Name: Peptide aus Phage Display Bibliothek Genexpression modulieren in mesenchymalen Zellen und potenzieren Osteogenesis in unikortikale Knochendefekten (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-12-10T17:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 53 s
Description: Erfahren Sie, wie Phage-Display-Technologie Peptide identifiziert, die mesenchymale Zelldifferenzierung fördern und Knochenreparatur in unikortikalen Defekten potenzieren. Diese Methode liefert wertvolle Einblicke in regenerative Therapien.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

National Institutes of Health, AR53579, Osteogenesis: Eine Verstärkung mit Bone Tropic Peptides National Institutes of Health, AR056422, anabole Wirkung osteogene Peptide National Institutes of Health, T32 AR050960, Muskel-Skelett-Tissue Repair and Regeneration DOD, PC051219 Nucleolin: A Novel Mediator des Prostate Cancer and Bone Marrow Endothelial Cell Adhesion Department of Defense, PC061508, Prostatakrebs Metastasen Cell-Bone Marrow Haftvermittler

<ol><li>Diduch, D. R., Coe, M. R., Joyner, C., Owen, M. E., Balian, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+cell+lines+from+bone+marrow+that+differ+in+terms+of+collagen+synthesis%2C+osteogenic+characteristics%2C+and+matrix+mineralization%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Bone+Joint+Surg.+Am%22%5BJournal%5D)">Two cell lines from bone marrow that differ in terms of collagen synthesis, osteogenic characteristics, and matrix mineralization.</a> J. Bone Joint Surg. Am. 75, 92-105 (1993).</li>
<li>Stoddart, M. J., Furlong, P. I., Simpson, A. E., Davies, C. M., Richards, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viability+in+ex+vivo+cultured+cancellous%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+Cells.+Mater%22%5BJournal%5D)">Viability in ex vivo cultured cancellous.</a> Eur. Cells. Mater. 13, 69-70 (2007).</li>
<li>Lehr, J. E., Pienta, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preferential+adhesion+of+prostate+cancer+cells+to+a+human+bone+marrow+endothelial+cell+line%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Natl.+Cancer+Inst%22%5BJournal%5D)">Preferential adhesion of prostate cancer cells to a human bone marrow endothelial cell line.</a> J. Natl. Cancer Inst. 90, 118-123 (1998).</li>
<li>Schuster, N., Götz, C., Faust, M., Schneider, E., Prowald, A., Jungbluth, A., Montenarh, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wild-type+p53+inhibits+protein+kinase+CK2+activity%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biochem%22%5BJournal%5D)">Wild-type p53 inhibits protein kinase CK2 activity.</a> J. Cell Biochem. 81, 172-183 (2001).</li>
<li>Cwirla, S. E., Peters, E. A., Barrett, R. W., Dower, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peptides+on+phage%3A+a+vast+library+of+peptides+for+identifying+ligands%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">Peptides on phage: a vast library of peptides for identifying ligands.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 87, 6378-6382 (1990).</li>
<li>Doorbar, J., Winter, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+a+peptide+antagonist+to+the+thrombin+receptor+using+phage+display%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Isolation of a peptide antagonist to the thrombin receptor using phage display.</a> J. Mol. Biol. 244, 361-369 (1994).</li>
<li>Ellerby, H. M., Arap, W., Ellerby, L. M., Kain, R., Andrusiak, R., Rio, G. D., Krajewski, S., Lombardo, C. R., Rao, R., Ruoslahti, E., Bredesen, D. E., Pasqualini, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-cancer+activity+of+targeted+pro-apoptotic+peptides%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Anti-cancer activity of targeted pro-apoptotic peptides.</a> Nat. Med. 5, 1032-1038 (1999).</li>
<li>Goodson, R. J., Doyle, M. V., Kaufman, S. E., Rosenberg, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-affinity+urokinase+receptor+antagonists+identified+with+bacteriophage+peptide+display%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">High-affinity urokinase receptor antagonists identified with bacteriophage peptide display.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 91, 7129-7133 (1994).</li>
<li>Pasqualini, R., Koivunen, E., Ruoslahti, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+peptide+isolated+from+phage+display+libraries+is+a+structural+and+functional+mimic+of+an+RGD-binding+site+on+integrins%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">A peptide isolated from phage display libraries is a structural and functional mimic of an RGD-binding site on integrins.</a> J. Cell Biol. 130, 1189-1196 (1995).</li>
<li>Pasqualini, R., Koivunen, E., Ruoslahti, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alpha+v+integrins+as+receptors+for+tumor+targeting+by+circulating+ligands%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Alpha v integrins as receptors for tumor targeting by circulating ligands.</a> Nat. Biotechnol. 15, 542-546 (1997).</li>
<li>Pasqualini, R., Koivunen, E., Kain, R., Lahdenranta, J., Sakamoto, M., Stryhn, A., Ashmun, R. A., Shapiro, L. H., Arap, W., Ruoslahti, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aminopeptidase+N+is+a+receptor+for+tumor-homing+peptides+and+a+target+for+inhibiting+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Aminopeptidase N is a receptor for tumor-homing peptides and a target for inhibiting angiogenesis.</a> Cancer Res. 60, 722-727 (2000).</li>
<li>Rajotte, D., Arap, W., Hagedorn, M., Koivunen, E., Pasqualini, R., Ruoslahti, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+heterogeneity+of+the+vascular+endothelium+revealed+by+in+vivo+phage+display%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Molecular heterogeneity of the vascular endothelium revealed by in vivo phage display.</a> J. Clin. Invest. 102, 430-437 (1998).</li>
<li>Rajotte, D., Ruoslahti, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Membrane+dipeptidase+is+the+receptor+for+a+lung-targeting+peptide+identified+by+in+vivo+phage+display%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Membrane dipeptidase is the receptor for a lung-targeting peptide identified by in vivo phage display.</a> J. Biol. Chem. 274, 11593-11598 (1999).</li>
<li>Wang, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+high-affinity+peptide+antagonists+of+14-3-3+proteins+by+phage+display%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Isolation of high-affinity peptide antagonists of 14-3-3 proteins by phage display.</a> Biochemistry. 38, 12499-12504 (1999).</li>
<li>Sugahara, K. N., Teesalu, T., Karmali, P. P., Kotamraju, V. R., Agemy, L., Greenwald, D. R., Ruoslahti, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coadministration+of+a+tumor-penetrating+peptide+enhances+the+efficacy+of+cancer+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Coadministration of a tumor-penetrating peptide enhances the efficacy of cancer drugs.</a> Science. 328, 1031-1035 (2010).</li>
<li>Sikes, R. A., Cooper, C. R., Beck, G. L., Pruitt, F., Brown, M. L., Balian, G. Bone Stromal Cells as Therapeutics Targets in Osseous Metastasis. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSikes%2C+RA+%22Cancer+Growth+and+Progression.+%22Integration%2FInteraction+of+Oncologic+Growth%22%22">Cancer Growth and Progression. "Integration/Interaction of Oncologic Growth"</a>. Meadows, G., Kluwer, K. H. , Academic Publishers. Boston, MA. 369-386 (2005).</li>
<li>Santos, J. L., Pandita, D., Rodrigues, J., Pêgo, A. P., Granja, P. L., Tomás, H., Balian, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Receptor-Mediated+Gene+Delivery+in+Mesenchymal+Stem+Cells+using+PAMAM+Dendrimers+conjugated+with+Osteotropic+Peptides%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Pharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Receptor-Mediated Gene Delivery in Mesenchymal Stem Cells using PAMAM Dendrimers conjugated with Osteotropic Peptides.</a> Molecular Pharmaceutics. , Forthcoming (2010).</li>
</ol>

Die Produktion dieses Video wurde von New England Biolabs, Inc., die einige der Reagenzien in diesem Artikel verwendet produziert gesponsert.

