Ultrastrukturelle Analyse der Demyelinisierung in Querschnitten des Rückenmarks von Mäusen

Gewinnung von chemisch fixiertem Rückenmarksgewebe von Mäusen, die zu definierten Zeitpunkten während des Fortschreitens der Erkrankung mit autoimmuner Demyelinisierung induziert wurden.

Die Krankheit löst autoreaktive Immunzellen aus, die Myelinproteine angreifen und die Myelinscheide, die die neuronalen Axone umgibt, abbauen.

Oligodendrozyten-Vorläuferzellen werden an die betroffene Stelle rekrutiert, reifen zu Oligodendrozyten heran und bilden die Myelinscheide neu.

Spülen Sie das Gewebe mit einem Puffer ab, um überschüssiges Fixiermittel zu entfernen, und behandeln Sie es dann mit Osmium, das an Myelinlipide bindet und den Kontrast für die Bildgebung erhöht.

Tragen Sie Schwermetallflecken auf, die sich an Makromoleküle binden und den Kontrast verstärken.

Entwässern Sie das Gewebe mit steigenden Alkoholkonzentrationen. Nehmen Sie das in Harz eingebettete Gewebe und erhalten Sie ultradünne Schnitte.

Messen Sie mit Hilfe der Elektronenmikroskopie die Dicke der Myelinscheide, um Axone als demyelinisierend mit einer geschwollenen, dickeren Scheide, demyelinisiert ohne Scheide oder remyelinisierend mit einer dünnen Scheide zu klassifizieren.

Identifizieren Sie axonale Schäden, die durch verringerte Abstände zwischen Neurofilamenten und geschwollene Mitochondrien oder vollständige Degeneration gekennzeichnet sind.

Analysieren Sie das Fortschreiten der axonalen Schädigung und Reparatur im Laufe der Zeit, um das Fortschreiten der Krankheit zu beurteilen.