchführt ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, aufzuzeigen, wie phasische und tonische motorische Endigungen mittels morphologischer Färbung und elektrophysiologischer Ableitung im Extensormuskel der Krebsschere exponiert und unterschieden werden können. Dies wird erreicht, indem zunächst das erste oder zweite Laufbein eines mittelgroßen Krebses abgeknipst, das Cuticula herausgeschnitten und der Flexormuskel im Meitenabschnitt entfernt wird. Dadurch werden der Extensormuskel und das Nervenbündel freigelegt.Der zweite Schritt des Verfahrens besteht darin, die Präparation mit vier ethylamino-sterilen und Methylperitoneumjodid oder vier D zwei Asp zu färben, um die Axone und Nervenendigungen sichtbar zu machen. Der dritte Schritt des Verfahrens ist die selektive Stimulation tonischer und/oder phasischer Neuronen und gleichzeitige intrazelluläre Ableitung evozierter EPSPs in der Muskelzelle. Der letzte Schritt des Verfahrens besteht darin, mit einer fokalen Elektrode spontane und evozierte Qu-Ereignisse aus den Endigungen aufzuzeichnen.Schließlich können Ergebnisse erzielt werden, die tonische und phasische Endigungen morphologisch und physiologisch mittels Immunfluoreszenzmikroskopie und Elektrophysiologie unterscheiden. Diese Methode kann helfen, zentrale Fragen auf dem Gebiet der synaptischen Physiologie in Bereichen wie Muskelermüdung, synaptische Depression und synaptische Kreuzkommunikation zu beantworten. Das Experiment beginnt damit, die Krebse vorsichtig unter Vermeidung seiner Scheren aufzuheben.Trennen Sie das Bein am Isiopod-Segment vom Körper ab. Ein kräftiger Druckreiz am Isiopod-Segment führt dazu, dass die Krebse ihr erstes Laufbein automatisch abwerfen. Die Krebse hören auf zu bluten und werden anschließend in ihren Aufbewahrungstank zurückgebracht.Die Krebs wird nicht geopfert. Legen Sie das Bein auf ein Stück Filterpapier, damit die Präparation beim Durchführen der Schnitte leicht gedreht werden kann. Drehen Sie das Bein so lange, bis die Außenseite, also die laterale Seite, auf der Präparationsplatte nach oben zeigt.Dies hat im Allgemeinen die gewölbte Seite nach oben gerichtet. Mit einer scharfen Rasierklinge, die an einem Skalpellklingenbrecher befestigt ist, die Kutikula innerhalb des Meite-Segments entlang des in der Abbildung gezeigten Musters ritzen. Achten Sie darauf, beim dorsalen bis ventralen Schnitt entlang des Meite-Carpod-Gelenks nicht zu weit distal zu schneiden.Dieser Schnitt erzeugt ein Fenster im Meiten über den darunterliegenden Beinmuskeln. Lassen Sie die Cuticula vorerst an Ort und Stelle. Legen Sie das Präparat in eine Präparierschale, die physiologische Salzlösung für Krebse enthält.Bringen Sie an dieser Stelle mit feinen Pinzette eine Nadel in die Mitte des Carpod-Segments und in den dorsalen Bereich des Ischia-pod-Segments an, heben Sie das im Cuticula-Abschnitt ausgeschnittene Fenster leicht am distalen Ende an und schneiden Sie mit dem Rasiermesser die Flexormuskelfasern von der Cuticula ab. Setzen Sie den Schnitt von distal nach proximal fort und heben Sie schließlich das Cuticula-Fenster vollständig ab. Um den Extensormuskel freizulegen, muss der überlagernde Flexormuskel entfernt werden.Trennen Sie die Sehne des Flexormuskels, indem Sie sie mit einer Nadel vom Flexormuskel lösen. Schneiden Sie dann die Sehne am Carpometacarpal-Gelenk durch. Wie dargestellt, ziehen Sie die Sehne vor dem Durchtrennen vorsichtig von der Beinhöhle weg und achten Sie darauf, ausschließlich die Sehne und nicht den Hauptnerv des Beins zu durchtrennen, der sich an der Innenseite der Sehne befindet.Den Sehnenansatz mit der Pinzette an der Schnittstelle ergreifen und den Flexormuskel durch Anheben in