<table><tbody><tr><td>Kits für Phagen-Display-Peptidbibliothek – Ph.D-12</td><td>New England Biolabs</td><td>E8110S</td><td></td></tr></tbody></table>

peptide aus phage display bibliothek genexpression modulieren in mesenchymalen zellen und potenzieren osteogenesis in unikortikale knochendefekten

Peptides from Phage Display Library Modulate Gene Expression in Mesenchymal Cells and Potentiate Osteogenesis in Unicortical Bone Defects

Zwei neuartige synthetische Peptide beschleunigen Knochenbildung und können mithilfe einer Kollagen-Matrix. Das Ziel dieser Studie war es, die Auswirkungen auf die Knochenheilung in einem unikortikale Defekt-Modell zu untersuchen. Behandlung von mesenchymalen Zellen führte zu einer Zunahme der alkalischen Phosphatase-Aktivität zeigte Knöllchenbildung von den Zellen und erhöht die Expression von Genen für RUNX2, osterix, Bonesialoprotein und Osteocalcin. Ein Kollagenschwamm mit Peptid gefördert Reparatur von Knochendefekten getränkt, während die Kontrolle war weniger wirksam. Die Ergebnisse aus dieser Studie zeigten, dass mesenchymale Zellen mit Peptid in vitro behandelt Richtung Osteogenese zu unterscheiden, und, dass Peptide in vivo geliefert mit einem Kollagenschwamm die Reparatur von unikortikale Mängel zu fördern.

Eine Phagen-Display-Bibliothek verwendet wurde, um Peptidsequenzen, die auf Knochen zu identifizieren. Das Ziel war, die Wirkung dieser Peptide auf mesenchymale Zelldifferenzierung zu untersuchen und ihre Wirkung auf die Knochenregeneration zu bestimmen.

Peptide aus Phage Display Bibliothek Genexpression modulieren in mesenchymalen Zellen und potenzieren Osteogenesis in unikortikale Knochendefekten

Zwei neuartige synthetische Peptide beschleunigen die Knochenbildung und können mithilfe einer Kollagenmatrix appliziert werden. Ziel dieser Studie war es, die Auswirkungen ...

