JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 1:25 Min. • March 4th, 2025
Nehmen Sie fixierte Sehnervenschnitte von einer Kontrollratte und einer Ratte mit Sehnervenverletzung.
Die Kontrollsektion zeigt Axone mit dicht gepackten Myelinscheiden, die konzentrische Plasmamembranschichten enthalten. Der verletzte Abschnitt weist ein dekompaktiertes Myelin mit großen Lücken auf.
Inkubieren Sie mit einem Osmium-Ferrocyanid-Komplex, der an Lipide bindet und den Kontrast der Myelinscheide erhöht.
Mit Thiocarbohydrazid behandeln, um zusätzliche Bindungsstellen für Osmium zu schaffen.
Tragen Sie Osmium erneut auf, um den Lipidkontrast weiter zu verbessern.
Färben Sie mit Schwermetallen, die an Makromoleküle binden und den strukturellen Kontrast verstärken.
Dehydrieren Sie mit zunehmender Alkoholkonzentration und spülen Sie es mit Aceton ab, um das Harz einzubetten.
Betten Sie das Gewebe in Harz ein und beschichten Sie das Harz mit Gold, um die Bildqualität zu verbessern.
Verwenden Sie die serielle Blockflächen-Rasterelektronenmikroskopie, um gleichzeitig zu schneiden und abzubilden. Fokussieren Sie den Elektronenstrahl auf die Oberfläche und detektieren Sie die rückgestreuten Elektronen, um Bilder zu erzeugen.
Myelinscheiden erscheinen dunkel, während Räume innerhalb beschädigter Scheiden heller erscheinen, was eine Unterscheidung zwischen normalem und geschädigtem Myelin ermöglicht.