Richtung Coddle von dem Bein lösen. Um den Nerv zum Extensormuskel freizulegen, den Hauptbeinnerv am Meropod-Carpod-Gelenk durchtrennen und den Hauptbeinnerv vorsichtig über den Extensormuskel zurückziehen. Die Trennung des Nervs zum Extensormuskel vom Hauptbeinnerv kann verbessert werden, indem der distale Stumpf des Hauptbeinnervs sanft zur Seite der Präparation gezogen wird. Beim Zurückklappen des Hauptbeinnervs über den Extensormuskel müssen gegebenenfalls kleine Äste des inhibitorischen Axons durchtrennt werden.Das Nervenbündel kann mit Methylenblau-Färbung sichtbar gemacht werden. Allerdings würde Methylenblau für elektrophysiologische Ableitungen in diesem oberen Bild nicht verwendet werden. Rote Pfeile markieren die gewünschte Nervenbahn.Das Nervenbündel von Interesse ist das größere Bündel, das sich vom Hauptnerv des Beins in der Nähe des proximalen Endes des Meropods abzweigt. Beachten Sie die Axonverzweigungen und die beiden leicht sichtbaren Axone innerhalb des Nervs. Nachdem nun der Nerv und der Muskel freigelegt sind, bereiten Sie die Versuchsapparatur vor. Die intra- und extrazellulären Ableitungen werden mit einer Standard-Vorstufe und einem Verstärker durchgeführt. Wir verwenden einen Axon-Clamp-Zwei-B-Verstärker und eine Ein-XLU-Vorstufe. Es werden drei Elektroden benötigt, eine intrazelluläre und zwei extrazelluläre.Die beiden extrazellulären Elektroden dienen zur Reizung des Nervs und zur Aufzeichnung synaptisch hervorgerufener sowie spontaner qual-Ereignisse. Polieren Sie die Fokalelektroden durch Feuer und biegen Sie sie leicht über einer Heizvorrichtung. Nachdem eine Fokalelektrode mit physiologischer Kochsalzlösung gefüllt wurde, setzen Sie sie in den Halter für die Stimulations-Elektrode ein und führen den Stimulationsdraht so ein, dass er die Salzlösung berührt.Dies wird mit einer Gras-P-15-Stimulationsisolations-Einheit verbunden, die wiederum mit einem S-88-Gras-Stimulator verbunden ist. Während der elektrophysiologischen Ableitungen wird der Vitalfarbstoff D-2-ASP verwendet, um die Axone zum Anfärben der Axone sichtbar zu machen; tauschen Sie die Bad-Physiologische Salzlösung gegen eine Salzlösung, die fünf Mikromolar D-2-ASP-Farbstoff enthält, für fünf Minuten aus. Nach fünf Minuten füllen Sie die Petrischale erneut mit physiologischer Salzlösung für Krebse, stellen das Präparat unter ein Mikroskop und verwenden ein Forex-Objektiv.Und bei 10x Okular das stimulierende Elektrodenspitze in den interessierenden Bereich bewegen. Der nächste Schritt besteht darin, das Lumen der makroskopischen Patch-Stimulations-Elektrode entweder auf die phasische oder die tonische Axon zu platzieren. Diese Fotografie einer Vierfarben-Zwei-Farbstoff-Präparation zeigt, dass das tonische Axon aufgrund des erhöhten Mitochondriengehalts heller sichtbar ist.Die tonischen Endigungen weisen unter der Fluoreszenzmikroskopie zahlreiche Varikositäten auf, während die phasischen Endigungen dünner sind. Mit dem 20x-Objektiv wird die Elektrode entweder auf das tonische oder phasische Axon platziert. Hier wird die Elektrode auf das tonische Axon gesetzt.Platzieren Sie die intrazelluläre Elektrode in ihren Mikromanipulator und führen Sie die intrazelluläre Elektrode in eine Streckermuskelzelle ein. Damit werden intrazelluläre exzitatorische postsynaptische Potentiale oder EPSPs aufgezeichnet. Zur Aufzeichnung qualitativer EPSPs.Platzieren Sie die zweite fokale Elektrode in einen Mikromanipulator. Dies erfolgt, indem die vorherige intrazelluläre Elektrode und der Halter entfernt und durch einen sauberen Elektrodenhalter ersetzt werden. Verwenden Sie den Mikromanipulator, um das Lumen der zweiten fokalen Elektrode direkt über eine synaptische