Das übergeordnete Ziel dieses Experiments besteht darin, Sequenzen zu identifizieren, die die Differenzierung mesenchymaler Zellen verstärken und die Knochenreparatur fördern. Der erste Schritt ist die Isolierung mittels Biop-Panning des Phagen, der an Knochen bindet. Anschließend werden die Peptidsequenzen identifiziert, die an mesenchymale Zellen binden, und es werden die darauffolgenden Veränderungen in der Genexpression bestimmt.Führen Sie Experimente durch, um zu bestimmen, wie die Peptidsequenzen zu Knochen für regenerative Zwecke gebracht werden können. Als letzten Schritt untersuchen Sie die Knochenreparatur histologisch; zusammen genommen können die Ergebnisse wichtige Einblicke in die Mechanismen der Zelldifferenzierung in vitro und der Knochenreparatur in vivo liefern. Die Vorteile der Verwendung der Biop-Panning-Technik mit einer Phagen-Display-Bibliothek bestehen darin, dass wir Peptide identifizieren konnten, die gezielt Knochen ansprechen und zur Stimulation der Differenzierung mesenchymaler Zellen sowie zur Potenzierung der Knochenreparatur eingesetzt werden können.Schließlich könnten diese Peptidsequenzen in therapeutischen Modalitäten zur Knochenreparatur und zur Behandlung von Knochenschwund wie Osteopenie und Osteoporose nützlich sein. Auf der Grundlage einer Studie, in der ULA und Pascal zeigten, dass mittels biop-Panning Peptidsequenzen isoliert werden können, die auf Blutgefäße abzielen, entschieden wir uns, diese Methode anzupassen, um Mechanismen im Knochen zu untersuchen. Für das in-vivo-Biop-Panning-Verfahren wurden 10-mal 10 hoch 10 Plaque-bildende Einheiten der N-E-B-P-H-D-12-Phagen-Display-Peptidbibliothek durch das Herz einer 10 Wochen alten BALB/c-Maus perfundiert.Nach ungefähr fünf Minuten das Mäuschen euthanisieren, die Femora freilegen und dissezieren, die Enden abschneiden und das Knochenmark entfernen. Den linken Femur innen und außen zehnmal mit PBS spülen. Anschließend den Knochen zu den ER 2 5 3 7-Bakterien geben.Um nicht gebundene Phagen zu entfernen, verwenden Sie 2 % fettfreie Milchpulver, die mit einer 21-Gauge-Nadel in einer Spritze enthalten ist, um das intermediäre Kanal des rechten Femurs 10-mal zu spülen. Eluieren Sie nun die gebundenen Phagen aus dem intermediären Kanal mit Glycin-Puffer, pH 2,2, der mit einer Mol Tris-Pufferlösung neutralisiert wurde.Um den Phagen zu amplifizieren, geben Sie EIT zu ER 2 5 3 7-Bakterien hinzu und kultivieren Sie diese 4,5 Stunden lang. Überführen Sie das Überstandsmaterial vorsichtig in frische Röhrchen und fallen Sie den Phagen dreimal durch Zugabe von Polyethylenglykol aus. Fügen Sie Natriumchloridlösung hinzu und inkubieren Sie die Röhrchen über Nacht bei vier Grad Celsius.Schließlich das Pellet in TBS mit 0,02 % Natriumazid resuspendieren. Die Phagen auf Platten aufplattieren, um die Plaque-bildenden Einheiten der amplifizierten EITs zu bestimmen. Wiederholen Sie das In-vivo-Bio-Panning-Verfahren für die eluierten und nicht eluierten Phagen jeweils viermal.Amplifizieren Sie gepoolten Phagen in bakteriellen Kulturen. Reinigen und quantifizieren Sie die DNA-Sequenz, die endgültige Phagen-DNA, unter Verwendung des mit dem Phagen-Display-Kit bereitgestellten Primers 98. Berechnen Sie wichtig die Häufigkeit der Repräsentation der Phagen-DNA-Sequenz. Synthetisieren Sie nun Peptide, die eine Glycin-Glycin-Glycin-Serin-Lysin-Sequenz enthalten, und amplifizieren Sie D1-Zellen, eine in unserem Labor etablierte, geklonte, multipotente Zelllinie aus murinem Knochenmark-Stromal, die bei 90 % Konfluenz vorlag. Behandeln Sie die Zellen mit Trypsin, zentrifugieren Sie, um ein Zellpellet zu erhalten, und zählen Sie die Zellen, um sie für die Peptidfärbung auf mit Gelatine