JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 1:24 Min. • August 7th, 2025
Nehmen wir biogedruckte Skelettmuskelkonstrukte.
Diese Konstrukte enthalten Fibrin-Hydrogel-Säulen mit eingebetteten Muskelfasern und Mikrosphären.
Die Mikrosphäre ist eine poröse Polymerstruktur, die neurotrophe Faktoren umschließt.
Nehmen Sie dorsale Wurzelganglien, die aus Hühnerembryonen isoliert wurden.
Platziere ein Ganglion auf jedem Konstrukt und brüte es aus.
Die neurotrophen Faktoren werden in einer kontrollierten physiologischen Konzentration aus den Mikrosphären freigesetzt, was das Sprießen von Projektionen aus den Neuronen, den Neuriten, erleichtert.
Fügen Sie ein Fixativ hinzu, um die Konstrukte zu fixieren.
Mit einem Puffer waschen und eine Blockierungslösung hinzufügen, um eine unspezifische Antikörperbindung zu verhindern.
Inkubieren Sie mit den primären Antikörpern, die spezifisch an den Neuriten binden.
Mit Puffer spülen, um ungebundene Antikörper zu entfernen.
Fügen Sie fluoreszenzmarkierte Sekundärantikörper hinzu, die an die Primärantikörper binden.
Mit Puffer waschen, um überschüssige Antikörper zu entfernen.
Montieren Sie das Konstrukt mit Einbettmedien, die einen Kernfarbstoff und ein Deckglas enthalten.
Visualisieren Sie unter einem konfokalen Mikroskop das Neuritenwachstum.