Varikosität zu positionieren.Die Elektroden- und Dichtungswiderstände werden bestimmt, indem Teststromimpulse durch die Elektrode geleitet werden. In unseren Experimenten lagen die Dichtungswiderstände zwischen 0,3 und einem Megaohm und die Elektrodenwiderstände zwischen 0,5 und einem Megaohm. Der Megaohm-Dichtungswiderstand kann während der gesamten Aufzeichnung überwacht werden.Wenn Sie bereit sind, die Stimulation zu beginnen, schalten Sie die Scope-5.0-Software ein und beginnen Sie mit der Stimulation des isolierten Axons. Im Nervenbündel wird das tonische Axon durch die Saugnade stimuliert, und die EPSPs der Muskelzelle werden mittels einer intrazellulären oder extrazellulären Elektrode aufgezeichnet. Die EPSPs werden über eine PowerLab-Forest-Schnittstelle auf einen Computer aufgezeichnet.Nach der Reizung des tonischen Axons kann die Stimulationsnadel auf das phasische Axon verschoben und das Experiment nach Nervenreizung wiederholt werden. Die intrazelluläre Elektrode zeichnet EPSPs auf, die als Antwort auf die Aktivität sowohl der tonischen als auch der phasischen Motoneurone entstehen. Die synaptische Facilitation der tonischen neuromuskulären Verbindungen hängt von der Frequenz der Nervenreizung ab, wie hier für aufeinanderfolgende Reizserien von jeweils etwa 20 Reizen bei einer Frequenz von 60 Hertz gezeigt.Beachten Sie die Erleichterung, die bei mehrfachen Reizen auftritt. Diese Abbildung vergleicht die Amplituden der durch Reizung des tonischen Nervs erzeugten EPSPs bei Frequenzen von 20 Hertz in Blau, 40 Hertz in Grün und 60 Hertz in Rot; beachten Sie die deutliche Erleichterung, die bei höheren Reizfrequenzen sichtbar ist. Tonische Endigungen weisen eine geringe synaptische Wirksamkeit auf, zeigen jedoch dramatische erleichterte Antworten.Hier sind die tonischen EPSPs allein dargestellt, und anschließend werden die phasischen Antworten im gleichen Maßstab überlagert. Im Gegensatz zu den tonischen Endigungen weisen die phasischen Endigungen eine hohe Qual-Effizienz auf, zeigen jedoch synaptische Depression bei hochfrequenter Stimulation. Die synaptische Depression an den phasischen Endigungen hängt ebenfalls mit der Reizfrequenz zusammen, wie hier gezeigt.Eine kontinuierliche Stimulation mit fünf Hertz über 30 Minuten hinweg unterdrückt die Antwort an der neuromuskulären Verbindung. Bei höherer Stimulationfrequenz wird das Präparat schneller unterdrückt, sofern die Stimulation angemessen ist. Die neuromuskuläre Verbindung der Krebse erzeugt nicht-aktionspotenzialbildende EPSPs.Diese EPSPs können verwendet werden, um die qualitativen Eigenschaften zu untersuchen, die die graduellen elektrischen Signale in diesen Muskeln ausmachen. Hier sind die qualitativen synaptischen Antworten des tonischen Endknopfes dargestellt. Beachten Sie, dass nicht alle Stimulationsdurchläufe zu einem qualitativen Ereignis führen.Die direkte Zählung von quantalen Ereignissen ist bei schwacher Reizung für jede evozierte Antwort möglich. Die Anzahl quantaler Ereignisse kann leicht für die tonischen Endigungen bestimmt werden. Durch die Zählung quantaler Ereignisse können die synaptischen Antworten des phasischen Motoneurons auf die gleiche Weise aufgezeichnet werden.Allerdings sind die hervorgerufenen Antworten mehrfacher Natur. Der mittlere Qual-Gehalt wird geschätzt, indem die mittlere Amplitude oder Fläche der Ausschläge zusammen mit der durchschnittlichen Spitzenamplitude oder Fläche spontaner Ereignisse verwendet wird. Ein letzter Hinweis: Seien Sie vorsichtig beim Entfernen des Flexormuskels, um den Nerv, der auf den Extensormuskel wartet, nicht zu beschädigen.Das war's. Vielen Dank fürs Zuschauen und viel Erfolg bei Ihren Experimenten.