beschichteten Kammerobjektträgern zu plattieren und 24 Stunden lang zu kultivieren.Waschen Sie die Zellen mit PBS und fixieren Sie sie 30 Minuten lang mit 4 % Paraldehyd. Führen Sie nun Blockierungsinkubationen mit Glycin, gefolgt von BSA Aden und BBSA, sowie Biotin-Blockierungslösungen durch.Fügen Sie 100 µM biotinylierte L7- und R1-Peptide hinzu. Waschen Sie die Zellen anschließend dreimal mit PBS, jeweils fünf Minuten lang. Geben Sie eine 1:1000-Verdünnung von LOR Stripping Cover zu und bedecken Sie das Gefäß mit Aluminiumfolie. Inkubieren Sie es 30 Minuten lang in einer dunklen Schublade.Waschen Sie die Zellen und montieren Sie die Deckgläser mit Vector Shield Montagemedium. Analysieren Sie die Präparate nun 24 Stunden vor der Operation unter einem Fluoreszenzmikroskop. Weichen Sie die Gelatineschwämme ein.Überführen Sie die Gel-Schaum-Zylinder mit 20 Mikromolar Peptid, entweder L sieben oder R eins, oder PBS-Puffer ohne Peptid in sterile 12-Loch-Kulturschalen und lagern Sie sie über Nacht bei vier Grad Celsius bis zum Zeitpunkt der Operation. Bewahren Sie den Gel-Schaum-Verbund bis zur Verwendung auf Eis auf.Erstellen Sie mithilfe eines pneumatischen Bohrers unter Spülung mit Kochsalzlösung einen großen, ovalen, unikortikalen Defekt mit einer Breite von drei Millimetern und einer Länge von acht Millimetern. Behandeln Sie den Knochendefekt mit vorbereiteten Gelatineschwämmen, indem Sie alle implantierten Scaffolds vorsichtig eintippen. Töten Sie die Ratten aus und sammeln Sie die Tibiae zu definierten Zeitpunkten, überprüfen Sie sorgfältig den Knochendefekt und fixieren Sie die gewonnenen Tibiae in 10 % neutral gepufferter Formalinlösung zur Paraffineinbettung.Färben Sie abschließend alle Gewebeschnitte mit Hämatoxylin-Eosin, um die osteo-matrix zu markieren. Mit Fluorescein-isothiocyanat-markiertes Aden ermöglicht die mikroskopische Detektion der Bindung von Peptiden an in vitro kultivierte Zellen. Hier binden die Peptide an mesenchymale Zellen in Kultur, um die osteogene Wirkung der Peptide auf Zellen zu bestimmen.Mesenchymale Zellen in Kultur können in vitro mit Testpeptiden behandelt werden, um Veränderungen in der Zellmorphologie zu untersuchen. Beispielsweise beginnen die Zellen am vierten Tag zu aggregieren, und die Aggregate vergrößern sich im Laufe der Zeit, um Knötchen zu bilden. Interessanterweise zeigt ein mit H und E gefärbter Knochenabschnitt Autofluoreszenz unter UV-Licht.Dieser größere Kontrast zwischen Knochen- und Nicht-Knochengewebe erleichtert Analysen, die den Knochenanteil in den Schnitten quantifizieren, um die Knochenreparatur in den mit Gelfoam plus Peptid behandelten Defekten zu bestimmen. Im Vergleich zu Gelfoam allein zeigten hier Defekte, die mit Peptid gefüllt wurden, im Zeitverlauf die stärkste kortikale Reparatur. Bei der Durchführung dieses Verfahrens ist es wichtig, bei der Dateneingabe äußerst methodisch vorzugehen, da im Laufe der Zeit zwangsläufig eine große Anzahl von Proben anfällt, bis die endgültige Gruppe der Peptide ausgewählt ist.Die Entwicklung des in-vivo-Biop-Pannings als Methode zur Identifizierung von Peptiden, die gezielt Knochen ansteuern, bedeutet, dass wir nun potenzielle Wirkstoffe haben, die als Therapie zur Knochenreparatur und bei Knochenschwund eingesetzt werden könnten. Einer der Mechanismen, die der Knochenreparatur zugrunde liegen, ist ebenfalls an Knochenschwund beteiligt. Ein detaillierteres Verständnis dieser Mechanismen sowie die Verfügbarkeit von Werkzeugen, die zur Behandlung von Erkrankungen wie verzögerten Frakturen und Osteoporose eingesetzt werden könnten, wird dazu beitragen, die Therapien zu verbessern, die für die Gesundheitsversorgung entwickelt werden können.