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Neuroscience

Neurowissenschaften

Hier beschreiben wir elektrophysiologische Methoden zur Messung der synaptischen Transmission an der neuromuskulären Synapse von Drosophila Larve. Evozierte Freisetzung wird künstlich durch die Stimulierung der Motoneuronen Axone initiiert, und die Übertragung durch die NMJ kann durch die postsynaptische Reaktion im Muskel ausgelöst gemessen werden.

Elektrophysiologischen Methoden für die Aufzeichnung Synaptic Potentials aus dem NMJ von Drosophila-Larven

Die Anwendung der Elektrophysiologie, barrierefreie Synapsen eine quantifizierbare Messung der synaptischen Aktivität, nützlich bei der Analyse synaptischer Mutanten. Dieser Artikel beschreibt ein Dissektion Methode verwendet, um die motorischen Endplatten (NMJ) von...

Dissecting und Aufnahme von C. elegans neuromuskulären Synapse

Nicht-invasive Messungen der neuronalen Aktivitätsmuster in frei lebenden Tier werden durch die Kombination neurophysiologischen Aufnahmen mit hoher Geschwindigkeit Videografie erhalten.

Recordings of Neural Circuits Aktivierung in Frei Behaving Tiere

Der Opener Muskeln des Krebses Bein ist bekannt für seine historische Bedeutung und experimentelle Vielseitigkeit in Muskel-Phänotyp, synaptischen Physiologie und Plastizität vorgestellt.

Historische Ansicht und Physiologie Demonstration am NMJ der Crayfish Opener Muscle

Die Experimente zeigen, eine einfache Möglichkeit für Studenten, um Erfahrungen bei der Prüfung Muskulatur, synaptische Antworten, die Auswirkungen der Ionengradienten und Durchlässigkeit auf Membranpotentiale zu gewinnen. Auch ist ein sinnlich-ZNS-motor-Muskel-Schaltung vorgestellt, um ein Mittel, um Wirkungen von Verbindungen auf einem neuronalen Schaltkreis-Test zeigen.

Membranpotentiale, Synaptic Responses, neuronalen, Neuromodulation und Muscle Histologie Mit dem Crayfish: Schülerlabor Übungen

Der primäre Zweck dieses Experiments ist zu verstehen, wie primären sensorischen Neuronen Informationen gemeinsamer Bewegungen und Positionen als propriozeptive Informationen für ein Tier zu vermitteln. Ein weiteres Ziel dieses Berichts ist gegenwärtig die Anatomie der Vorbereitung durch Dissektion und Betrachten von Neuronen unter einem Binokular.

Muscle-Rezeptor-Organe in der Crayfish Abdomen: Ein Schülerlabor Übung in Propriozeption

Dieses neue Verfahren erlaubt die gleichzeitige intrazelluläre Aufnahme eines einzigen erwachsenen Maus Motoneuron und die Messung der Kraft, die von seiner Muskelfasern hergestellt. Die kombinierte Untersuchung der elektrischen und mechanischen Eigenschaften der Motoreinheiten in normalen und genetisch modifizierten Tieren ist ein Durchbruch für das Studium des neuromuskulären Systems.

Gleichzeitige Intrazelluläre Aufnahme eines Lumbar Motoneuron und dem Force durch seine Motor Unit in der adulten Maus Produziert<em&gt; In vivo</em

Physiologischen und anatomischen Techniken werden gezeigt, Funktion und Struktur für die gemeinsame Propriozeptoren und Muskelspannung Rezeptoren in Krebstier Fuß Gliedmaßen zu adressieren.

Propriozeption und Spannungsrezeptoren in Crab Gliedmassen: Schülerlabor Übungen

Muskel sensorischen Neuronen sind in proprioceptor Signalübertragung beteiligt und auch auf Stoffwechselzustand und Verletzungen bezogene Ereignisse zu berichten. Wir beschreiben einen erwachsenen Maus in vitro Muskel-Nerven Vorbereitung für Studien über Stretch-aktivierte Muskel Afferenzen.

Ein In-vitro- Adult Maus Muskel-Nerven Vorbereitung für das Studium der Brenneigenschaften des Muskel-Afferenzen

Eine funktionale Bewertung der neuromuskulären Synapse (NMJ) kann wesentliche Informationen über die Kommunikation zwischen Muskeln und Nerven. Hier beschreiben wir ein Protokoll, um die NMJ und Muskel Funktionalität mit zwei verschiedenen Muskel-Nerv-Präparate, d.h. Soleus-Ischias und Membran-Phrenicus umfassend zu bewerten.

Neuromuskuläre Synapse Messfunktionalität

Präsentiert wird ein Protokoll, um verschiedene Arten von Mediannerven (MN) Läsionen und Reparatur in der Ratte zu produzieren. Darüber hinaus zeigt das Protokoll, wie die funktionelle Erholung des Nervs anhand mehrerer nichtinvasiver Verhaltenstests und physiologischer Messungen bewertet werden kann.

Funktionelle und physiologische Methoden zur Beurteilung der medianen Nervenregeneration in der Ratte

Erfahren Sie elektrophysiologische Aufnahmen von synaptischen Antworten am Streckmuskel des Krebsbeins. Diese Methode ermöglicht die Unterscheidung phasischer und tonischer motorischer Nervenendigungen durch Färbung und intrazelluläre Ableitungen.

Physiologische Aufnahmen von High-und Low Output NMJs auf der Crayfish Leg Streckmuskel

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