peptides-from-phage-display-library-modulate-gene-expression

Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Die Differenzierung von Vorläuferzellen in Osteoklasten wird durch Zytokine und Wachstumsfaktoren reguliert. Hier werden eine neuartige Gentransfertechnik zur Differenzierung von Osteoklasten in vivo und Zellkulturprotokolle zur Differenzierung von Vorläuferzellen in Osteoklasten in vitro als Methode zur Untersuchung der Auswirkungen von Zytokinen auf die Osteoklastogenese beschrieben.

A Novel In vivo Gentransfer-Technik und In-vitro- Zellbasierte Assays für das Studium der Knochenverlust in Skeletterkrankungen

Hier präsentieren wir ein Protokoll zur Blutgefäß Bildung in Vivo zu visualisieren und in Echtzeit in 3D Gerüste multiphoton Mikroskopie. Angiogenese in gentechnisch veränderten Gerüste wurde in einem murinen calvarial kritische Knochen-defekt-Modell untersucht. Mehr neue Blutgefäße waren in der Behandlungsgruppe als Kontrollen erkannt.

Visualisierung von Angiogenese durch Multiphoton Mikroskopie In Vivo in gentechnisch veränderten 3D-PLGA/nHAp Gerüst für Calvarial kritische Knochen defekt Reparatur

Biomaterialien, dotiert mit Knochen morphogenetische Protein-2 (BMP2) wurden als neue therapeutische Strategie zur Pseudarthrose Knochenbrüche zu heilen. Um Nebenwirkungen durch eine unkontrollierbare Freigabe des Faktors zu überwinden, schlagen wir eine neue Strategie zur Website-Faktors, wodurch Materialien mit verbesserten osteogene Funktionen direkt zu immobilisieren.

Site-verwiesene Immobilisierung von Knochen morphogenetische Protein 2 an feste Oberflächen durch Click-Chemie

Wir präsentieren Ihnen ein Protokoll, um die mRNA Ausdruck Biomarker der Knochenhaut-abgeleitete Zellen (PDCs) durch Vitamin C (Vitamin C) und 1,25-Dihydroxy Vitamin D [1,25-(OH)2D3] induzierte untersuchen. Darüber hinaus bewerten wir die Fähigkeit des PDCs, in Osteozyten, Chondrozyten und Adipozyten differenzieren.

Isolierung von mesenchymalen Stammzellen aus menschlichen alveoläre Periost und Effekte von Vitamin D auf knochenbildenden Aktivität Periost-abgeleitete Zellen

Wir präsentieren Ihnen ein Protokoll, um den Zustand der Mineralien in Vesikeln veröffentlicht von zwei menschlichen Knochen Zelllinien zu vergleichen: hFOB 1,19 und Saos-2. Ihre Mineralisierung Profile wurden von Alizarin rot-S (AR-S) Färbung, ultravioletten (UV) Licht Visualisierung, Übertragung Elektronenmikroskopie (TEM) Bildgebung und Energie dispersiven Röntgen-Mikroanalyse (EDX) analysiert.

Analyse der Mineralien von hFOB 1.19 produziert und Saos-2 Zellen mittels Transmissions-Elektronenmikroskopie mit Energy Dispersive x-ray Mikroanalyse

Hierin präsentieren wir ein detailliertes Protokoll zum Screening kleiner Peptide, die mit einer Phagenanzeige-Peptidbibliothek an FGFR2 binden. Wir analysieren weiter die Affinität der ausgewählten Peptide zu FGFR2 in vitro und seine Fähigkeit, die Zellproliferation zu unterdrücken.

Screening und Identifizierung von kleinen Peptiden Targeting Fibroblast Growth Factor Receptor2 mit einem Phage Display Peptid Bibliothek

Dieses Protokoll beschreibt eine kanonische Methode, um die kritischen Gene zu verstehen, die die Osteoklastaktivität in vivo steuern. Diese Methode verwendet ein transgenes Mausmodell und einige kanonische Techniken, um Skelett-Phänotyp zu analysieren.

Skelett-Phänotyp-Analyse eines bedingten Stat3-Löschmausmodells

Ubiquitinierung ist eine kritische posttranslationale Proteinmodifikation, deren Dysregulation mit zahlreichen menschlichen Krankheiten in Verbindung gebracht wurde. Dieses Protokoll beschreibt, wie die Phagenanzeige verwendet werden kann, um neuartige Ubiquitin-Varianten zu isolieren, die die Aktivität von E3-Ligasen binden und modulieren können, die die Spezifität, Effizienz und Muster der Ubiquitinierung steuern.

Verwendung von Phagenanzeige zur Entwicklung von Ubiquitin-Variantenmodulatoren für E3-Ligasen

Das Protokoll stellt eine Methode zur Isolierung von Ganzzellproteinlysaten aus sezierten Gesichtsbehandlungen von Mausembryonen oder kultivierten embryonalen palatalen Mesenchymzellen der Maus und zur Durchführung eines anschließenden Western Blotting zur Beurteilung des phosphorylierten Proteinspiegels vor.

Isolierung von Ganzzellproteinlysaten aus Gesichtsprozessen der Maus und kultivierten palatalen Mesenchymzellen für die Phosphoproteinanalyse

Hier stellen wir einen gentherapeutischen Ansatz vor, bei dem ABE-beschichtetes Chitosan durch intraossäre Injektion direkt ins Knochenmark abgegeben wird.

Verbesserte Genverabreichung und -expression durch intraossäre Injektion von Chitosan-Nanopartikeln, verkapselten Adenin-Base-Editor-Plasmiden

Erfahren Sie, wie Phage-Display-Technologie Peptide identifiziert, die mesenchymale Zelldifferenzierung fördern und Knochenreparatur in unikortikalen Defekten potenzieren. Diese Methode liefert wertvolle Einblicke in regenerative Therapien.

Peptide aus Phage Display Bibliothek Genexpression modulieren in mesenchymalen Zellen und potenzieren Osteogenesis in unikortikale Knochendefekten (Video) | JoVE Journal

Peptide aus Phage Display Bibliothek Genexpression modulieren in mesenchymalen Zellen und potenzieren Osteogenesis in unikortikale Knochendefekten

Weitere Videos entdecken